免疫比浊法检测肌红蛋白的性能验证及临床应用评估*

刘行超，曾桂芬，农 妍，谭秋培，胡松林，罗厚龙

(中国人民解放军第一八一医院检验科，广西桂林 541002)



·论 著·

免疫比浊法检测肌红蛋白的性能验证及临床应用评估*

刘行超，曾桂芬，农 妍，谭秋培，胡松林，罗厚龙△

(中国人民解放军第一八一医院检验科，广西桂林 541002)

目的 对免疫比浊法检测肌红蛋白(Mb)的检测性能进行评价，并对Mb的临床应用进行评估。方法 检测150例健康人(健康对照组)血清Mb水平，建立参考值范围，评估免疫比浊法检测Mb的准确度、精密度、线性。对80例急性冠脉综合征(ACS)患者按心电图结果分组后，比较ACS组血清Mb浓度与健康对照组是否存在差异。对于存在差异的ACS患者，进一步收集疾病对照组，通过绘制ROC曲线，评价Mb与其他心肌标志物的诊断性能。结果 健康人血清Mb参考范围为<70.22 mg/L(男)、<52.22 mg/L(女)，差异有统计学意义(t=4.39，P<0.05)。2个水平质控检测结果为100.31、295.50 mg/L，均在厂商允许偏差范围内，批内、批间变异系数(CV)均在5%以内，0～800 mg/L范围内线性良好。ACS组、非ACS组、健康对照组的Mb水平分别为(285.28±314.63)、(76.24±40.77)、(44.96±12.62)mg/L，差异有统计学意义(P<0.05)。Mb在ACS组中的ROC曲线下面积(AUC)为0.878。在ACS组中，Mb的诊断敏感度为80.0%，优于肌钙蛋白I(cTnI)的43.7%和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的57.5%。结论 免疫比浊法检测Mb的检测性能符合要求。

肌红蛋白； 肌钙蛋白I； 临床性能验证； 心肌标志物

急性冠脉综合征(ACS)是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂或糜烂，继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病理基础的一组临床综合征[1]。ACS是严重危害人体健康的疾病，其发病率和病死率增长迅速，由此越来越受到医学界的重视[2-3]。肌红蛋白(Mb)是一种低分子的含血红素的蛋白质，广泛存在于心肌和骨骼肌中，是急性心肌梗死后最早检出的标志物之一[4-5]。血清Mb的检测能辅助诊断急性心肌梗死，推测心梗面积和判断溶栓治疗法成功与否，辅助诊断心肌再梗死[6]。目前Mb的检测方法有胶体金法、放射免疫方法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光和酶联荧光分析法[7]。本研究旨在对免疫比浊法检测Mb的检测性能进行评价，并对Mb的临床应用进行评估。

1 资料与方法

1.1 一般资料 ACS组：收集2014年1～7月本院确诊ACS患者80例，其中男58例，女22例，年龄19～92岁。非ACS组：为同期本院住院除ACS外其他冠状动脉病变患者50例；要求临床已明确排除ACS可能，且年龄、性别分布与ACS组相仿。健康对照组：为同期本院健康管理中心健康查体者，其中男100例，女50例，年龄23～70岁，年龄、性别与ACS组相匹配。所有对象均排除脑血管病、肝肾疾病、周围血管病、痛风、糖尿病，且无急、慢性感染，手术，创伤及恶性肿瘤病史。

1.2 标本采集 使用生化专用真空采血管，采集所有研究对象静脉血4～5 mL，置室温自然凝集，4 000 r/mim离心10 min后立即检测。批间试验使用的混合标本-20 ℃保存，解冻后放置于2～8 ℃冰箱中，并在24 h内用于分析检测。

1.3 仪器与试剂 血清Mb、肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)检测采用日本Hitachi7180生化分析仪及北京九强公司Mb检测试剂盒、cTnI检测试剂盒和CK-MB型检测试剂盒。

1.4 检测性能评价

1.4.1 参考范围建立 统计150例健康人血清Mb检测结果。应用SPSS17.0软件对数据进行正态性检测，采用正态分布法的单侧95%参考值范围，即<1.64s建立参考范围。

1.4.2 准确度与重复性验证 准确度验证采用厂商配套质控(2个水平)；重复性验证采用4个水平的混合标本(S1、S2、S3、S4)分别重复检测20次，计算批内均值与变异系数(CV)；将4个水平的混合标本分别每日检测2个批次，每批次各检测2次，连续检测20 d，计算批间均值与CV。

1.4.3 线性范围验证 使用浓度为800 mg/L的高值标本，按1∶5、2∶5、3∶5、4∶5及原倍的顺序手工稀释成160、320、480、640、800 mg/L的系列浓度，按浓度由低至高检测2次，计算平均值。并以实测均值为Y，理论值为X，使用SPSS17.0统计软件拟合一次(Y=aX+b)、二次(Y=aX2+bX+c)、三次(Y=aX3+bX2+cX+d)多项式方程，评价是否呈线性。

1.5 临床性能评价 比较ACS组Mb水平与健康对照组之间的差异。如存在差异则收集相应的疾病对照组即非ACS组50例，并将Mb与临床常用的心肌标志物CK-MB、cTnI进行比较。将非ACS组与健康对照组合并作为ACS阴性组，绘制ROC曲线，比较Mb和相应特异性标志物的曲线下面积(AUC)，同时通过自建参考范围上限作为切点(其他心肌标志物切点：CK-MB为24 U/L，cTnI为1.68 μg/L)，比较Mb及其他标志物在ACS中的敏感度和特异度。评价Mb在ACS中的诊断价值。

2 结 果

2.1 检测性能评价

2.1.1 参考范围建立 150例健康人血清Mb水平为(44.96±12.62)mg/L，按性别分组后，男性为(47.52±13.84)mg/L，女性为(39.84±7.55)mg/L，差异有统计学意义(t=4.39，P<0.05)。按<1.64s分别建立男性、女性的参考范围，分别为<70.22 mg/L、<52.22 mg/L。

2.1.2 准确度与精密度验证 2个水平质控检测结果分别为100.31、295.50 mg/L，均在厂商允许偏差范围内[水平1为(100.0±15.0)mg/L；水平2为(299.0±30.0)mg/L]。4个水平标本(S1、S2、S3、S4)Mb的批内CV分别为1.35%、0.86%、0.97%、0.96%，批间CV分别为4.46%、3.65%、3.98%、4.26%，证明该试剂检测Mb的精密度良好。

2.1.3 线性范围验证 一次多项式拟合方程Y=1.011X-4.9，r2=0.999。二次多项式系数a的P值为0.365(P>0.05)；三次多项式系数a的P值为0.562(P>0.05)，b的P值为0.596(P>0.05)。说明曲线在0～800 mg/L范围内呈线性。

2.2 临床性能验证

2.2.1 各组血清Mb水平比较 ACS组、非ACS组、健康对照组血清Mb水平分别为(285.28±314.63)、(76.24±40.77)、(44.96±12.62)mg/L，ACS组Mb水平明显高于非ACS组和健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2.2 Mb在ACS中的诊断性能 将非ACS组与健康对照组合并作为阴性对照组，分别绘制Mb、cTnI、CK-MB的ROC曲线。对不同标志物的ROC曲线AUC进行比较，Mb的AUC为0.878，高于cTnI的0.749(P<0.05)，与CK-MB(0.821)基本相同(P>0.05)。Mb在诊断切点(自建参考范围上限男70.22 mg/L、女52.22 mg/L)的敏感度为80.0%，高于cTnI的43.7%及CK-MB的57.5%，特异度为81.5%，低于cTnI的97.5%和CK-MB的97.0%。在ACS组中选取cTnI检测结果正常的患者，绘制Mb在上述患者中的ROC曲线，结果在cTnI正常的ACS患者中，Mb的AUC为0.619，进一步说明Mb可作为cTnI的补充指标用于ACS的早期诊断。

3 讨 论

Mb是一种新的心肌损伤的生化标志物，在急性心肌损伤时它可以迅速从心肌细胞释放到血液中，使血液中的Mb浓度迅速升高，12 h内达到高峰，24 h后由肾脏清除。有研究表明，在胸痛发作的0.5～2.0 h血浆中的Mb开始升高，并可持续5～12 h。因此它是一个反映心肌损伤的早期诊断指标，并且这个指标的阴性结果特别有助于排除心肌梗死，其阴性预测值可达100%[8-9]。

本研究对免疫比浊法检测Mb试剂盒的检测性能验证结果表明，其准确性、精密度、线性均符合检测要求。通过检测150例健康人血清Mb水平建立参考值范围：<70.22 mg/L(男)、<52.22 mg/L(女)，女性低于男性。ACS组血清Mb水平与非ACS组和健康对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)，提示Mb对ACS患者的早期诊断具有一定的参考价值。通过比较ROC曲线可以综合分析标志物的诊断价值，本研究中Mb的AUC为0.878，优于cTnI与CK-MB(AUC分别为0.749、0.821)，且在ACS组中，Mb在诊断切点时的诊断敏感度也优于cTnI与CK-MB，但特异度略低于cTnI与CK-MB。

为进一步比较Mb与cTnI在ACS诊断中的价值，对cTnI检测正常的ACS患者绘制ROC曲线，Mb的AUC为0.619，说明Mb在ACS患者发病早期血清cTnI水平还较低时已具有一定的诊断能力。所以Mb可以在ACS早期诊断中作为cTnI及CK-MB的补充，提高整体诊断性能。以往的研究表明Mb是一种非特异性的心肌损伤标志物，在多种疾病中均有升高[10-12]，这一点使得Mb在ACS中的应用受到限制。因此，应用Mb对ACS进行早期诊断时，应联合检测cTnI与CK-MB，起到优势互补的作用，以达到更高的灵敏度与特异度，提高ACS的综合诊断性能，尽量减少漏诊和误诊。

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Evaluation of serum myoglobin detection kit using immune turbidimetry and investigate the clinical diagnosis value of myoglobin*

LIUXing-chao,ZENGGui-fen,NONGYan,TANQiu-pei,HUSong-lin,LUOHou-long△

(DepartmentofClinicalLaboratory,the181stHospitalofPLA,Guilin,Guangxi541002,China)

Objective To evaluate the performance of serum myoglobin detection kit using immune turbidimetry and investigate the clinical diagnosis value of myoglobin.Methods 150 healthy adults were enrolled in this case control study to establish serum myoglobin (Mb) reference value.The analytical performance (accuracy,precision,linearity) of serum Mb detection kit using immune turbidimetry was assessed.Eighty patients were classified into different acute coronary syndrome groups according to their electrocardiographic examination.Serum Mb level of ACS group was compared with that of normal control group.In ACS group with statistical difference,benign disease groups were further collected.Receiver operating characteristic (ROC) curve and area under curve (AUC) were used to evaluate the diagnostic value of Mb compared with other cardiac markers.Results The reference interval of Mb was <70.22 mg/L (males) and <52.22 mg/L (females) respectively,which had statistically significant difference(t=4.39，P<0.05).The detection result of 2 level controls was 100.31 and 295.50 mg/L respectively,which were both within the acceptable limits.The within-lot and between-lot variations of four level samples were both below 5%.There was a good linear correlation between theoretical value and actual detection result in range of 0-800 mg/L.The serum level of Mb was (285.28±314.63),(76.24±40.77) and (44.96±12.62) mg/L in ACS group,non-ACS group and normal control group respectively,which had statistically significant difference(P<0.05).The AUC of Mb was 0.878 in ACS group.In ACS group,the sensitivity of Mb was higher than that of cTnI and CK-MB (80.0%,43.7% and 57.5%).Conclusion Experimental results show that serum myoglobin detection kit using immune turbidimetry has good performance in the precision and linearity.

myoglobin; cardiac troponin I; clinical performance verification; cardiac markers

国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2011AA02A111)。

刘行超，男，副主任技师，硕士，主要从事临床生化及微生物耐药性研究。△

，E-mail：luohoulong297@126.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.003

A

1672-9455(2015)07-0883-02

2014-10-20

2015-01-05)