HBsAg阳性产妇血清和乳汁中HBV DNA载量分析

邹 军，汪永强

(内江市第二人民医院检验科，四川 内江 641100)

HBsAg阳性产妇血清和乳汁中HBV DNA载量分析

邹 军，汪永强

(内江市第二人民医院检验科，四川 内江 641100)

目的 探讨HBsAg(+)产妇血清和乳汁中HBV DNA载量关系及相关性，为慢性乙型肝炎产妇母乳喂养提供实验依据。方法对148例HBsAg(+)产妇血清和乳汁中乙肝病毒采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测HBV DNA，按产妇血清HBV载量分为HBV DNA载量＜420 IU/ml组、420～104IU/ml组、105～106IU/ml组、107～108IU/ml组，并同时收取产妇乳汁进行HBV DNA检测，比较不同组间乳汁HBV DNA阳性率以及血清HBV DNA与乳汁HBV DNA的相关性。结果148例HBsAg(+)产妇血清HBV DNA阳性率为31.8%(47/148)，乳汁阳性率为16.2%(24/148)，两者比较差异有统计学意义(χ2=7.355，P＜0.05)；HBsAg(+)产妇血清HBV DNA载量＜420 IU/ml时，其对应的乳汁中均未检出HBV DNA；血清HBV DNA载量在420～104IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV DNA检出率为14.3%(3/18)；血清HBV DNA载量在105～106IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV DNA检出率为71.4%(5/7)；血清HBV DNA载量在107～108IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV DNA检出率为84.2%(16/19)(χ2= 20.88，P＜0.05)；当血清HBV DNA含量升高时，乳汁中含量也相应增高，二者中度相关(r=0.628)。结论HBsAg(+)产妇乳汁有不同载量的HBV DNA存在，其含量低于相应血清；随着血清HBV DNA载量的升高，产妇乳汁中HBV DNA载量有增高趋势，母乳喂养有潜在的传染性。

HBsAg(+)；产妇；血清；乳汁；HBV DNA

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)是嗜肝DNA病毒，人体感染可导致乙型肝炎。孕妇是HBV的易感者，母婴传播所致乙型肝炎可达40%左右。我国每年约有80万婴儿通过垂直传播感染乙肝，除宫内感染及分娩过程中经产道感染外，母婴之间密切接触也是重要途径，而其中母乳喂养是重要因素，其喂养有潜在传染性，本文探讨HBsAg(+)产妇血清和乳汁中HBV DNA载量关系及相关性，为临床提供科学依据，指导产妇安全喂养。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年1月至2013年6月在我院妇幼保健院住院和门诊就诊的乙肝表面抗原阳性的产妇，共148例，年龄最小者18岁，最大37岁，平均年龄26.3岁。

1.2 标本采集 (1)血清：空腹静脉采血3 ml，待血液自然凝固后用水平离心机3 000 r/min离心5 min，吸取上层血清于1.5 ml EP管中，-30℃储存。(2)乳汁：清洁乳房后，挤乳汁3～4 ml于无菌杯内，立即送检，3 000 r/min离心10 min，取中层乳清储存于1.5 ml EP管中，-30℃储存。

1.3 仪器和试剂 ABI 7500 Real Time PCR system实时荧光PCR检测仪，试剂购于上海复星长征医学科学有限公司，配有试剂A和B，A试剂主要含PEG、NaCl，B试剂主要为NaOH、SDS、Tween-20和Chelex-100。

1.4 HBV DNA核酸提取与PCR扩增 (1) HBV DNA提取：从冰箱中取出待检标本平衡至室温后混匀，取100 μl待检样本(血清和乳汁)分别加入100 μl核酸提取液A中，震荡混匀10 s，低温13 000 r/min离心10 min，弃上清，再分别加入50 μl核酸提取液B至沉淀中，震荡混匀10 s，100℃干浴10 min，低温13 000 r/min离心2 min，保留上清待用。(2)PCR扩增：向已配置好的PCR反应液中加入7 μl上述DNA提取液，轻轻混匀。(3)扩增程序：50℃反应2 min，94℃保温5 min，93℃30 s→60℃90 s循环40次。60℃采集FAM荧光信号，阳性判断值为≥420 IU/ml。

1.5 统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行数据处理，计数资料的比较采用χ2检验，相关程度用直线相关分析，检验标准为α=0.05。

2 结果

2.1 血清与乳汁中HBV DNA阳性率比较 148例HBsAg(+)产妇血清HBV DNA阳性率为31.8% (47/148)，乳汁阳性率为16.2%(24/148)，两者比较差异具有统计学意义(χ2=7.355，P＜0.05)。

2.2 血清HBV DNA载量与乳汁HBV DNA载量的关系 HBsAg(+)产妇血清HBV DNA载量＜420 IU/ml时，其对应的乳汁中均未检出HBV DNA；HBsAg(+)产妇血清HBV DNA载量在107～108IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV DNA检出率为84.2% (16/19)；血清HBV DNA载量在105～106IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV DNA检出率为71.4%(5/7)；血清HBV DNA载量在420～104IU/ml区间时，其对应乳汁中HBV DNA检出率为14.3%(3/18)；三组间阳性率比较差异具有统计学意义(χ2=20.88，P＜0.05)。

2.3 血清HBV DNA载量与乳汁HBV DNA载量的相关性 HBsAg(+)产妇血清和乳汁HBV DNA载量同时阳性时，两者间相关系数r=0.628，呈中度相关(如图1)。

图1 HBsAg(+)产妇血清、乳汁HBV DNA载量同时阳性时的相关性(r=0.628)

3 讨论

乙型肝炎病毒属于DNA病毒，据世界卫生组织估计全球慢性感染者达2.4亿，我国是乙型肝炎高流行区域，一般人群的感染率为9.09%[1]，乙型肝炎病毒通过体液、母婴和密切接触等方式感染人体，导致乙型肝炎，严重危害人类的身心健康。乙型肝炎病毒的母婴垂直传播一般有3种途径：一是妊娠时经胎盘宫内感染；二是分娩时胎儿经过产道，可吞进羊水、血、阴道分泌物引起感染；三是密切接触或母乳喂养时经过乳汁进行传播。慢性乙型肝炎防治指南在关于母婴垂直传播的预防中曾指出，新生儿在出生12 h内注射HBIG和乙型肝炎疫苗，可接受HBsAg阳性乳汁[2]，Meta分析与相关研究表明：母体HBV感染，母乳喂养不是婴儿感染乙肝的危险因素，婴儿在出生后接受乙肝疫苗可以进行母乳喂养[3-4]。

然而，乙肝患者是否可以母乳喂养一直存在较大的争议，HBsAg和HBeAg同时阳性的母体在胎儿期垂直传播率为70%至90%，而低滴度HBsAg阳性但HBeAg阴性母体垂直传播率为10%至40%[5-6]，HBV病毒核酸基因是HBV的遗传基础，是判断传染性最为客观的指标，其病毒载量的高低直接与传染性相关。研究表明：孕妇血清高浓度HBV水平是母婴垂直传播的危险因素，所以母婴垂直传播与孕妇血清HBV载量明显相关[7-8]，为什么乙肝患者是否可以母乳喂养一直存在较大的争议呢?原因是大多数研究与指南没有区分血清高浓度HBV含量与仅仅是HBsAg阳性。

本研究摈弃传统用HBeAg分组研究策略，探讨血清HBV载量与乳汁HBV载量的相关性，结果表明：HBsAg(+)产妇血清HBV DNA阳性率为31.8% (47/148)，乳汁阳性率为16.2%(24/148)，血清HBV阳性率高于乳汁HBV阳性率，此结果与乳汁是否为初乳或成熟乳有很大的关系，因为初乳HBV载量高于成熟乳汁[9]，因此不能仅用乳汁HBV阳性率判断乙肝母体乳汁阳性率。HBsAg(+)产妇血清HBV DNA载量逐步增高时，其乳汁中HBV DNA阳性率随之增高，当HBsAg(+)产妇血清和乳汁HBV DNA载量同时阳性时，两者间相关系数r=0.628，呈中度相关，与文献报道大致一致[10]，因此，在不能确定乳汁是否安全的情况下，对HBsAg(+)产妇，应结合血清HBV DNA和乳汁HBV DNA来正确指导母乳喂养，从而降低新生儿乙型肝炎的感染率。

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Analysis on HBV DNA copies in the serum and breast milk of parturients with HBsAg positive.

ZOU Jun,WANG Yong-qiang.Department of Clinical Laboratory,the Second People's Hospital of Neijiang,Neijiang 641100,Sichuan, CHINA

ObjectiveTo study the relationship and correlation between serum HBV DNA and breast milk HBV DNA of HBsAg(+)parturients,and to provide evidence of guiding breast feeding for women infected by chronic hepatitis B virus(HBV).MethodsA total of 148 parturients with HBsAg(+)of HBV were divided into the four groups according to the copies of HBV DNA in serum:＜420 IU/ml group,420～104IU/ml group,105～106IU/ml group, 107～108IU/ml group.The HBV DNA copies in the serum and breast milk from the four groups of women were detected by fluorescence quantitative PCR(FQ-PCR)technique respectively.And the relationship and correlation of the load of HBV DNA were performed between in serum and breast milk from the four groups.ResultsThe HBV positive rate of women with HBsAg(+)was 31.8%(47/148)in serum and 16.2%(24/148)in breast milk(χ2=7.355,P＜0.05). In the parturients with serum HBV DNA＜420 IU/ml,the corresponding breast milk was negative for the expression of HBV DNA.In the women with serum HBV DNA of 420～104IU/ml,105～106IU/ml,107～108IU/ml,the corresponding HBV DNA positive rate in breast milk was 14.3%(3/18),71.4%(5/7)and 84.2%(16/19),respectively(χ2=20.88,P＜0.05).When serum HBV DNA load increased,the content of breast milk increased accordingly,which showed a moderate correlation(r=0.628,P＜0.05).ConclusionHBV DNA is detected in breast milk of HBsAg(+)parturients.Its content is lower than that in the corresponding serum,and it increases when the load of HBV DNA in serum increases, which indicates that baby may be get infected through breast feeding.

HBsAg(+);Parturients;Serum;Breast milk;HBV DNA

R714.251

A

1003—6350（2015）07—1005—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.07.0358

2014-10-22)

吴阶平医学基金会肝病医学部科研基金(编号：2010-ZD-19)；四川省卫生厅科研课题(编号:120294)

邹 军。E-mail：709578724@qq.com