日粮精粗比对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性的影响

江春雨，魏益龙，李步轮

(1.塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔 843300)



日粮精粗比对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性的影响

江春雨1,2，魏益龙1，李步轮1

(1.塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔 843300)

为了研究不同纤维水平日粮对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性的影响，设置3个不同精粗比饲料组(高纤维日粮组、常规日粮组和高淀粉日粮组)进行饲喂试验，测定驴盲肠微生物纤维二糖酶的活性。结果发现，与常规组相比，高纤维组和高淀粉组对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性均有显著影响(P<0.05)。

精粗比；驴；盲肠微生物；纤维二糖酶

新疆驴是一个优良的地方品种,具有耐粗饲、适应性强的特点。近年来，驴在肉、药、皮、乳等方面的经济价值也渐渐得到充分挖掘和利用。但是，在生产中也存在生长速度慢、周期长、饲料资源利用率低的问题，原因在于缺乏系统合理的饲养管理技术，导致饲料利用率不高，生产性能不能充分发挥。驴盲肠内栖息着复杂多样的微生物，对驴的营养生理机能有着重要影响。盲肠微生物微与粗饲料的消化吸收以及某些消化系统疾病和营养代谢病关系密切[1-3]。在日粮中合理使用纤维性饲料，关键在于促进其正面作用的发挥，并使日粮中纤维的含量、品质与动物的利用能力相适应。笔者在饲喂不同粗精比日粮后测定驴盲肠内微生物纤维二糖酶的活性，分析日粮组成对微生物碳水化合物酶活性的影响，旨在为合理搭配和利用饲料资源、优化饲料配方和提高饲料利用效率提供理论依据，同时为揭示不同来源的蛋白质和能量饲料在驴盲肠中被微生物分解利用的机制及盲肠微生物调控的研究奠定基础，也为在生产中合理使用纤维性饲料提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 选择9头5～12岁干奶期新疆驴，平均体重为(150±10)kg，在靠近回盲连接处安装永久性盲肠瘘管，术后恢复期为10个月，恢复期结束后开始试验。将每天的采食量平均分3次饲喂。饲喂时先将粗饲料加入30%水打湿后，与精料混合后饲喂。通过自动饮水器自由饮水，每栏安放微量矿物元素盐砖。

1.2 药品与试剂 1%PBS试剂(pH 7.2～7.4)、蒸馏水、酒精棉球、纤维二糖酶(Cellobiase)；酶联免疫分析(ELISA)试剂盒。

1.3 仪器 全波长酶标仪(Powerwave xsBioTek)、台式高速冷冻离心机(TGL20M)、无菌离心管、移液枪(dragon-Med 10～100 μl DT55829、20～200 μl DU51264、5～50 μl DX73159、0.5～10 μl DU74962、100～1 000 μl DV28429)、超声波细胞粉碎机(JY92-2D)、电热恒温箱(DHP-9162型)、架盘药物天平(HC.TP12B.1)、手术镊子、虹吸管、YKKY雪花制冰机(FM180)、液氮罐、高效生物冰袋(BH-BDE50)。

1.4 试验方法

1.4.1 试验设计。试验采用单因素试验设计，将9头试验驴按照体重相近原则分为3组，每组3个重复，研究3种纤维水平不同的日粮对纤维二糖酶的影响。各组饲喂精粗比不同的饲料，高纤维日粮组(简称高纤维组)、常规日粮组(简称常规组)和高淀粉日粮组(简称高淀粉组)日粮精粗比和饲喂水平见表1。试验期包括预试期和采样期共25 d，其中预饲期17 d，采样期8 d。

表1 日粮精粗比和饲喂水平

1.4.2 样品的采集。在驴盲肠瘘处酒精棉球擦拭消毒，打开盲肠瘘盖并消毒。将虹吸管一端从盲肠瘘处插入驴盲肠，在虹吸管收集口处安上无菌收集瓶，挤压吸耳球，轻轻转动虹吸管收集管，使盲肠液顺虹吸管流入收集瓶中，迅速置于液氮罐中速冻，随后置于-80 ℃冰箱中保存备用。

1.4.3 样品的处理。取适量样品转入无菌离心管，放入台式高速冷冻离心机(TGL20M)后， 12 000 r/min高速离心15 min，离心后弃上清液，保留沉淀；向装有沉淀的离心管中加入1 ml的1%PBS试剂(pH 7.2～7.4)，使沉淀溶解；在沉淀溶解后,将样品冰浴后置于功率200 W的超声波细胞粉碎机(JY 92-2D)中粉碎，工作时间3 s,间隔时间10 s,重复30次后得到细胞破碎液，4 ℃下保存备用。

1.4.4 酶联免疫分析。对处理后的样品进行酶联免疫吸附试验分析，试验步骤均按照试剂盒说明书操作。

1.4.5 标准曲线的绘制。反应终止后，使用酶标仪测定其OD值，以空白孔调零，在450 nm波长处依序测定各孔的吸光度(OD值)。利用测定的吸光度值绘制出标准曲线，得到线性回归方程。

2 结果与分析

2.1 标准曲线 从图1可以看出，标准品浓度与其OD值呈正相关，其对应的线性回归方程为y=0.006x+0.735。

2.2 样品的实际浓度 将样品的OD值带入线性回归方程式，计算出样品的浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

X=(Y-0.735)/0.006×5

式中，X为样品的实际浓度(IU/L)；Y为样品的OD值；5为稀释倍数。

由表2可知，与常规组相比，高纤维组和高淀粉组对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性的影响均达到显著水平(P<0.05)。这说明改变日粮精粗比对驴盲肠微生物纤维二糖酶的活性有一定的影响。

表2 样品的OD值与实际浓度

注：*表示与常规组差异显著(P<0.05)。

3 讨论

驴是典型的单胃食草动物，属于后肠发酵类型。消化道的前段类似于典型的单胃动物，消化道的后段体积很大且寄生着数量巨大、种类繁多的微生物，类似于反刍动物的瘤胃，对粗饲料的消化起着重要作用，可使饲料中纤维素酵解成碳水化合物而被机体吸收。盲肠的解剖学结构非常适合微生物对结构性多糖的降解和发酵。目前，有关驴盲肠微生物与营养生理机能方面的研究尚不多见。王培基和方雷等在新疆驴对粗饲料的消化利用率及肠道微生物菌群特征方面进行了一些研究[4]。与其他畜种相比，我国对养驴业开发力度和研究深度也不够，其综合生产性能的潜力还有待于开发[5-6]。

该试验结果表明，与常规组相比，高纤维组和高淀粉组对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性影响的差异均达到显著水平(P<0.05)。这表明日粮精料比例过高或过低对驴盲肠微生物纤维二糖酶活性均有潜在的影响。该试验研究结果将有利于维持驴肠道微生态系统的平衡，保证动物的健康，促进生产性能，充分利用此地区的饲料资源，为大力推广驴养殖业提供科学依据。 饲料粗纤维成分在消化道内的降解率的改变是多种因素共同作用的结果，降解酶活性仅是估测方法之一。因此，驴盲肠内相关纤维分解的微生物菌群及酶活机制，有待于从微生物学与分子生物学方面进一步深入研究。

[1] 李景芳，陆东林，叶尔太·沙比尔哈孜．新疆养驴业发展现状和展望[J]．新疆畜牧业，2009(2)：16-19．

[2] 巴特尔．发展新疆驴产业培育增收新亮点[J]．新疆畜牧业，2011(1):6-10．

[3] 米尔卡米力·麦麦提,牛志涛.疆岳驴资源现状及其开发利用[J].当代畜牧，2011(12):38-39.

[4] 方雷，李团结，胡小明．疆岳驴对几种秸秆日粮利用率的比较试验[J]．安徽农业科学，2009(14):6443-6444．

[5] 王培基，赵芸君，王文奇，等．新疆驴的现状、品种特性及发展对策[J]．山东畜牧兽医，2007(4):15-16．

[6] 赵金香，赵义龙，魏冬，等．新疆驴产业现状与前景浅析[J]．草食家畜，2013(1):16-18．

The Impact of Different Forage to Concentrate Ratio of Diets on Donkey Cecal Microbial Cellobiase

JIANG Chun-yu1,2, WEI Yi-long1, LI Bu-lun1

(1.College of Animal Science, Tarim University, Alar, Xinjiang 843300; 2. Key Laboratory of Animal Husbandry Science and Technology of Xinjiang Production and Construction Corps, Alar, Xinjiang 843300)

To investigate the effects of different forage to concentrate ratio of diets on donkey cecal microbial cellobiase, three different forage to concentrate ratio diet group were established, including high-fiber diet group, the conventional diet group and high-starch diet group, respectively. After donkeywere fed, cecal microbial activity cellobiose was determined. The results showed that compared with the conventional group, the impact of high-fiber group and high-starch group on the donkey cecal microbial activity of cellobiose has significant differences(P<0.05).

Dietary forage to concentrate ratio; Donkey; Cecal microorganisms; Cellobiase

塔里木畜牧科技重点实验室项目(HS201313)。

江春雨(1979-)，女，贵州金沙人，讲师，硕士，从事基础兽医方面的教学与科研工作。

2015-04-07

S 816

A

0517-6611(2015)17-168-02