鸭致病性大肠杆菌的血清型鉴定及敏感药物的临床应用

伍 莉，陈鹏飞

（1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌402460；2.西南大学荣昌校区水产系，重庆荣昌402460）

鸭致病性大肠杆菌的血清型鉴定及敏感药物的临床应用

伍 莉1，陈鹏飞2

（1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌402460；2.西南大学荣昌校区水产系，重庆荣昌402460）

本试验对荣昌部分规模化养鸭场分离的77株致病性大肠杆菌进行药敏试验及敏感药物的临床应用。取病死雏鸭的肝脏进行大肠杆菌的分离、纯化，通过细菌的生化试验、血清型鉴定、致病性试验、药敏试验以及敏感药物的临床应用，确定分离菌的种类及致病能力的强弱。结果表明，77株大肠杆菌分属于12种血清型，小鼠致病性试验显示以O45、O92、O93和O142的致病性最强，致死率达到100%，O2的致死率最低，只有25%，其余血清型的致死率在37.5%～87.5%。分离菌株对氧氟沙星、庆大霉素、诺氟沙星和卡那霉素4种抗菌药物高敏。

致病性；大肠杆菌；药敏试验；临床应用；规模化养鸭场

大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌（Duck patho⁃genic Escherichia coli）引起的致病性疾病。本病的临床病型复杂多样，包括大肠杆菌性败血症、腹膜炎、生殖道感染、脐炎、卵黄囊感染、蜂窝织炎等多种病型。由于大肠杆菌血清型较多，抗原复杂，临床用药时应根据其分离菌特性、血清型鉴定结果及时治疗。本试验对采自2011年12月至2012年12月荣昌8个不同地区的规模化养鸭场具有典型大肠杆菌病临床症状和病理变化的雏鸭分离的77株大肠杆菌进行药敏试验及敏感药物的临床应用，为临床合理防治鸭大肠杆菌病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 病料采自2011年12月至2012年12月荣昌县8个乡镇96只疑似大肠杆菌病鸭的肝脏。

1.2 试验动物健康昆明系小鼠104只，7日龄健康花边雏鸭200羽，雌雄各半。

1.3 试剂所用培养基，由西南大学荣昌校区动物医学系提供；肠杆菌科细菌生化鉴定管（批号：120123），药敏试纸（批号：120215），由杭州天和微生物试剂有限公司提供；大肠杆菌标准抗O因子血清，由中国兽医药品监察所提供（批号：120324）；敏感药物：硫酸庆大霉素、硫酸卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星。

1.4 细菌分离鉴定病料分别接种于普通营养平板、麦康凯平板，置37℃培养24 h，涂片，革兰染色镜检。挑取培养基上的单个典型菌落，依次接种于麦康凯平板、肉汤培养基进行纯培养。

1.5 生化试验取纯培养菌落接种肉汤培养基，37℃培养，按常规方法进行生化试验15项［1］。

1.6 血清型鉴定大肠杆菌标准抗O因子血清凝集试验，按照使用说明书和文献操作［2-3］。

1.7 小鼠致病性试验取定型后的大肠杆菌配成含菌量为20亿/m L悬浮液作攻毒用［4］。将104只小鼠，随机分为13组，每组8只；第1～12组为试验组，腹腔注射0.2mL悬浮液，第13组为空白对照组，腹腔注射0.2mL生理盐水。接毒后记录小鼠发病与死亡情况，未死亡小鼠接毒后第10天扑杀，剖检死亡小鼠，取肝脏抹片，革兰染色，镜检。

1.8 药敏试验采用圆纸片扩散法［5］，参照NC⁃CLS标准进行结果判定。

1.9 敏感药物的临床应用

1.9.1 雏鸭攻毒试验取定型后致病性较强的4种大肠杆菌共同接种于同一肉汤培养基，37℃振荡培养18 h，4 000 r/min离心20min，用灭菌生理盐水配成含菌量为20亿/m L悬浮液作攻毒用。将1周龄雏鸭200只经腿部肌肉接种0.2mL菌液；攻毒后记录雏鸭发病与死亡情况，未死亡雏鸭攻毒后第7天扑杀。剖检死亡和未死亡雏鸭肝脏，进行细菌的分离鉴定。

1.9.2 敏感药物临床应用用消毒剂对鸭舍环境进行消毒，集中确诊病鸭，随机分成5组，第1～4组分别用药敏试验结果中的高敏药物进行集中饮水给药，全天的用药量分上、下午两次给药，连续给药3 d。第5组为对照组不做治疗，饲喂普通水。连续进行2周的观察记录。

2 结果

2.1 细菌分离培养共分离到77株大肠杆菌，在麦康凯平板上形成红色菌落；在营养琼脂上形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落；在普通肉汤营养培养基中变浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。镜检发现该细菌呈红色（革兰染色阴性），形态为两端钝圆的短杆状，多数为单个散在，少数为成对连接。由此初步鉴定这77株细菌为大肠杆菌。

2.2 生化试验77株分离菌的生化试验结果见表1。

2.3 血清型鉴定77株大肠杆菌分属于12种血清型，其中以O76、O78、O92、O142为优势血清型，分别占总分离菌株的16.8%、24.7%、23.4%和19.5%（表2）。

表1 大肠杆菌生化试验结果

表2 大肠杆菌O抗原血清型鉴定结果

2.4 致病性试验77株大肠杆菌分属于12种血清型，用这12种血清型的大肠杆菌进行小鼠致病性试验，接毒后10 h试验组小鼠开始出现死亡，其中以O45、O92、O93和O142的致病性最强，致死率达到100%，O2的致死率最低，只有25%，其余血清型的致死率在37.5%～87.5%。剖检死亡小鼠可见肝脏严重出血或呈暗红色，脾和肾表面有出血点，肠黏膜有出血、水肿现象，肠内容物稀薄有气泡。从死亡小鼠肝脏中均能分离到大肠杆菌。对照组小鼠全部存活。

2.5 药敏试验77株大肠杆菌对氧氟沙星、庆大霉素、诺氟沙星和卡那霉素高敏（81.8%～98.7%）；对恩诺沙星、头孢他啶、链霉素、新诺明和大观霉素5种抗菌药物较为敏感，为36.4%～72.7%，对氨苄西林、阿莫西林、多粘菌素（B）、强力霉素和头孢唑啉5种抗菌药物敏感度最低（表3）。

2.6 敏感药物的临床应用

2.6.1 雏鸭攻毒试验200只雏鸭接种菌株后7 h开始出现精神委靡，食欲下降乃至废绝、站立不稳、部分呼吸困难、下痢等临床症状；10 h后死亡22只，存活178只全部确诊为鸭致病性大肠杆菌感染。

2.6.2 敏感药物的治疗结果将确诊的178只病鸭分成5组，前4组每组40只，第5组为对照组18只。经过高敏药物的治疗，效果显著，治愈率都在90%以上（表4）。

表3 大肠杆菌分离株的药物敏感试验

表4 鸭临床治疗情况统计

3 分析与讨论

本试验从死亡雏鸭肝脏中分离的细菌，根据其培养基上的生长特性［6］，并经生化试验初步鉴定为大肠埃希菌。分离到的77株大肠杆菌分属于12种血清型，以O76、O78、O92、O142为优势血清型，这与央珍［6］的报道一致，但是本试验中发现的O2、O9为国内不常见的血清型。这一结果表明，本地区流行的鸭大肠杆菌病血清型复杂，在防治本病时应特别注意。分离菌株以O45、O92、O93和O142的致病性最强，致死率达到100%；O2菌株的致死率最低，只有25%，其余菌株的致死率在37.5%～87.5%之间。在实际生产中因为大肠杆菌的血清型种类众多，变异菌株层出不穷，致病因子较为复杂，给本病的防治在一定程度上带来困难。敏感药物的临床应用表明，高敏药物的治疗效果显著，印证了药敏试验的结果与临床治疗效果相符合，进一步说明药敏试验对临床用药具有合理的指导作用。

［1］沙莎，宋振辉.动物微生物实验教程［M］.重庆：西南师范大学出版社，2011：16-43.

［2］于学辉，程安春，汪铭书，等.鸭致病性大肠杆菌的血清型鉴定及相关独立基因分析［J］.畜牧兽医学报，2008，39（1）：12-13.

［3］宋立，宁宜宝，张广川，等.我国华东地区大肠杆菌、沙门氏菌分离和血清学鉴定［J］.中国预防兽医学报，2004，26（2）：142-145.

［4］刘吉山，沈志强，王燕，等.我国部分地区禽致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验［J］.中国家禽，2005，27（7）：14-16.

［5］Akua Serwaah Obeng，Heather Rickard，Olasumbo Ndi，etal.An⁃tibiotic resistance，phylogenetic grouping and virulence potential of Escherichia coli isolated from the faeces of intensively farmed and free range poultry［J］.ary Microbiology，154（2012）；305-315.

［6］央珍，聂奎.重庆市部分地区鸭源大肠杆菌的O抗原血清型及耐药性［J］.西南大学学报：自然科学版，2011，33（8）：52-56.

Serotype Identification and the Clinical Application of Sensitive Drugs of Pathogenic E.coli Isolated from Duck lings

WU Li1，CHEN Peng-fei2
（1.Departmentof Veterinary Medicine，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China；2.Departmentof Fisheries，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China）

Susceptibility tests and clinical applications of sensitive drugs have been conducted on 77 Pathogenic E.colies that isolated from part large scale duck farm in Rongchang district.Isolation and purification of E.coli were from livers of the dead duck⁃lings，and the type and the strength of pathogenicity of isolated E.coli were determined through biochemical tests of bacteria，sero⁃type identification，pathogenicity test，susceptibility test and clinical application of sensitive drugs.The results indicated that 77 Pathogenic E.coli belonging to 12 serotypes.Pathogenicity tests inmice indicated that O45，O92，O93and O142exhibited themost pow⁃erful pathogenicitywith the death rates upto100%.The death rate of O2was the lowestwith a value of 25%.The death rates of oth⁃er serotypes ranged from 37.5%to 87.5%.The isolated strains exhibited highly sensitive to ofloxacin，gentamicin，norfloxacin and kanamycin.

Pathogenicity；E.coli；susceptibility test；Clinical application；duck farm in large scale

S852.61+2

A

0529-6005（2015）12-0041-03

2015-03-25

重庆市科委重大科技创新能力建设项目（CSTC，2009CB1010）

伍莉（1963-），女，副教授，硕士，从事基础兽医学教学与科研工作，E-mail：liwu63@163.com