肝细胞肝癌组织中CD90表达变化及意义

代尚，宁淑芳，黄俊淇，骆成飘，谢雨萱，韦常宏，利基林，张力图

(广西医科大学附属肿瘤医院，南宁530021)

肝细胞肝癌组织中CD90表达变化及意义

代尚，宁淑芳，黄俊淇，骆成飘，谢雨萱，韦常宏，利基林，张力图

(广西医科大学附属肿瘤医院，南宁530021)

目的 观察肝细胞肝癌(HCC)组织中肿瘤干细胞标记物CD90的表达变化，并探讨其临床意义。方法 采用免疫组化法检测60例HCC组织(HCC组)、60例癌旁组织(癌旁组)及60例正常肝脏组织(对照组)中的CD90，分析其表达与HCC临床病理参数的关系。结果 CD90阳性表达率HCC组为76.7%(46/60)、癌旁组为48.3%(29/60)、对照组为0，3组组间两两比较，P均<0.01。CD90表达与HCC患者的性别、民族、有无门静脉瘤栓、包膜是否完整、TMN分期、病理分级有关(P均≤0.05)，与HCC患者的年龄、肿瘤大小、甲胎蛋白高低、乙肝病毒是否阳性无关(P均>0.05)。结论 CD90在HCC组织及癌旁组织中高表达，HCC组织中表达更高；癌组织中CD90表达有助于HCC患者预后的判断，可为患者进行个体化诊断治疗提供参考。

肝肿瘤；肝细胞肝癌；干细胞标记物；CD90；预后

原发性肝癌病死率位居癌症中的第3位[1]，其中肝细胞肝癌(HCC)占原发性肝癌的85%～95%[2～3]。研究发现，HCC中40%由始祖细胞及干细胞分化而来，并且在HCC进展中起到关键作用[3,4]。在众多干细胞标记物中，CD90是HCC非常重要的抗原标记物。CD90是一种锚定于糖基磷脂酰肌醇的糖蛋白，其可在T细胞、胸腺细胞、神经细胞、内皮细胞以及成纤维细胞等多种细胞中表达[5,6]。CD90分子作为一个重要的调节器，在细胞内以及细胞间的交互、凋亡、黏附以及转移等方面起到相当大的作用[7]。2014年6～10月，我们观察了HCC组织中CD90的表达变化，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床治疗 收集2012年1月～2013年1月广西肿瘤医院肝胆外科病区住院并行肝癌切除术的HCC患者60例，男51例，女9例；年龄28～78岁，平均51.8岁；均为首诊肝癌患者，术前未行任何相关治疗；术中收集患者HCC(HCC组)及癌旁组织(癌旁组)各60份。同时取60例肝外伤患者的正常肝脏组织作为对照组。

1.2 方法

1.2.1 CD90检测方法 将各组织石蜡标本切片，恒温烘箱烤片；依次脱蜡，梯度乙醇脱水，高压抗原修复；滴加3%过氧化氢，滴加一抗 4 ℃过夜；滴加二抗，DAB显色；上镜观察到染色满意为止，自来水冲洗终止染色。苏木素染色3 min，自来水冲洗；1%盐酸乙醇适度分化，温水返蓝；晾干组织切片，封片。CD90阳性细胞为细胞质呈黄色或者深黄色。每张切片400倍下随机选择5个视野，每个视野选择100个细胞激，计算阳性细胞百分率。根据参考文献来对实验结果进行判断[8]，根据每张切片的着色轻重程度分为没有着色、轻度着色、中度着色以及重度着色，分别计为0、1、2、3分；根据着色的范围大小来分为无着色、着色面积≤33%、着色面积33%～66%以及着色面积>67%，分别计为0、1、2、3分。两者得分相加≥3分判定CD90阳性表达。

1.2.2 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。计数资料以率表示，比较用χ2检验。P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组织中CD90阳性表达率比较 CD90阳性表达率HCC组为76.7%(46/60)、癌旁组为48.3%(29/60)、对照组为0，3组组间两两比较，P均<0.01。

2.2 CD90表达与HCC临床病理参数的关系 见表1。

3 讨论

干细胞是一类没有特定功能的未成熟细胞，能够分化成多种类型，并且能够保持自我更新的能力。它们在胚胎形成时期最为活跃，也因此形成了不同的人体组织。成人干细胞存在于人体已经分化的组织中，现在我们已经可以辨别出起源于干细胞所有的细胞类型。成人干细胞绝大多数存在于骨髓中，但最新研究认为干细胞也可存在于实质器官的肿瘤组织中。很多年前，研究人员就已经提出了肿瘤干细胞存在的假设[9,10]。肿瘤干细胞可能起源于突变的正常干细胞，或者来源于分化出来的已获得某些干细胞特性的肿瘤细胞。我们知道绝大多数HCC起源于慢性肝疾病或肝硬化，小细胞异常增生、增生结节的出现和早期HCC被认为是HCC的发病进程，然而HCC潜在的进展分化等分子机制仍不够明确[11,12]。小细胞异常增生具有染色体的缺失与获得现象，这种现象可存在于肝癌细胞或其临近癌旁部位，但不存在于周围正常的肝实质细胞中[13]。本研究结果显示，CD90阳性表达率HCC组为76.7%、癌旁组为48.3%、对照组为0，3组组间两两比较具有统计学意义。在HCC早期除了外显子基因的改变，端粒缩短在细胞克隆扩增中也起到了相当重要的作用。尽管我们已经了解到正常的肝脏干细胞在肝脏形成和修复中起主要作用，但我们现在认为HCC的损伤来源于肝实质细胞和肝祖细胞的异常分化[14]。肝干/祖细胞具有多项潜在分化与自我修复的能力，人类肝脏的干细胞存在于新生儿和胎儿的肝脏导管区。不管是成人还是儿童，干细胞在肝脏中都能保持相对稳定的数量和比例[15]。CD90的阳性结果已经证实其在肝脏的干细胞中是有意义的，CD90阳性干细胞在癌变中起到了最基本的作用。在患者的病态肝脏中，CD90表达在肝脏干细胞、肝成纤维细胞、肌成纤维细胞和肿瘤基质(CAFs)以及一小部分肿瘤干细胞中。这些新出现的报道可以说明肝癌组织中是存在肝癌干细胞的，印证了正常肝祖细胞提高自我修复等级出现可作为肝癌发生前的重大事件。有报道证实，起源于肝祖细胞的肝癌与没有任何干细胞标记物表达的HCC相比，更有侵袭性[16,17]。

值得注意的是，CD90的上调并不是HCC特有的，在其他肝肿瘤样本中也有相似的表现，说明CD90可能参与了肝脏肿瘤的形成过程。相关文献已经证实，CD90作为一个潜在的肿瘤干细胞标记物在人类肝癌癌前病变中起到了关键作用[16,18]。肝癌发生的过程是最具代表性的混合型损伤如小细胞异常增生，它提高了HCC进展的风险[19]。有这样一种假设认为，肝硬化使HCC加重。未经历过任何癌前病变直接发生的HCC也在考虑范围内，只是这种现象极其罕见。另一方面，关于HCC的细胞起源，有文献阐明低分化的HCC来自干细胞，高分化的HCC来自成熟的肝细胞[1,20]。将之前的研究归纳一下，我们完全得出这样一个结论，那就是低分化的HCC要比高分化HCC更容易着色。本文研究对于病理分期与CD90表达相关性的结果同样支持这一结论。

在对干细胞生物学和肿瘤干细胞的不断研究中，逐步意识到癌症可能是一种干细胞疾病。肿瘤干细胞的散播可能是肿瘤转移和复发的根本原因。通过对相关患者临床资料的分析，我们不难得出在临床分期、包膜完整度以及门脉瘤栓是否存在这几个方面与CD90阳性表达相关，可以间接推测HCC患者CD90阳性表达与不良预后的关系。这可以使我们对肿瘤干细胞在HCC进展和控制上面提供更为深刻的理解。本实验开展于广西壮族自治区，属于少数民族区域。研究选取了壮族与汉族，结果发现汉族CD90阳性表达率显著高于壮族，具有统计学意义；这在以往的文献中鲜有报道，在某些程度上可以将此作为一个切入点进行深入探讨。

综上所述，CD90在HCC组织及癌旁组织中高表达，HCC组织中表达更高；癌组织中CD90表达有助于HCC患者预后的判断，可为患者进行个体化诊断治提供参考。

[1] Parkin D, Bray F, Ferlay J, et al. Estimating the world cancer burden: Globocan 2000[J]. Int J Cancer, 2001,94(2):153-156.

[2] El-Serag H, Rudolph K. Hepatocellular carcinoma: epidemiology and molecular carcinogenesis[J]. Gastroenterology, 2007,132(7):2557-2576.

[3] Simonetti R, Camma C, Fiorello F, et al. Hepatocellular carcinoma. A worldwide problem and the major risk factors[J]. Dig Dis Sci, 1991,36(7):962-972.

[4] Yao Z, Mishra L. Cancer stem cells and hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Biol Ther, 2009,8(18):1691-1698.

[5] 张杏,弭丽丽,王秋香.肝细胞肝癌CD90的表达及临床意义[J]. 疑难病杂志,2011,10(12):911-912.

[6] 张华,高志红,刘春玲,等.Thy-1肿瘤标记物在肝癌的表达及意义研究[J].医学与哲学: 临床决策论坛版,2009,31(5):51-53.

[7] Rege T, Hagood J. Thy-1 as a regulator of cell-cell and cell-matrix interactions in axon regeneration, apoptosis, adhesion, migration, cancer, and fibrosis[J]. FASEB J, 2006,20(8):1045-1054.

[8] Li R, Younes M, Wheeler M, et al. Expression of vascular endothelial growth factor receptor-3 (VEGFR-3) in human prostate[J]. Prostate, 2004,58(2):193-199.

[9] Salnikov A, Kusumawidjaja G, Rausch V, et al. Cancer stem cell marker expression in hepatocellular carcinoma and liver metastases is not sufficient as single prognostic parameter[J]. Cancer Lett, 2009,275(2):185-193.

[10] Xu W, Cao L, Yin Z. Progress and prospects in cancer stem cell research for hepatocellular carcinoma[J]. Ai Zheng, 2009,28(9):1004-1008.

[11] Marchio A, Terris B, Meddeb M, et al. Chromosomal abnormalities in liver cell dysplasia detected by comparative genomic hybridisation[J]. Mol Pathol, 2001,54(4): 270-274.

[12] Kojiro M, Roskams T. Early hepatocellular carcinoma and dysplastic nodules[J]. Semin Liver Dis, 2005,25(2):133-142.

[13] Farazi P, DePinho R. Hepatocellular carcinoma pathogenesis: from genes to environment[J]. Nat Rev Cancer, 2006,6(9):674-687.

[14] Roncalli M, Park Y, Di Tommaso L. Histopathological classification of hepatocellular carcinoma[J]. Dig Liver Dis, 2010,42(Suppl 3):228-234.

[15] Schmelzer E, Zhang L, Bruce A, et al. Human hepatic stem cells from fetal and postnatal donors[J]. J Exp Med, 2007,204(8):1973-1987.

[16] Lu J, Chang J, Yeh K, et al. Overexpression of Thy1/CD90in human hepatocellular carcinoma is associated with HBV infection and poor prognosis[J]. Acta Histochem, 2011,113(8):833-838.

[17] Zhao H, Peehl D. Tumor-promoting phenotype of CD90hi prostate cancer-associated fibroblasts[J]. Prostate, 2009,69(9):991-1000.

[18] Zen Y, Fujii T, Yoshikawa S, et al. Histological and culture studies with respect to ABCG2 expression support the existence of a cancer cell hierarchy in human hepatocellular carcinoma[J]. Am J Pathol, 2007,170(5):1750-1762.

[19] Fujise K, Nagamori S, Hasumura S, et al. Integration of hepatitis B virus DNA into cells of six established human hepatocellular carcinoma cell lines[J]. Hepatogastroenterology, 1990,37(5):457-460.

[20] Herrera M , Bruno S, Buttiglieri S, et al. Isolation and characterization of a stem cell population from adult human liver[J]. Stem Cells, 2006,24(12):2840-2850.

Expression and clinical significance of CD90in hepatocellular carcinoma

DAIShang,NINGShu-fang,HUANGJun-qi,LUOCheng-piao,XIEYu-xuan,WEIChang-hong,LIJi-lin,ZHANGLi-tu

(TheAffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the expression and clinical significance of CD90in hepatocellular carcinoma. Methods The expression of CD90in cancer tissues, para-carcinoma tissues and normal liver tissues were detected by immunohistochemical method, and to analyze the significance. Results The positive expression rate of CD90was 76.7% (46/60) in HCC group, 48.3%(29/60)in paraneoplastic group, 0 in normal group; there were significant differences among three groups (allP<0.01). The expression of CD90in HCC tissues was correlated with gender, ethnicity, portal vein tumor thrombus, envelope integrity, clinical and pathological staging (allP<0.05); which was not associated with age, tumor size, AFP values and the expression of hepatitis B (allP<0.05). Conclusion The expression of CD90increased in cancer tissues and para-carcinoma tissues, especially in cancer tissues, which maight be closely related to a poor prognosis of patients with liver cancer.

liver tumor; hepatocellular carcinoma; stem cell markers; CD90; prognosis

广西科学研究与技术开发计划基金资助项目(桂科攻1355005-3-10)；广西医科大学青年科学基金资助项目(GXMUYSF201215)。

代尚(1987-)，男，硕士研究生，研究方向为肿瘤分子诊断。E-mail： meteorite1987@126.com

张力图(1966-)，男，主任技师，研究方向为肿瘤分子诊断。E-mail： zhanglitu@gmail.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.08.007

R735.7

A

1002-266X(2015)08-0021-03

2014-12-06)