水蛭的化学成分与药理作用

2015-04-16郭晓庆,孙佳明,张辉

吉林中医药 2015年1期

水蛭的化学成分与药理作用

郭晓庆,孙佳明,张辉*

(长春中医药大学中医药与生物工程研发中心，长春 130117)

摘要：水蛭是我国传统的活血化瘀药之一，临床多用于血滞经闭、微痕积聚、跌打损伤等症。水蛭的炮制方法《伤寒论》中有所记载，大致有净制、切、加辅料和不加辅料制几大类，十几种炮制方法；现代对水蛭的炮制大多采用酒制、滑石粉烫、砂烫等方法。水蛭的主要成分为大分子类化合物，如水蛭素、肝素、组织胺、吻蛭素、氨基酸等。水蛭中也含有糖脂类、蝶啶类、甾体类和羧酸酯类等多种小分子类物质。水蛭具有抗细胞凋亡，抗肿瘤，抗凝、抗血栓，抗炎、抗纤维化等药理作用。

关键词：水蛭；水蛭素；肝素；滑石粉烫；砂烫

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.01.014

中图分类号：R284文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)01-0047-04

基金项目:国家科技支撑计划项目(2012BAI29B00)；国家中医药行业专项课题(2015468002-2)。

作者简介:郭晓庆(1989-)，女，硕士研究生，主要从事中药学研究。

收稿日期:(责任编辑:张瑞彬2014-12-10)

*通信作者:张辉，电话-(0431)86172080,电子信箱-zhanghui_8080@163.com

Review of pharmacological effects and chemical compounds of leech

GUO Xiaoqing,SUN Jiaming,ZHANG Hui*

(Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering,Changchun University of

Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：Leech is one of Chinese herbs for activating blood circulation.Leech is clinically used for the treatment of blood stasis,amenorrhea,minor bruising and so on.According to the processing methods of leech recorded in the Discourse on Cold Damage Disorders (Shang-Han Lun),there are more than ten kinds of processing methods,such as cleaning,cutting,adding adjuvant material,without adjuvant material,etc.However,modern processing methods of leech are wine processing,scalded with talc powder,heated with sand and so on.The main compounds of leech are macromolecular compounds,like hirudin,heparin,histamine,hementin,amino acids,etc.Meanwhile,leech also contains small molecular compounds like glycolipids,pteridine,steroids,carboxylic acid esters,etc.Leech has pharmacological effects,such as anti-apoptosis,anti-neoplastic,anti-freeing,anti-thrombus,anti-inflammatory and anti-fibrosis.

Key words:leech;hirudin;heparin;scalded with talc powder;heated with sand

水蛭，又名蚂璜，为环节动物门水蛭科动物蚂璜(WhitmaniapigraWhitman)、柳叶蚂璜(WhitmaniaacranulataWhitman)及水蛭(HirudonipponicaWhitman)的干燥体。据对我国樟树等地区的药用水蛭进行鉴别,得出95%以上的药用水蛭为蚂蟥。自古以来中医认为水蛭具有破血通经，逐瘀消的功效。历代本草亦多有记载。水蛭是一味安全、有效、药性平和的传统中药。本文将从炮制方法，化学成分，药理作用等方面作以归纳。

1炮制研究

1.1古代炮制方法自古以来对动物药的炮制大多是为了去除腥味，易于储藏，易于粉碎等。经过传统的炮制后可以起到减少毒副作用，增强功效，去除难闻气味，有利于调剂制剂等作用。水蛭的炮制方法早在《伤寒论》中就有所记载，大致有净制、切、加辅料和不加辅料制几大类，十几种炮制方法。其中还记载了“暖水洗去腥”的净制方法，以及《金匮玉函经》中记载的“熬去子杵碎”的水火共制的方法。《太平圣惠方》也记载了“微炒，炒令微黄等炒制法”和“微煨令黄”的煨制法[1]等。古方中还有水浸、洗去腥、去血子等炮制方法[2]。

1.2现代炮制方法

1.2.1酒制新方法曾有学者提出将净制后的水蛭用黄酒闷透,然后用文火炒至酒尽，取出，再将其放在80 ℃的烘箱内,观察当其微微鼓起质地酥脆时，将其从中取出放凉即得，进行密封保存[3]。高攀峰等[4]也提出用黄酒闷水蛭，并说明炮制可起到矫味矫臭的作用，并能使水蛭破血逐瘀的功效加强，还可以增强对脑血管类疾病的治疗作用。除黄酒闷的方法，吕文海等[5]设计出酒润麸炒水蛭的新工艺，实验研究分析表明此新工艺制品优于传统的烫水蛭，其具体表现在溶出效果、抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循环等药效学指标，而与生水蛭相比也有部分指标有所提升，是一种简单高效的新方法。

1.2.2滑石粉烫滑石粉烫为目前应用最多最广泛的一种炮制方法,其具体方法为将滑石粉放入锅内，用武火将其炒热后，再加入切好的水蛭段，期间要不断翻动，当水蛭烫至微鼓起时取出。有研究者提出生品中所含氨基酸以及人体必需氨基酸总量均比滑石粉烫制品中含量低[6]。也有学者对比了日本医蛭炮制前后活性成分含量变化，认为滑石粉烫水蛭使其峻烈的药用活性成分含量降低，同时又降低了水蛭的毒性，缓和了其破血通经之性[7]。

1.2.3砂烫砂烫炮制水蛭的具体方法为,将砂子放入锅内，用武火将其炒热后加入净水蛭，连续翻动，将水蛭烫至鼓起，断面为棕色时取出，将沙子筛出去，放凉即得。砂烫与滑石粉烫步骤相似，其主要区别是在温度的控制上，砂烫的温度较高些，对于其高温后活性成分的研究，有学者表明烫水蛭在抗炎、降血脂等方面具有一定优势[8]。

1.2.4其他方法此外水蛭的现代炮制方法还有蜜制、焙制、醋制、油制、石灰制等,炮制对水蛭的使用及保存有重要的意义，并且在其药用功效方面也有一定的增强。

2化学成分

2.1蛋白质及多肽类大分子水蛭的主要成分为大分子类化合物，如水蛭素、肝素、组织胺、吻蛭素、氨基酸等。

2.1.1水蛭素水蛭作为活血化瘀药，其主要活性成分为水蛭素,水蛭素是一种由66个氨基酸残基组成的单链多肽，其相对分子质量约7 000,其活性极为敏感，尤其对高温及化学试剂。水蛭素是目前鉴定出的最强的凝血酶特异性抑制剂[9]。据文献[10]报道水蛭素是一种特别不稳定的多肽类成分，而且只存在于水蛭的唾液腺中，由此看来水蛭素的含量很低，有文献表明目前已能用基因工程方法合成重组水蛭素。

2.1.2其他大分子类成分近年来从水蛭中分离纯化得到多种多肽类成分，有学者应用SephadexDEAE A-50阴离子交换树脂色谱、葡聚糖G-25和 LH-20凝胶过滤色谱及反相高压液相色谱对蚂蟥干体进行分离纯化，并从中分离得到一个命名为“蚂蟥多肽”的抗凝血物质，其相对分子质量为8 608，经推测其结构为63个氨基酸残基形成的肽链上连接一个相对分子质量为1 898的糖链[11-12]。贵艳丽等[13]利用仿生亲和介质库进行配体筛选和1部纯化，从中得到一种命名为NLP-1的,具有很强抗凝血作用的新型低丰度蛋白质，此法得到的蛋白质提取率可达到69.2%，具有相当高的开发研究价值。水蛭中含有17种氨基酸，其中包含的人体必需氨基酸有8种,由此看来氨基酸成分也有可能是水蛭抗凝血的主要活性成分。水蛭中的大分子类成分还有多种，有待于进一步研究。

2.2小分子类成分水蛭中也含有糖脂类、蝶啶类、甾体类和羧酸酯类等多种小分子类物质。目前为止研究表明水蛭中含有Fe、Mn、Zn、Co等14种微量元素。闫继东[14]研究得出，水蛭可以治疗因微量元素变化引起人体生理功能发生紊乱的疾病。荆文光等[15]将水蛭用甲醇提取，并首次从中分离鉴定出烟酸、腺苷、尿苷、苯丙氨酸、尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤核苷、脯氨酸、棕榈酸、缬氨酸。黄荣清等[16]运用气相色谱质谱联用技术并结合面积归一化法得到水蛭中抗凝血活性较强的成分，主要为甾体和不饱和脂肪酸甲酯等。

3药理作用

3.1抗凝、抗血栓作用翟新艳[17]通过实验研究表明，水蛭的提取物可以延长小鼠凝血、出血时间来说明水蛭的提取物具有抗凝作用。水蛭素同凝血酶的亲和能力相当强，其与凝血酶的中和可以在低温高速环境下进行。动脉粥样硬化主要是血小板聚集引起的，而凝血酶是激活血小板的重要物质，水蛭素与凝血酶的结合刚好可以抑制血小板聚集，起到治疗的目的[18]。李艳玲等[19]经过抗凝血实验表明不同炮制方法不同提取液的抗凝效果不同，其采用大鼠体外活性实验结果表明，水蛭的乙酸乙酯层抗凝效果最好，然而正丁醇层、正己烷层也都存在着不同程度的抗凝血作用。

3.2抗肿瘤作用大量的试验研究表明水蛭可以通过影响肿瘤细胞的黏附穿膜能力，抑制凝血酶的作用，抑制血小板聚集等方面来体现其抗肿瘤作用。王杰[20]、张博[21]等利用复方水蛭素治疗小鼠异体移植的W256肿瘤和接种S180瘤细胞的小鼠的研究表明，复方水蛭素可以明显降低W256肿瘤细胞和小鼠移植瘤细胞p53、Ki267及VEGF的表达，能抑制肿瘤细胞的生长。于瑞发等[22]研究发现水蛭提取物对小鼠移植性肿瘤具有较强的抑制作用,同时能使免疫能力得到改善。方圆[23]通过研究水蛭对肝癌HepG2细胞转化酶的影响得出其能抑制肝癌细胞的DNTMs表达。

3.3抗细胞凋亡作用近年来实验研究表明，水蛭对脑细胞、肝细胞、肺细胞等均有保护作用。吕莉等[24]观察水蛭素对右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型的影响，研究结果提示，高剂量水蛭素具有明显的抗脑缺血作用，且效果较银杏叶明显，同时对神经元细胞凋亡具有明显的抑制作用。陈姝等[25]的研究结果表明，水蛭桃仁煎剂可以抑制小鼠肝细胞的凋亡。王洋等[26]通过药理实验表明水蛭具有抗肺细胞凋亡的作用。

3.4抗炎、抗纤维化作用鲍宗麟等[27]通过对慢性病毒性肝炎患者的临床观察研究得出，水蛭对慢性病毒性肝炎有很好的治疗作用。孙学强等[28]通过对30名肝硬化患者进行临床观察结果表明，水蛭有助于提高中药复方合剂抗肝纤维化的治疗效果。林建明等[29]在研究水蛭对狼疮性肾炎患者的作用时发现，水蛭对肾炎患者有一定的拮抗作用，改善肾功能等。杨影等[30]研究发现，水蛭素可以有效降低纤维细胞的增殖率。

4结语

多年来随着对水蛭的研究不断加深，不论是从炮制机理、化学成分还是其药理作用、临床应用都获得了显著的成果。由于水蛭中含有多种有效成分，而且入药历史悠久，因此对水蛭的研究也不会停留至此，研究过程中还存在许多待解决的问题，这就需要广大学者不断努力，使水蛭在中药的研究领域中展现出新的活力。

参考文献：

[1]张炳鑫.中药炮制品古今演变评述[M].北京:人民卫生出版社,2011:408.

[2]孙爱国.中药的炮制及临床应用浅谈[J].中国中医药现代远程教育,2009,7(9):233.

[3]屠国昌.水蛭炮制方法的改进[J].中国中药杂志,2000,25(2):26.

[4]高攀峰,王亚峰,兰红斌.水蛭新法炮制之商榷[J].河南中医,2004,24(11):22.

[5]吕文海,邱福军,王作明.炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究[J].中国中药杂志,2001,26(4):241.

[6]樊小容.炮制对水蛭氨基酸成分的影响[J].海峡药学,2000,12(4):44-45.

[7]张永太.水蛭炮制前后质量比较[J].中国中药杂志,2008,33(7):766-768.

[8]武继彪,吕文海,王琦,等.三种水蛭炮制品活血化瘀作用比较[J].中药药理与临床,1996,43(3):35-37.

[9]吴瑛,任安乐.大鼠脑出血急性期给予水蛭素后血肿周围组织胶质纤维酸性蛋白的表达[J].兰州大学学报:医学版,2009,35(1):1-4.

[10]CHEN H Y,QI X H,GENG X,et al.Separation and purification of recombinant hirudin variant 3 from Bacillus subtilis[J].Agricutural Basic Science and Method,2009,10(8):15-19.

[11]ZHONG Shan,CUI Zheng,SAKURA N,et al.A rapid method for isolation and purification of an anticoagulant from Whitmania pigra[J].Biomedical Chromatography:BMC,2007,21(5):439.

[12]钟山,杨得坡,崔征.水蛭抗凝血活性成分的研究[J].中国中药杂志,2008,33(23):2781-2784.

[13]贵艳丽,董德贤,李荣秀.日本医蛭中一种新抗凝血蛋白质的仿生亲和纯化及鉴定[J].中国生化药物杂志,2008,29(3):145-148.

[14]闫继东.中药水蛭抗凝血活性部位的临床前研究[D].西安:西北大学,2001:14.

[15]荆文光,符江,刘玉梅,等.水蛭的化学成分[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(19):120-123.

[16]黄荣清,骆传环,彭江南,等.水蛭中小分子活性成分的GC-MS研究[J].中草药,2003,34(9):788-789.

[17]瞿新艳.水蛭的抗凝血作用研究[J].现代中西医结合杂志,2010,19(13):1582-1583.

[18]黄震华.新型抗凝和抗血小板新药：重组水蛭素[J].中国新药与临床杂志,2003,22(5):309-312.

[19]李艳玲,赵丽.水蛭及其炮制品的体内抗凝血活性研究[J].安徽农业科学,2009,37(34):16894-16894,16942.

[20]王杰,韩俊庆,李伯辉,等.复方水蛭素的药效学研究[J].山东大学学报:医学版,2007,45(8):852-854.

[21]张博,王晓敏,任青华,等.复方水蛭素对小鼠移植瘤组织中p53、Ki-67及VEGF表达的影响[J].山东医药,2008,48(43):29-30.

[22]于瑞发,王杰,张博,等.复方水蛭素提取物抗移植性肿瘤的实验研究[J].实用医药杂志,2007,24(5):599-601.

[23]方圆.水蛭提取物对肝癌HepG2细胞DNA甲基化转化酶的影响研究[D].长沙:湖南中医药大学,2011.