进口红葡萄酒中致病微生物的分离与鉴定分析

苏远科，吕斐，王志宏，罗晓

龙口出入境检验检疫局，山东烟台 265700

随着经济社会发展和消费能力的提高，葡萄酒的消费日益增长[1-2]。我国是葡萄酒消费大国，也是葡萄酒进口大国。葡萄酒进口数量的增加要求食品监督管理部门在科学管理、服务企业的基础上要提高检验检测水平，保证进口葡萄酒的质量安全。该研究对进口红葡萄酒中致病菌分析，为葡萄酒进口监管提供参考[2]。

1 资料与方法

1.1 材料与试剂

样品来源与本单位抽检的近5年进口的来自6个地区的120批红葡萄酒，酒精浓度为12.5%；培养基及生化鉴定试剂均来自北京陆桥生物技术有限公司；全自动微生物鉴定系统购自生物梅里埃公司。其余试剂为市售分析纯。

1.2 样品菌落总数检测

菌落总数检测参照GB4789.2-2010标准进行检测，计数平板选择菌落数为30-300cfu平板，菌落数计数依据两个平板总数取平均数作为样品菌落总数。

1.3 病原菌分离及鉴定

将样品接种至营养肉汤培养基中36℃增菌24 h，并将增菌也划线接种至选择培养基，观察菌落形态并进行革兰氏染色；将疑似菌落接种至血平板上于36℃培养24 h分离单菌落，进行全自动细菌鉴定系统进行致病菌的鉴定与分型。

2 结果

2.1 不同地区进口葡萄酒菌落总数检测情况

该文发现不同地区进口葡萄酒的菌落总数存在较大的差异，且120批进口葡萄酒中有3批菌落数超标，占2.5%，见表1。

2.2 单核细胞增生李斯特菌鉴定分析

该文发现单核细胞增生李斯特菌在血平板上呈现灰白色菌落，菌落较小，且具有β-溶血环；在改良的McBride琼脂和酵母浸膏胰酪大豆琼脂平板上接受45°光照射后呈现灰色菌落；革兰氏染色镜检发现菌体为革兰氏阳性短杆菌，呈球状，无芽孢。菌体经全自动微生物鉴定系统鉴定后为单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）。

表1 不同地区进口葡萄酒菌落总数检测情况

2.3 尿放线杆菌生化鉴定分析

该文发现在尿放线菌主要生长在琼脂平板中下层，在BP平板上菌落形态较大，呈黑色，在血琼脂平板上生长，但不具有溶血圈，革兰氏染色镜检发现菌体为革兰氏阴性杆菌，经全自动微生物鉴定系统鉴定为尿放线杆菌（Actinobacillus ureae）。

3 讨论

现代社会人们生活水平的提高促进了葡萄酒消费的增长，且进口葡萄酒的销量也逐年升高。微生物项目是进口食品质量控制的关键指标。因此，为保证进口葡萄酒的质量必须加强该领域的检测和监管。该研究对在进口红葡萄酒中致病菌分析时发现6个地区的120批进口葡萄酒中菌落总数超标有3批，占2.5%，且从不合格样品中检出单核细胞增生李斯特菌和尿放线菌等致病菌。因此，不同地区进口葡萄酒微生物差别较大，要加强监管。

单核细胞增生李斯特菌在自然界中广泛存在，能够耐受较大的渗透压，是食品中常见的致病菌之一[3-4]。单核细胞增生李斯特菌为细胞内寄生菌，能够引起患者呼吸急促、呕吐、昏迷或出血性皮疹、自然流产甚至死亡。在对2007—2011年甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌监测分析的研究中发现即食食品中单核细胞增生李斯特菌污染严重，检出率为1.98%[5]。在对昆明市西山区食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况调查时也发现食品中及食品加工工具上该细菌污染较为严重，存在引起公共卫生问题的安全风险，要加强食品安全监管[6]。在对南京地区食品中单核细胞增生李斯特菌分离鉴定时也发现单核细胞增生李斯特菌是也引起食物中毒的重大的安全隐患，且该地区中单核心包增生李斯特菌的检出率高达16.9%。该文中也发现葡萄酒单核细胞增生李斯特菌的检出率为1.67%，且葡萄酒中分离的单核细胞增生李斯特菌在血平板上呈现灰白色菌落，菌落较小，且具有β-溶血环。

尿放线杆菌也是食品中常见的致病菌，以往的报道中发现葡萄酒中也检出尿放线杆菌。顿玉慧等发现依据GB4789.2检测从菌落总数超标的莱莎丽庄园进口的葡萄酒中检出尿放线杆菌和鹑鸡肠球菌[8]。同时，作者经过多次增菌和分离培养，也从法国进口的菌落总数超标的葡萄酒中分离获得一株尿放线杆菌[9]。该文中也从进口葡萄酒中分离得到一株尿放线杆菌，占0.83%。因此，要加强进口葡萄酒中尿放线杆菌的检测。

因此，不同地区进口葡萄酒微生物菌落总数差别较大，且可能检测出致病菌。为控制进口葡萄酒的质量，要加强该领域的监管力度。

[1]韦旭阳.中国进口葡萄酒市场价格主要影响因素研究[D].西北农林科技大学,2012.

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[9]顿玉慧，郑启伟，徐建设，等.从进口葡萄酒中分离出尿放线杆菌[J].中国食品卫生杂志，2008，16(4)：322-324.