气相色谱法测定市售鱼油产品中的EPA和DHA 含量

张郢峰，赵月然

(1.陕西国防工业职业技术学院 化学工程学院，陕西 西安 710302;2.大连市药品检验所，辽宁 大连 116021)

鱼油中富含有多种不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸，其主要功能性成分是被人们誉为“脑黄金”的ω-3 系多不饱和脂肪酸二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Arid，简称EDA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid，简称DHA)［1］。

80 年代的实验和临床研究［2］表明，EPA 和DHA 能有效地降低血脂和血压水平［3］，抑制血小板聚集［4-5］，增加血浆纤溶活性，改变血小板和内皮细胞的前列腺素代谢途径，对防治心肌梗塞有一定的效果［6］，另外它们能降低人红细胞丙二醛水平，增强超氧化物歧化酶活性，调节体内抗氧化能力，可能具有潜在的抗衰老作用［7］。

鱼油保健品中的EPA 和DHA 一般都以乙酯形式存在，近年来，鱼油制品已作为保健营养食品出现，因此建立一种便捷、可靠的方法来监控鱼油保健品的质量十分必要。目前，EPA 和DHA 的检测方法主要有高效液相色谱(HPLC)和气相色谱法(GC)［8］。HPLC 检测脂肪酸类化合物一般采用正相色谱，溶剂耗费大，且灵敏度不高。GC 检测脂肪酸类化合物具有灵敏度高、选择性强、速度快、溶剂耗费少等优点，是脂肪酸类化合物定量分析的首选方法。本实验建立了GC 定量法快速测定鱼油产品中EPA 和DHA 的检测方法，并进行方法学考察。为目前鱼油保健品的质量监控提供了一种快速可靠的方法。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

正己烷，色谱纯;二十碳五烯酸甲酯标准品(含量＞99%，U-99M-J10-V)、二十二碳六烯酸甲酯标准品(含量＞99%，U-84M-A11-W)均来自美国NUChek Prep 公司;市售鱼油11 种。

7890A 气相色谱仪;BP211D 型、BP221S 型电子分析天平。

1.2 色谱条件

色谱柱DB-5MS(0.32 mm×30 m)，载气为N2，氢气流速为30 mL/min，空气流速300 mL/min。

程序升温初始210 ℃，1 ℃/min 升至240 ℃，10 ℃/min 升至300 ℃，分流比10 ∶1。

1.3 供试品溶液的制备

取供试品10 粒，取出内容物混匀，精密称取0.20 ～0.30 g，置25 mL 量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，精密称取2 mL，置于10 mL 具塞试管中，加入2 mol/L 氢氧化钠-甲醇溶液1 mL，充分振荡10 min，于60 ℃的水浴中加热2 min，进行皂化反应，冷却至室温，加入2 mol/L 盐酸-甲醇溶液2 mL，充分振荡10 min，并于50 ℃的水浴中加热2 min，进行甲酯化，后弃去下层溶液，再加2 mL 纯化水洗净，并弃去水层，移出正己烷层，至另一装有无水硫酸钠的漏斗中脱水后，即得。

1.4 标准储备液的制备

精密称取标准品二十碳五烯酸甲酯(以下简称EPA 甲酯)，置量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得EPA 甲酯储备液。浓度为1.000 8 mg/mL。EPA 结果换算系数为0.955 7。

精密称取标准品二十二碳六烯酸甲酯(以下简称DHA 甲酯)，置量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，即得DHA 甲酯储备液。浓度为1.001 2 mg/mL。DHA 结果换算系数为0.959 0。

1.5 标准曲线

分别吸取EPA 甲酯标准品溶液及DHA 甲酯储备液各0.5，1.0，2.0，4.0，6.0 mL 于10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，作为标准曲线的标准品溶液。

2 结果与讨论

2.1 色谱分析

色谱分析见图1。

图1 色谱分析图Fig.1 Chromatogram analysis chart

由图1 可知，图1A 为对照品EPA 甲酯色谱图，图1B 为对照品DHA 甲酯色谱图，样品中EPA 甲酯和DHA 甲酯色谱峰与对照品一致，并与其他色谱峰与分离度＞3，说明该气相色谱条件较为合适。

2.2 线性关系的考察

分别精密量取1.4 节下混合对照品溶液1 μL注入气相色谱仪测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到EPA 的回归方程为y=924.79x +20.687，R2=0.999;同法得DHA 的回归方程为y=1 025x+2.791 5，R2=0.999。线性范围分别为0.05 ～1.00 mg/mL 和0.05 ～1.00 mg/mL。

2.3 精密度实验

取鱼油(样品6)约0.20 g，精密称定。按1.3节下供试品溶液制备的方法操作，在上述色谱条件下连续进样6 次，测得EPA 甲酯、DHA 甲酯的RSD值分别为1.6%，0.9%。结果表明，仪器精密度较好。

2.4 重复性实验

取鱼油(样品6)6 份，每份约0.20 g，精密称定。按1.3 节下供试品溶液制备的方法操作，在上述色谱条件下进样，测得EPA 甲酯RSD 值分别为1.1%，DHA 甲酯RSD 值1.5%，结果表明，仪器重复性较好。

2.5 稳定性实验

取同一供试品溶液(样品6)，在室温下放置，分别在0，2，4，6，8，12，24 h 进样分析，测定峰面积。EPA、DHA 甲 酯 峰 面 积 的RSD 分 别 为1.6%，1.9%。结果表明，2 种化合物在24 h 内稳定。

2.6 加样回收率实验

称取已知含有量的鱼油(样品6)6 份，每份约0.20 g，精密称定。分别准确加入EPA、DHA 甲酯对照品贮备液各5 mL。按1.3 节下供试品溶液制备的方法操作，在上述色谱条件下进行测定，计算回收率为98.9%，97.8%。

2.7 含量测定

本实验采用气相色谱法测定鱼油胶囊中的EPA 及DHA 含量，共测定11 种市售鱼油产品，结果见表1。

表1 市售鱼油产品DHA 及EPA 含量Table 1 Content of EPA and DHA in commercially available fish oil

由表1 可知，测得鱼油中的EPA 及DHA 市售11 种产品中的含量与标示量相比，均小于标示含量，尤其是样品4 和样品7，几乎不含有EPA 及DHA。

3 结论

通常的甲酯化方法有酸法甲酯化、碱法甲酯化和三甲基硅重氮甲烷甲酯化等［9-10］。碱法甲酯化存在酯化不完全的缺点;三甲基硅重氮甲烷甲酯化法对于游离脂肪酸甲酯化程度较好;本方法参考GB/T 5009.168—2003 酸法甲酯化法，具有甲酯化程度高的优点。

本方法采用的GB/T 5009.168—2003 酸法甲酯化法进行测定［11-12］，但是由于市售商品均为乙酯化产品，因此还需要建立测定乙酯化鱼油产品的方法使测定结果更为准确。需要建立合理的、科学的鱼油含量的测定方法，保证市售鱼油产品的质量可控，产品的质量的稳定，以及规范保健食品的标示含量以免误导消费者。

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