海南地区人乳头瘤病毒感染情况与亚型分析

张继业，李晓娟，徐卫华，符生苗

(海南省人民医院中心实验室，海南 海口 570311)

海南地区人乳头瘤病毒感染情况与亚型分析

张继业，李晓娟，徐卫华，符生苗

(海南省人民医院中心实验室，海南 海口 570311)

目的 了解常见21种人乳头瘤病毒(HPV)在海南地区的亚型分布、多重感染和不同年龄感染情况。方法使用PCR体外扩增和膜杂交法对2013年1～12月来我院就诊的10 764例女性进行HPV分型检查。结果10 764例样本中阳性率为19.38%，多重感染率为4.96%，25岁以下阳性率最高，各亚型检出率最高依次为52型、16型和58型，未检出43型。结论海南地区主要HPV感染亚型为52型、16型和58型，HPV感染有低龄化趋势。

人乳头瘤病毒；基因分型；宫颈癌；多重感染

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一种嗜上皮性的双股环形无包膜DNA病毒，目前已经发现超过200多种，其中超过35种能够感染人类生殖系统[1]。低危型的HPV主要引起起尖锐湿疣等良性病变，而高危型HPV的持续感染则是引发宫颈上皮内瘤变以及宫颈癌的主要病原学因素[2-3]，几乎绝大多数子宫颈鳞状细胞癌的患者都可以检测到高危型HPV的感染[4]。由于不同HPV亚型在不同地区以及不同人群的分布有所区别[5]，因此本研究针对海南地区各年龄段10 764例女性进行常见21种HPV亚型检测，以确定海南地区HPV感染的常见类型，为HPV的防治和后续研究打下基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究所有标本来自海南省人民医院中心实验室2013年1～12月自愿接受HPV分型检查的女性患者共10 764例，其中年龄最小14岁，最大87岁。将受试对象分为＜25岁组、26～35岁组、36～45岁组、46～55岁组、56～65岁组以及＞65岁组。

1.2 仪器和试剂 分子杂交仪(潮州凯普生物化学有限公司)，PCR扩增仪(Applied biosystems)，细胞裂解液(分离法)(潮州凯普生物化学有限公司)， HPV分型检测试剂盒(潮州凯普生物化学有限公司)，其他分析纯试剂。

1.3 样本采集 行常规妇科检查，以窥阴器暴露宫颈后用拭子擦拭干净子宫颈口分泌物，拭子置于宫颈口内2～3 cm，顺时针旋转5圈，获颈管脱落细胞并存于装有细胞保存液的洗脱管中。做好标本相应标识后4℃保存并在24 h内送检。

1.4 样本检测 将宫颈脱落细胞保存液充分震荡混匀，取500µl保存液以12 000 r/min离心5 min后弃上清液，按照细胞裂解液(分离法)试剂盒说明书操作提取样本DNA。随后按照HPV分型检测试剂盒说明书进行PCR扩增以及21种HPV基因亚型的检测。21种亚型包括高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型，低危型6、11、42、43、44、CP8304型，其他型53型。每次实验均设有阴性和阳性对照。

1.5 结果判读 膜条上共24个方格，依次排列质控点与21种不同的HPV型别。首先检查膜条质控点是否有蓝色圆点出现，有则表示实验成功。随后检查其他方格是否蓝色圆点出现，相应方格中出现蓝色圆点则判定对于对应HPV亚型为阳性。

1.6 数据统计 用软件Excel 2007建立数据库并对所检测的21种HPV亚型在不同年龄段中的感染情况进行统计描述。

2 结果

2.1 HPV感染的年龄分布 10 764例样本中阳性率为19.38%，其中＜25岁组阳性率最高，达28.80%，其次为56～65岁和＞65岁组，阳性率分别为24.32%和22.76%。在不同类型HPV感染中高危型检出率最高，为10.82%，而且在各年龄段中也是以高危型感染为主。多重感染检出率为4.96%，但＜25岁组和＞65岁组检出率高，分别达10.95%和9.76%。低危型染检出率相对较低，但在＜25岁组中感染较多，检出率为4.33%，其他型感染相对较少，见表1。

2.2 HPV感染的亚型分布 在10 764例样本中共检出HPV感染2 811例次，其中除44型未检出外，其余20种均有检出。其中52型、16型以及58型检出率最高，分别为16.86%、13.66%和11.21%。在单一感染的患者中，除了52型、16型以及58型以外，CP8304型和53型的也较为常见。在534例多重感染的病例中最多检出6种不同亚型HPV同时感染。在双重感染和三重感染中52型和58型的检出率最高。但在四重感染中检出率最高的为16型，此外58型、CP8304型和53型也较为常见。而五重和六重感染不同亚型的HPV检出规律不明显，见表2。

表1 HPV感染的年龄分布[例(%)]

表2 HPV感染的亚型分布(例，n=2811)

3 讨论

高危型HPV的持续感染是宫颈上皮内瘤变以及宫颈癌的重要病原学因素[2-3]，流行病学调查显示高危型HPV感染诱发宫颈癌的概率为1%，同时93%的宫颈癌组织中能够检出HPV感染[3]，因此HPV的检测是预防和治疗宫颈癌的必须内容。

研究表明，至少50%的妇女在一生中会感染HPV，但HPV在不同地区的感染率也有所区别。文献报道称HPV全球感染率约10%，亚洲感染率为8%[4]，而国内文献报道的HPV检出率根据地区不同，检出率有明显差异，其中广东[5]、广西[6]、贵州[7]等地的文献报道HPV检出率在24%左右，而重庆的检出率报道称为17.3%[8]，南京为10.79%[9]，其他地区检出率一般在20%以上[10-11]。引起这种差异的原因除了本身地域差异外，还可能与各地卫生条件以及当地人群对HPV的认知程度不同有关，此外由于国内还没有规模性的普查数据，各地报道在检测样本总量、检测方法等方面有所不同，因此各地HPV检出率差异较大。但本研究通过检测10 764例女性患者标本，HPV阳性检出率为19.38%，较全国报道水平略低。

除地域因素外，HPV的感染也和年龄密切关系[12]。文献报道称HPV感染的年龄近似为“U”型分布[13]，即青年、老年感染率高，而中年感染率相对低。在本研究中，HPV感染的年龄分布趋势和文献报道一致，感染的主要年龄段集中在25岁以下人群和56～65岁的人群，检出率分别为28.8%和24.32%。而36～55岁的人群检出率则相对较低。引起这种现象的原因应该和患者的身体状况和卫生习惯有密切关系。一般来说，青年女性免疫力较好，HPV感染后大多为一过性感染，文献报道称年轻妇女感染HPV后有60%至70%的患者能够在一年内消失，而两年内感染清除率为90%[14]。而随着年龄增大，HPV感染率开始上升，这可能是由于女性身体免疫力以及激素水平发生变化导致[15]，此外妇女更年期后生活习惯也有改变，因此容易引起持续感染。而25岁以下女性，虽然免疫力较好，但是健康意识相对淡泊，对个人性行为和个人卫生习惯缺乏认识，导致低年龄段女性对HPV暴露可能性大，却又对早期症状不重视，使得HPV在25岁以下女性中HPV检出率和多重感染率均最高。除此之外，低年龄段女性还可能有酗酒、抽烟[16-17]以及多性伴侣等的不良行为[18]，也增高了HPV的暴露几率。

目前，我国还缺乏规模性的HPV普查数据，虽然国外HPV感染以16型和18型为主，但我国地域广阔，不同地域间的HPV感染有所不同。其中江西HPV检出最多亚型依次为16型、58型和33型[19]，北京地区的报道常见亚型为16型、58型和52型[20]，浙江地区则是16型、52型、58型检出率高[21]，此外在重庆地区检出率较高的亚型是16型、43型和58型[8]，可见我国16型感染较为常见，其次58型的检出率也高。而在本研究中发现海南地区HPV高危型检出率高，依次为52型，其次为16型和58型，分别占检出总数的16.86%、13.66%和11.21%，此外CP8304型、53型、18型和68型的检出率也较高，均在5%以上，但在样本中未检出43型。说明海南地区HPV感染和国内其他地区有一定差异，这种差异除了与各地民族、流动人口的生活习惯和卫生习惯有关外，可能还与海南地理位置和本地自然条件有关，但目前HPV特定亚型对自然环境相关性的报道并不多[22]。

对HPV感染目前缺少标准化的治疗方案，主要是进行抗病毒治疗，因此针对HPV仍然是以预防为主。目前国际上已有二联(16型/18型)和四联(16型/18型/6型/11型)的HPV疫苗上市，但涉及海南常见的52型、58型尚未有相关疫苗上市。同时，HPV疫苗上市时间较短，因此其作用还有待验证，所以目前对HVP的预防还是应通过良好的生活卫生习惯、定期检查以及出现感染症状后尽早就医、治疗。通过本次研究，我们发现25岁以下的女性感染HPV的几率较中、老年女性更高，同时多重感染几率也高。这一结果表明海南HPV感染也有低龄化趋势，提示在关注中、老年女性HPV感染的同时，也还需要在低年龄段女性中开展HPV的宣教和筛查，从而更有效降低宫颈癌的发生率。

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Prevalence and genotyping of human papillomavirus infection in females in Hainan province.

ZHANG Ji-ye,LI Xiao-juan,XU Wei-hua,FU Sheng-miao.Central Laboratory,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311, Hainan,CHINA

Objective To investigate the genotypes distribution of 21 common human papillomavirus(HPV) in Hainan province,rate of multiple infections and infection rates among different age groups.MethodsA total of 10 764 samples from females in Hainan were tested for 21 DNA types of HPV by PCR and film chip blot.ResultsThe HPV positive rate was 19.38%.The multiple infection rate was 4.96%,and there was relatively high infection rate among females under 25 years old.Out of the 21 subtypes of HPV,HPV-52 was the most common subtype detected, followed by subtypes HPV-16 and HPV-58.HPV-43 was not detected.ConclusionThe most prevalent HPV subtypes are HPV-52,HPV-16 and HPV-58 in Hainan province,and the highest rate of HPV infection is found in females under 25 years old.

Human papillomavirus;Genotype;Cervical cancer;Multiple infection

R730.261

A

1003—6350（2015）10—1460—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0520

2014-10-22)

符生苗。E-mail：smfu2000@126.com