胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅生产性能和血液生化指标的影响

李德生，徐晗，滕战伟，周海柱，高光，娄玉杰（吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118）

胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅生产性能和血液生化指标的影响

李德生，徐晗，滕战伟，周海柱，高光，娄玉杰*
（吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118）

本试验旨在研究胚蛋注射蛋氨酸（Met）对朗德鹅生产性能和血液生化指标的影响。将300枚种蛋分为2组，每组3个重复，每个重复50枚种蛋。在孵化第24天进行蛋氨酸胚蛋注射，对照组不进行任何处理，处理组注射Met 5 g/L，NaCl 7.5 g/L的营养液1.5 mL。出雏后，每个重复选取体重均匀和健康的雏鹅20只进行饲养试验，饲养期28 d。结果表明：处理组对孵化率无显著影响（P＞0.10），但显著提高朗德鹅初生重和1～14日龄平均日增重（P＜0.05），同时显著降低了饲料增重比（P＜0.05）；处理组对卵黄囊和肝脏指数无显著影响（P＞0.10），但显著提高了雏鹅第28天胸肌指数（P＜0.05）；处理组显著提高了雏鹅第14天血清中总蛋白的含量（P＜0.05），同时有提高血清中白蛋白含量的趋势（0.05≤P＜0.10）；在第28天，处理组有提高雏鹅血清中总蛋白和白蛋白的趋势（0.05≤P＜0.10）；处理组显著降低了雏鹅第14和28天血清中尿酸的含量（P＜0.05）。试验结果显示，在孵化后期种蛋注射蛋氨酸可显著提高朗德鹅初生重和改善1～14日龄生产性能，其可能与鹅体内氨基酸利用和蛋白质沉积提高有关。

胚蛋注射；蛋氨酸；鹅；生产性能；血液生化指标

蛋氨酸是饲喂玉米-豆粕型日粮家禽的第一性限制氨基酸，缺乏时会限制其他氨基酸以及整体营养物质的利用，蛋氨酸可影响动物机体氮和脂类等营养物质利用，其作用可通过血清中相关指标体现。蛋氨酸可通过提高氨基酸利用和改变肌肉生长相关mRNA的表达来促进肉鸡胸肌合成［1］。但是蛋氨酸也是毒性最大的氨基酸，前人研究表明，日粮中蛋氨酸含量超过1.17%会对3～6周龄北京鸭产生毒性而影响其生长性能［2］。胚蛋注射技术是指在孵化期将外源性营养物质注射到家禽的胚蛋中。研究表明，胚蛋注射营养物质促进家禽出壳前后肠道发育、能量储备和胚胎发育等，将会对出雏后生长产生一定的影响［3-6］。朗德鹅是优秀的肝用品种，具有肝用性能好，耐粗饲、生长快、耗料少、抗病力强、肉质好营养价值高的特点。因此，本试验旨在探索通过孵化后期胚蛋注射蛋氨酸来提高朗德鹅初生重和生产性能的可行性，为胚蛋注射在鹅营养方面研究提供理论和实践基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料试验所用种蛋购于吉林省梅河口市德坤禽类食品有限公司，种蛋保存时间均在7 d以内。DL-蛋氨酸购于诺伟司饲料添加剂（上海）有限公司，其纯度纯度≥99%。所用孵化器为科裕CFZ微电脑全自动孵化机（德州科裕孵化设备有限公司）。

1.2 试验设计本试验采用单因素随机区组设计。将300枚朗德鹅种蛋分为2组，每组3个重复（每个重复分别位于孵化箱内的不同托盘上），每个重复50枚种蛋。于种蛋孵化第24天进行胚蛋注射，对照组不进行注射，而注射组每枚种蛋注射Met 5 g/L，NaCl 7.5 g/L的营养液1.5 mL。孵化30 d出雏后，每个重复选取体重均匀，健康雏鹅20只进行饲养，饲养期28 d。

1.3 种蛋选择与孵化鹅种蛋选择要求：选择母鹅产蛋史、产次和营养摄入相近种鹅的合格种蛋300枚，根据储存时间（7 d内）、蛋重和蛋形指数分为3个重复，每个重复50枚种蛋。鹅孵化采用变温孵化，采用全进全出制，将整个孵化期分3个阶段，分别为前期1～14 d、中期15～28 d和后期29～31 d，温度和湿度分别为37.8℃和70%、37.5℃和65%、36.5℃和72%。在孵化的第29天将胚蛋转入出雏机内进行出雏。由于鹅蛋蛋壳表面积相对小，气孔小，散热缓慢，在孵化后期，鹅胚代谢加强会产生大量生理热，此时若不及时排除蛋内过多的积热，就会影响胚胎发育或造成死胎。因此在孵化后期要进行凉蛋，在孵化的第18～24天，每天凉蛋1次，在孵化第25～28天，每天凉蛋3次，凉蛋标准是当蛋温降至35℃左右时继续孵化。翻蛋周期为2 h，翻蛋时间为180 s，孵化前期注意控温，孵化中后期注意通风。其他孵化管理按常规孵化程序进行。

1.4 胚蛋注射首先，将注射液和石蜡经高压灭菌（121℃，15 min），注射液冷却至孵化机内温度才能注射。胚蛋注射参照Tako等［7］描述的方法，并稍加修改。具体操作：注射前，通过照蛋的方法确定羊膜腔位置，用75%酒精棉在钝端注射部位消毒，并在消毒区域钻1 mm左右小孔，随后用5 mL注射器垂直进针（深度为2 cm左右），将注射液注射到羊膜腔中（1.5 mL/枚），1枚胚蛋用1枚针头。注射完毕后对钻孔部位再次用75%酒精棉消毒，并立即用酒精灯灼烧灭菌后的石蜡封闭钻孔处，随后按正常孵化程序继续孵化。

1.5 饲养管理参照NRC（1994）鹅营养需要配制饲粮［8］（表1），出壳后雏鹅分为3个重复进行饲养，在出壳后12 h内开水，24 h内开食，并提供充足的光照。在出壳后的第1和5天皮下注射小鹅瘟疫苗。

表1 基础日粮组成和营养成分（风干基础）

1.6 样品采集与保存在孵化的第0天（入孵前，E0）、第23天（E23）第27天（E27）、出壳当天0天（出壳2 h以内，0 d）、第1天（出壳后24 h，1 d）、第4天（4 d）第7天（7 d）、第14天（14 d）、第21天（21 d）和第28天（28 d）从每组选取6羽（每个重复2羽）鹅胚/雏鹅进行组织样品采集，试验雏鹅采血结束，颈部放血致死，取组织样品卵黄囊、肝脏整体和两侧胸肌进行称重并记录。在雏鹅第14和第28天颈静脉取血液样品5 mL于离心管中，3 000×g离心15 min，将上清液分装与0.5 mL的Eppendorf管中，置-80℃低温冰箱中保存待测。

1.7 指标测定与方法

1.7.1 孵化率测定待对照组与注射组雏鹅出齐后，按重复计算孵化率，其中胚蛋注射前（孵化第23天）通过照蛋检测到的死胚不统计在内。

1.7.2 生产性能测定分别于出壳后第1、14、28日龄按重复数记录体重和采食量，计算平均日采食（ADFI）量、平均日增重（ADG）和饲料增重比（F/G）。1.7.3相对组织重测定于取样前记录孵化第E23和E27，出壳后的第0、1、4、7、14、21、28天的胚蛋、鹅胚/雏鹅重量。将分离卵黄囊、肝脏和胸肌称重，根据记录胚蛋重、体重、卵黄囊、肝脏和胸肌重量，计算相对组织重。

1.7.4 血液常规分析测定血浆中葡萄糖、甘油三酯、胆固醇、总蛋白、白蛋白、尿酸、谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量采用日立7170A型全自动生化分析仪测定，试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.8 统计分析试验数据经Excel 2013整理后，用SPSS18.0统计软件进行统计分析，取样不同时间点处理采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行统计分析，对照组与处理组间采用T-text进行差异显著性检验，以P＜0.05为显著性判断标准和0.05≤P＜0.10为有趋势判断标准。结果以平均值±标准误表示。

2 结果与分析

2.1 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅种蛋孵化率和生产性能的影响由图1可知，胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅受精蛋孵化率无显著性影响（P＞0.05）。但胚蛋注射显著影响1～14日龄朗德鹅生长性能（P＜0.05，图2、表2），胚蛋注射蛋氨酸显著提高了朗德鹅初生重和1～14日龄朗德鹅的日增重（P＜0.05），同时显著降低了饲料增重比（P＜0.05），但对其采食量无显著性影响（P＞0.05）。胚蛋注射蛋氨酸对15～28、1～28日龄的生产性能均无显著性影响（P＞0.05）。

图1 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅孵化率的影响

图2 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅初生重的影响

表2 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅生产性能的影响

2.2 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅器官指数的影响由图3可知，从E23到4 d卵黄囊指数显著降低（P＜0.05），但在4 d与7 d之间无显著性差异（P＞0.05），而在第7天的时候卵黄囊由于吸收完全消失。在孵化第24天注射蛋氨酸对雏鹅E27、0 d、1 d和4 d的卵黄囊指数无显著性影响（P＞0.05，表3）。

由图3可知，肝脏指数随着时间的变化呈先增长在降低的变化趋势。在第0、1、4天肝脏指数显著性的增加（P＜0.05），而从第4天到第7天达到了最大值的平台期。随后，在第14、28天肝脏指数显著性的降低（P＜0.05）。孵化第24天注射蛋氨酸对雏鹅第1、14、28天的肝脏指数无显著性的影响（P＞0.05，表3）。

图3 孵化后期和雏鹅不同日期器官指数的变化

由图3可知，胸肌指数随着时间的变化呈先减少后增加的变化趋势。在第E27和0、7 d雏鹅的胸肌指数显著性的降低（P＜0.05），而在第14天达到了最小值。随后，在第21天雏鹅肝脏指数显著性的提高（P＜0.05）。胚蛋注射蛋氨酸显著性的提高了雏鹅第28天胸肌指数（P＜0.05），但对雏鹅第1和14天胸肌指数无显著性影响（P＞0.10，表3）。

2.3 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅血液生化指标的影响由表4可知，胚蛋注射蛋氨酸显著提高了雏鹅第14天血清中总蛋白的含量（P＜0.05），同时有提高血清中白蛋白含量的趋势（0.05≤P＜0.10）。在第28天，胚蛋注射蛋氨酸有提高雏鹅血清中总蛋白和白蛋白的趋势（0.05≤P＜0.10）。胚蛋注射蛋氨酸显著降低了雏鹅第14和28天血清中尿酸含量（P＜0.05）。胚蛋注射蛋氨酸对不同时间点雏鹅血清中血糖、甘油三酯、胆固醇、谷丙转氨酶和谷草转氨酶均无显著性影响（P＞0.10）。

表3 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅器官指数的影响

3 讨论

3.1 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅种蛋孵化率和生产性能的影响孵化率是衡量胚蛋注射处理成功与否的重要指标之一。胚蛋注射对家禽营养调控的作用可能通过降低孵化后期胚胎死亡而提高种蛋的孵化率［5］。胚蛋注射液的渗透压是影响孵化率的重要因素［9］。而胚蛋注射维生素C 3 mg（0.1 mL的生理盐水溶液）能显著提高肉鸡孵化率［10］。本研究发现，胚蛋注射蛋氨酸5 g/L、NaCl 7.5 g/L的溶液对孵化率无显著作用，这与De Oliveira［9］在火鸡上的研究一致。表明本试验胚蛋注射蛋氨酸5 g/L、NaCl 7.5g/L的溶液处理是成功的，可用于进一步研究。

表4 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅血液生化指标的影响

种蛋孵化后期胚胎快速生长，而胚胎生长所需要的营养物质只能来源于种蛋，由于种蛋的营养物有限，因此不能使胚胎后期生长达到最大化。胚蛋注射3 mg维生素C能够显著提高肉鸡的初生重和肉鸡生长后期的ADFI［10］。而前人研究表明在孵化后期进行胚蛋注射营养物质可提高家禽初生重和初壳后的生长［11］。蛋氨酸可通过提高肌生成因子5（Myf5）和肌细胞增强因子2B（MEF2B）mRNA，同时降低肌肉生长抑制素mRNA的表达来促进肉鸡胸肌增长［1］。本试验结果表明，胚蛋注射蛋氨酸可显著提高朗德鹅的初生重和生长前期（1～14日龄）的ADG，同时显著降低了F/G。这可能是胚蛋后期注射蛋氨酸提高了其肠道和肌肉的发育。

3.2 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅器官指数的影响器官指数是研究机体器官发育的方法之一。器官指数在一定程度上反映了器官的发育状况。卵黄囊在禽类发育过程中具有特殊的作用，其主要作用是为机体提供大量营养物质，特别是在出壳前后，卵黄囊可以维持肉鸡出壳后一周内的营养物质。在家禽出壳后，卵黄囊的吸收也是影响其生长的重要因素。本试验研究表明，从E23到4 d朗德鹅卵黄囊指数显著降低，而在7 d卵黄囊基本完全吸收。胚蛋注射蛋氨酸并没有影响卵黄囊指数。

肝脏是机体重要的代谢器官，朗德鹅是世界鹅肝产量最高的品种，其肝脏发育直接影响机体健康和鹅肝产量。本试验研究表明朗德鹅肝脏指数在胚胎后期和雏鹅生长期（1～28日龄）程先增加再减少的趋势生长，而在出壳后第4天达到最大值。由结果可以看出，从雏鹅出壳当天到4 d肝脏指数显著增加，是肝脏的快速生长阶段。胚蛋注射蛋氨酸没有对肝脏指数产生影响。

胸肌是家禽蛋白质沉积的组织，其发育情况在一定程度上反映了家禽对蛋白质的沉积情况。在孵化后期肉鸭骨骼肌发生了负增长现象［6］。而前人研究表明，通过胚蛋注射营养物质可显著提高胸肌的绝对和相对重量［5］。本试验研究表明，朗德鹅胸肌指数在胚胎后期和雏鹅生长期（1～28日龄）呈先减少再增加的趋势生长，而在出壳后第14天达到最小值。从E23到0 d胸肌指数显著降低。可能是在孵化后期肠道快速发育和机体的代谢加强，胸肌的生长出现生长停滞或是出现胸肌负增长现象所致。从14 d到21 d胸肌指数出现了显著的提高，此阶段是机体蛋白质的快速沉积阶段。胚蛋注射蛋氨酸也显著提高了28 d的胸肌指数。可能是蛋氨酸增加了肌肉蛋白的沉积［12-13］，进而增加了胸肌指数。

3.3 胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅血液生化指标的影响血清中总蛋白、白蛋白、甘油三酯、胆固醇和葡萄糖表示了一般的营养状态。尿酸的含量通常用来表示家禽对氨基酸的利用。本研究表明，胚蛋注射蛋氨酸显著提高了血清中总蛋白的含量和有提高血清中白蛋白的趋势，同时显著降低了血清中尿酸的含量。此结果表明，胚蛋注射蛋氨酸提高了朗德鹅对蛋白质的利用。日粮氨基酸对泰和乌骨鸡血清尿素氮含量影响中发现，总蛋白浓度高说明沉积于体内的蛋白质水平高［14］，血清中转氨酶的活性可反映肝细胞损伤程度，因此检测转氨酶是判断肝脏损害程度的重要依据。当肝细胞遭受破坏或细胞膜通透性增加时，谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶酶等酶渗入血液，致使血液中这些酶的活性显著升高。饲料中添加高于1%的蛋氨酸可显著降低肉仔鸡日增重和采食量［15］，饲料中过量的蛋氨酸可通过氧化损伤和DNA高度甲基化而对北京鸭肝脏造成损伤［16］。本试研究表明，胚蛋注射蛋氨酸的量没有影响血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量。由此说明，胚蛋注射蛋氨酸5 g/L、NaCl 7.5 g/L的溶液对朗德鹅的肝脏没有造成损伤。

4 结论

本研究表明，胚蛋注射蛋氨酸对朗德鹅孵化率无显著性影响，因此在本试验注射条件可进行研究。胚蛋注射蛋氨酸提高了朗德鹅的初生重和1～14日龄的平均日增重，降低了饲料增重比；提高了28日龄朗德鹅的胸肌指数；提高了血清中总蛋白和白蛋白的含量，而且降低了血清中尿酸的含量。

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Effect of in Ovo Injection of Methionine on Growth Performance and Serum Profile in Landaise Geese

LI De-sheng，XU Han，TENG Zhan-wei，ZHOU Hai-zhu，GAO Guang，LOU Yu-jie*
（College of Animal Science and Technology，Jilin Agricultural University，Jilin Changchun 130118，China）

The aim of the present study was to investigate the effect of in ovo injection of methionine on growth performance and serum profile in Landaise geese.A total of 300 hatching eggs hatched by Landaise geese breeders were randomly divided into 2 treatments（Con and Met）with 3 replicates per treatment and 50 eggs in each replicate.At 24 d of incubation，fertile eggs were injected with 1.5 mL of 5 g/L methionine in 0.75%saline，with controls not injected. After 30 days hatching，20 healthy goslings with similar body weight were selected from each replicate and then fed. The feeding period was 28 days.Results showed that the Met had no significantly effects on hatchability（P＜0.10），but the body weight and average daily gain of geese from 1 to 14 d of age，meanwhile lower（P＜0.05）feed/gain.The Met had no significant effects on yolk sac index and liver index of geese at 14 and 28 d of age（P＞0.05），but higher breast muscle index of geese at 28 d of age（P＜0.05）.The Met increased（P＜0.05）the concentrations of total protein in serum at 14 d of age，at the same time exhibited a tendency（0.05≤P＜0.10）towards higher serum albumin concentrations.The Met exhibited a tendency（0.05≤P＜0.10）towards higher serum total protein and albumin concentrations at 28 d of age.The Met had lower（P＜0.05）serum uric acid concentrations at 14 and 28 d of age.In conclusion，in ovo injection of methionine could increase the utilize of amino acid and protein deposition to improve body weight and average daily gain，feed/gain of Landaise geese from 1 to 14d of age.

in ovo injection；methionine；geese；growth performance；serum profile

S835.5

：A

：0258-7033（2015）19-0043-06

2015-01-20；

2015-03-09

国家自然科学基金（31372331）

李德生（1986-），男，辽宁海城人，博士研究生，动物营养与饲料科学专业，E-mail：lidesheng0726521@126.com

*通讯作者：娄玉杰，教授，博士生导师，E-mail：lyjjlau@163.com