肿瘤相关转移因子-1、p53蛋白与子宫内膜癌临床病理的相关性

李俊军，何 艳，唐 洁，欧阳强

(湖南省肿瘤医院暨中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院病理科，湖南 长沙 410013)

·临床病理·

肿瘤相关转移因子-1、p53蛋白与子宫内膜癌临床病理的相关性

李俊军，何 艳，唐 洁，欧阳强

(湖南省肿瘤医院暨中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院病理科，湖南 长沙 410013)

目的 探讨肿瘤相关转移因子-1(MTA-1)及p53蛋白对子宫内膜癌临床诊断和预后评估的应用价值。方法对31例子宫内膜癌、19例不典型增生及26例正常子宫内膜组织的病理切片进行免疫组化研究，观察MTA-1和p53蛋白的表达差异，并分析子宫内膜癌组织MTA-1和p53蛋白表达与临床病理特征的关系。结果子宫内膜癌、不典型增生及正常子宫组织的MTA-1阳性表达率分别为11.5%、47.4%、83.9%，p53蛋白阳性表达率分别为7.69%、36.8%、67.7%，其组间差异均有统计学意义（P＜0.05）；其表达量的变化与表达率一致，且组间差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。MTA-1和p53蛋白表达量受到子宫内膜癌TNM分期、组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和ER阳性的影响（P＜0.05），且两者之间具有显著正相关性(r2=0.6248，P＜0.01)。结论MTA-1及p53蛋白与子宫内膜癌发生、发展及病理进程密切相关，可为其临床诊断和预后评估提供指导。

肿瘤相关转移因子-1；p53蛋白；子宫内膜癌

子宫内膜癌为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，属于上皮性病变，以腺癌最为多见[1]。肿瘤性疾病的发病机制较为复杂，涉及血管增生、细胞凋亡、免疫应答和基因调控等多条信号通路的影响。癌基因和抑癌基因的靶控作用是近年的研究热点，其中p53蛋白是目前已知的主要抑癌基因之一，在正常的人体组织中呈低表达或微表达，在部分肿瘤或癌组织中发生突变而表现出高表达状态[2]。肿瘤相关转移因子-1 (Metastasis-associated gene 1，MTA-1)最初分离于乳腺癌细胞株，瘤转移相关基因，因与肿瘤转移密切相关而得名。近年，部分研究在子宫内膜癌中发现p53蛋白和MTA-1的表达[3-4]，然而两者与子宫内膜癌的具体关系和相互联系尚未明确。本研究对MTA-1及p53蛋白在子宫内膜癌中的表达特点及其与患者临床病理特征之间的关联做初步探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 子宫内膜癌组织来源于本院2013年3月至2014年9月收治、并行手术治疗的31例患者，年龄31～63岁，平均(48.6±6.24)岁，所有患者均经术后病理证实为子宫内膜癌，并排除继发性癌变。不典型增生组织为本院同期收治、行诊断性刮宫的19例患者，年龄29～71岁，平均(49.2±7.31)岁，所有患者均经病理诊断为不典型增生。正常子宫内膜组织取自26例子宫良性疾病患者，年龄28～68岁，平均(48.8±7.03)岁，经病理证实为健康组织。三组患者的平均年龄比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学实验 所取组织均制备5～7 μm石蜡病理切片，行免疫组织化学实验。主要步骤：①恒温箱烘烤处理后脱蜡至水，采用酶消化方法进行抗原修复。分别以0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶，37℃恒温消化30 min。②抗体孵育，滴加适量一抗，4℃过夜；37℃复温后滴加适量二抗，28℃孵育90～120 min。本实验所用MTA-1一抗(Ati-MTA1 antibody，ab71153)和p53蛋白一抗(Ati-p53 antibody，ab179477)均来源于兔，所配套二抗为Goat anti rabbit IgG(ab150077)，所有抗体均由Abcam提供。其中MTA-1一抗、p53一抗及二抗的使用浓度分别为1:200、1:100、1:500，以PBS稀释。③DAB显色，观察显色状态，显色理想者PBS清洗，苏木素复染，二甲苯透明，中性树胶封片镜检。

1.2.2 阳性表达率和表达量 将细胞着色比例和着色程度分开计分。着色比例得分：在400倍目镜下，观察视野内100个细胞，着色率=着色细胞数/100，每张切片取5个视野，计算均值；将着色率分为≤5.0%、5.0%～25%、26%～50%、≥50%四个等次，分别记为0、1、2、3分。着色程度得分：将着色状况分为无色、淡黄色、棕黄色和褐色四个等次，分别记为0、1、2、3分。阳性表达量=着色程度得分×着色比例得分；阳性表达量＞1者为阳性表达病例，计入阳性表达率。

1.3 统计学方法 所得数据均以SPSS16.0统计学软件进行分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验；计数资料以率或构成比表示，两组间行Fisher检验，多组间行χ2检验；相关性考察采用简单线性回归分析；以P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.01表示差异有显著统计学意义。

2 结果

2.1 MTA-1和p53蛋白的表达 MTA-1在正常组织、不典型增生及子宫内膜癌中的表达率分别为11.5%、47.4%、83.9%，p53蛋白分别为7.69%、36.8%、67.7%，其组间差异均有统计学意义(P＜0.05)；MTA-1和p53蛋白和在正常组织、不典型增生组织及子宫内膜癌中的表达量变化与表达率一致，且组间差异有显著统计学意义(P＜0.01)；见表1、图1。

表1 两组患者MTA-1和p53蛋白的表达情况[例(%)，±s]

表1 两组患者MTA-1和p53蛋白的表达情况[例(%)，±s]

注：与正常组织比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与不典型增生比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

正常组织不典型增生子宫内膜癌检验值P值26 19 31 3(11.5) 9(47.4)a26(83.9)bc3.924 0.016 0.52±0.10 1.82±0.13b3.62±0.27bd28.32 0.000 2(7.69) 7(36.8)a21(67.7)bc3.085 0.027 0.41±0.07 2.06±0.11b4.18±0.37bd35.26 0.000

2.2 MTA-1和p53蛋白表达与子宫内膜癌病理特征的关系 MTA-1的和p53蛋白表达量与患者年龄无关，而受到TNM分期、组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和激素受体(ER)阳性的影响(P＜0.05)；TNM分期和组织学分级升高、淋巴结转移、浸润至浆膜下及ER阳性均能增加其表达量，见表2。

2.3 MTA-1和p53蛋白表达的相关性 简单线性回归分析结果显示，MTA-1和p53蛋白表达量之间呈直线正相关性，y=0.7356x+0.2829，r2=0.6248，P＜0.001，其散点图和相关直线见图2。

图1 MTA-1和p53蛋白免疫组化实验结果(×400)

表2 子宫内膜癌患者MTA-1和p53蛋白表达与病理特征的关系(±s)

表2 子宫内膜癌患者MTA-1和p53蛋白表达与病理特征的关系(±s)

病理特征类别例数p53蛋白年龄(岁)9 MTA-1 F或t值1.065 P值0.173 F或t值1.506 P值0.087 TNM分期13 11 6 19 3.0850.0243.3650.011组织学分级8 3 1 1 4.3570.0012.8430.026浸润深度＜40 40～50＞50Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级Ⅳ级浆膜浆膜下1.9870.0282.9350.003淋巴结转移2.8390.0043.5780.001 ER是否阳性2.8620.0042.9260.003阴性10 9 15 18 16 15 21 12表达水平3.62±0.27 3.66±0.26 3.63±0.28 3.24±0.21 3.57±0.29 3.86±0.38 3.27±0.14 3.53±0.28 3.69±0.35 3.81±0.26 3.56±0.21 3.73±0.27 3.92±0.41 3.53±0.35 3.81±0.31 3.46±0.37表达水平4.17±0.33 4.24±0.41 4.15±0.39 3.85±0.42 4.02±0.47 4.63±0.34 4.08±0.33 4.26±0.24 4.33±0.25 4.55±0.36 4.11±0.33 4.46±0.35 4.65±0.44 4.12±0.38 4.33±0.26 4.03±0.31

图2 MTA-1和p53蛋白表达量的相关直线

3 讨论

子宫内膜癌的发病率超过所有女性生殖道恶性肿瘤的20%，且近几年有不断上升的趋势，已成为影响我国女性健康的严峻问题之一。临床调查结果显示[5]，子宫内膜癌预后不良的主要因素有两个：一是确诊时已发生较高程度的转移和分化；二是治疗后复发。正因如此，其早期诊断、病情评估及术后复发监测工作尤为重要。随着现代医学分子生物学的发展，肿瘤相关基因受到越来越多的重视，因其对病情的反应更为敏感，有望为提高临床诊断和病情评估的准确性提供指导。

MTA-1和p53蛋白分别为近年研究较为广泛的癌基因和抑癌基因之一，两者在多种恶性肿瘤中存在异常高表达的现象。作为典型的抑癌基因，原生的p53蛋白起抑制肿瘤细胞增殖的作用，因其半衰期短，采用免疫组织化学实验很难测得。然而在恶性肿瘤中，p53蛋白发生突变，细胞周期阻滞在G1期，故而免疫组织化学实验可测得高表达态的突变p53蛋白[6]。近年部分学者发现在子宫内膜癌中也有MTA-1和p53蛋白表达升高的现象，然而两者与子宫内膜癌的具体关系尚未明确。本研究采用免疫组织化学实验对子宫内膜癌、不典型增生及正常子宫组织的MTA-1和p53蛋白表达情况作半定量分析，结果发现子宫内膜癌组织的MTA-1和p53蛋白表达率和表达量高于不典型增生组织，且不典型增生组织高于正常子宫组织，该结果与国内学者张山岭、丁聪聪等[7-8]研究一致，说明MTA-1和p53蛋白均参与了子宫内膜癌的发生。

另外，为探究两者对子宫内膜癌病情进展的影响，本研究对MTA-1和p53蛋白表达情况与患者病理特征的关系进行初步考察。在选取指标方面，TNM分期是对原发灶、转移灶和淋巴结受累情况的综合评价，而组织学分级主要评定了子宫内膜癌的分化程度，临床常将TNM分期、组织学分级机浸润深度作为治疗方案选取和预后评估的重要指标。另外，多数子宫内膜癌属于激素依赖型病变，与高雌激素刺激密切相关，已有研究证实其ER阳性表达率明显高于健康人群[9]。因此本研究将ER也纳入病理特征的考察范围。结果发现MTA-1的和p53蛋白表达量受TNM分期、组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和ER阳性的影响。该结果从一定程度上说明MTA-1的和p53蛋白与子宫内膜癌发生、发展及病理进程密切相关，对其临床治疗和预后评估有一定的指导意义。

另外，本研究对MTA-1的和p53蛋白表达量的相关性也进行了初步分析，结果证实两者呈直线正相关性。MTA-1属于组蛋白去乙酞基酶的家族成员，能够通过去乙酰化转录调节恶性肿瘤的转移；而经典的抑癌基因如p53蛋白、p21蛋白等均受组蛋白乙酞化的调控[10]，可能为两者相互联系重要途径之一。该结果提示MTA-1的和p53蛋白在子宫内膜癌的病理机制中可能存在交互作用，有深入研究的潜在价值。

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Correlation of metastasis-associated gene 1 and p53 with clinicopathologic features of endometrial cancer.

LI Jun-jun,HE Yan,TANG Jie,OUYANG Qiang.
Department of Pathology,Hunan Cancer Hospital(the Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine,Central South University),Changsha 4100013,Hunan,CHINA

Objective To explore the application value of metastasis-associated gene 1(MTA-1)and p53 in the clinical diagnosis and prognosis assessment of endometrial cancer.MethodsPathological sections from 31 cases of endometrial cancer,19 cases of atypical hyperplasia and 26 cases of normal endometrial tissues were selected,and MTA-1 and p53 protein expression were detected by immunohistochemical assay.The relations of MTA-1 and p53 protein expression with clinicopathologic features of patients were analyzed.ResultsThe MTA-1 positive rate of endometrial cancer,atypical hyperplasia and normal endometrial tissues were 11.5%,47.4%and 83.9%,and the p53 positive rate were 7.69%,36.8%and 67.7%,respectively,with statistically significant differences between the two groups (P＜0.05).The change of expression quantity was in accordance with that of positive rate,with statistically significant difference between the two groups(P＜0.01).The MTA-1 and p53 expression were influenced by TNM stage,histological grade,infiltration depth,lymph node metastasis and the ER positive(P＜0.05),with positive correlations(r2=0.6248,P＜0.01).ConclusionMTA-1 and p53 are closely related to the occurrence,development and pathological process of endometrial cancer,which can provide guidance for its clinical diagnosis and prognosis assessment.

Metastasis-associated gene 1(MTA-1);p53 protein;Endometrial cancer

R737.33

A

1003—6350（2015）13—1997—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0722

2015-02-11)

李俊军。E-mail：494427973@qq.com