不结球白菜提取物对肉鸡免疫及抗氧化功能的影响

马景蕃， 刘喜明， 吴 程

(1.龙岩学院生命科学学院，福建 龙岩 364012;2.福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室，福建 龙岩 364012;3.龙岩学院艺术与设计学院，福建 龙岩 364012)

不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)是长江中下游地区主栽蔬菜品种之一，中医认为不结球白菜微寒味甘，具有养胃生津、利尿通便、除烦解渴、清热解毒的功效［1］。国内外学者已从不结球白菜中分离到一系列复杂的化学成分，其中相当一部分具有重要的生理活性［2］。日本科学家发现，不结球白菜提取物抗氧化锈蚀的效果很好，其中尤其是未完全成熟，叶形舒展的嫩株提取物抗氧化效果更好［3］。在美国国立癌症研究所发表的防癌食品排行榜中，不结球白菜排在大蒜的后面，位列第二［4］。最新的研究还发现，不结球白菜提取物能提升血清中雌激素代谢物——2羟雌酮的水平，对预防乳腺癌有益处［5］。经现代药理学研究结果表明不结球白菜具有很好的免疫调节作用。Meyer等［6］报道，饲粮中添加不结球白菜提取物可提高小鼠血清抗氧化活性，龙盛京等［7］研究结果表明不结球白菜和百里香提取物可以提高鸡肉和鸡蛋的氧化稳定性及更有效地延缓肉仔鸡脂质氧化。本试验通过在日粮中添加不同比例的不结球白菜提取物(NCCE)，运用现代技术来研究其对肉鸡生产性能、屠宰性能、免疫器官指数、血清免疫指标及血清抗氧化水平的影响，旨在探讨NCCE对AA肉鸡免疫功能及抗氧化功能的影响，为NCCE添加剂在肉鸡生产上应用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

同一批出雏，体质健壮的1日龄AA肉仔鸡240羽，购自森宝(龙岩)公司。

不结球白菜品种苏州青由龙岩学院生物技术课题组提供，定植30 d后进行采收，用聚乙烯膜真空包装后迅速于液氮中冷冻，经真空冷冻干燥，粉碎过60目筛。称取100 g粉末，用75%的乙醇500 ml超声提取35 min，再进行回流提取3 h后抽滤，滤渣重复以上操作1次，合并2次的滤液。经旋转蒸发浓缩至近干，即为不结球白菜的粗提物。粗提物用蒸馏水溶解，得到水悬液，转入500 ml分液漏斗中，用等体积乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，旋转蒸发浓缩后真空冷冻干燥至恒质量，即为不结球白菜提取物(NCCE)，主要组分为黄酮和多酚类等生物活性物质［6］，将其置于4℃冰箱冷藏保存备用。

1.2 试验动物分组处理与饲养管理

试验用鸡随机分为4组，每组3个重复，每个重复20羽，试验期35 d，4组鸡饲养条件一致，均采用地面平养，自由采食及饮水，给24 h光照。对照组饲喂基础日粮(玉米-豆粕型)，配制参照NRC 1994《家禽的营养需要量》，基础日粮组成及营养水平见表1。试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组为分别在基础日粮中添加100 mg/kg、500 mg/kg、900 mg/kg的NCCE。按常规免疫程序对所有试验鸡进行免疫接种。

表1 基础日粮组成及营养水平Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets

1.3 测定指标及检测方法

1.3.1 生产性能的测定 分别在肉鸡21、35日龄时，将每组肉鸡个体空腹称质量，统计耗料量，计算各阶段平均日增质量及料肉比。

1.3.2 屠宰性能及免疫器官指数的测定 肉鸡在35日龄时，每组随机选取体质量相近的健康鸡9羽，早晨空腹12 h，称质量，采用颈外放血致死，分别测定其屠体质量、全净膛质量、腹脂质量和屠宰性能［8］，取胸腺、法氏囊及脾脏，剔出脂肪并用滤纸吸干血液后称质量，计算免疫器官指数，免疫器官指数(g/kg)=器官质量/体质量。

1.3.3 血清抗体和补体C3、C4的测定 肉鸡在35日龄时，每组随机选取体质量相近的健康鸡9羽，早晨空腹12 h，心脏采血，3 000 r/min离心10 min，取血清采用免疫比浊法测定抗体IgG、IgM、IgA及补体C3、C4，按试剂盒操作说明进行试验，试验试剂盒均购自南京建成生物有限公司。

1.3.4 血清抗氧化水平的测定 血清SOD活性采用黄嘌呤氧化物酶法测定，T-AOC采用比色法测定，GSH-Px采用二硫代二硝基苯甲酸法测定，MDA含量采用硫巴比妥酸法(TBA)测定。试剂盒均购自南京建成生物有限公司。

1.4 数据处理与统计分析

采用SPSS 19.0软件One-way ANOVA方法进行统计分析，并采用LSD法多重比较。

2 结果与分析

2.1 不结球白菜提取物(NCCE)对肉鸡生产性能的影响

由表2可知，在肉鸡饲养前期(0～21 d)，各试验组与对照间的日增质量与料肉比差异均不显著;但在饲养后期(22～35 d)，各试验组与对照相比，日增质量均有所提高，其中，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组较对照分别提高了4.92%和7.88%，达到显著性差异水平。饲养后期各试验组与对照相比，料肉比均有所下降，其中，试验Ⅱ组与对照相比，料肉比降低了9.92%，达到显著性差异水平。

2.2 NCCE对肉鸡屠宰性能的影响

由表3可知，各试验组与对照相比，肉鸡活质量均有所增加，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组较对照分别增加了3.23%和4.48%，达到显著性差异水平;各试验组与对照相比，肉鸡的屠宰率均有所增加，但增加不显著;各试验组与对照相比，肉鸡的全净膛率均有所增加，其中，试验Ⅲ组比对照增加了3.59%，达到显著性差异水平;各试验组与对照相比，肉鸡的腹脂率均有所下降，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组较对照分别下降18.26%、21.58%和23.65%，达到显著性差异水平。

表2 NCCE对肉鸡日增质量和料肉比的影响Table 2 Effects of NCCE on the growth performance and feed conversion of broilers

表3 NCCE对肉鸡屠宰性能的影响Table 3 Effects of NCCE on slaughter performance of broilers

2.3 NCCE对肉鸡免疫器官指数的影响

由表4可知，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组与对照相比，肉鸡的脾脏指数均有所增加，但增加不显著;各试验组与对照相比，法氏囊指数均显著增加;各试验组与对照相比，胸腺指数也有增加趋势，其中试验Ⅱ组和试验Ⅲ与对照相比差异显著。

2.4 NCCE对肉鸡血清免疫指标的影响

由表5可见，与对照组相比，试验Ⅰ组和Ⅱ组均能不同程度地提高肉鸡血清的免疫水平。其中血清IgG含量分别提高49.9%(P＜0.05)和63.8%(P＜0.05);血清IgM含量分别提高21.0%(P＞0.05)和68.0%(P＜0.05);血清IgA含量分别提高6.4%(P＞0.05)和0.4%(P＞0.05);血清补体C3含量分别提高0.2%(P＞0.05)和38.7%(P＜0.05);试验Ⅰ组血清补体C4含量比对照提高27.2%(P＜0.05)，但试验Ⅱ组和试验Ⅲ组的含量呈下降趋势;另外，试验Ⅲ组的血清IgG、IgM和补体C3均呈下降趋势，但与对照无显著性差异。

表4 NCCE对肉鸡免疫器官指数的影响Table 4 Effect of NCCE on immune organ index of broilers

2.5 NCCE对肉鸡血清抗氧化水平的影响

由表6可以看出，对照肉鸡血清SOD活性最低，试验Ⅰ组次之，试验Ⅱ组最高，试验Ⅱ组比对照提高18.4%(P＜0.05)，对照、试验Ⅰ组和试验Ⅲ组的SOD活性无显著差异;血清T-AOC活性Ⅱ组最高，对照最低，试验Ⅱ组比对照提高了21.2%(P＜0.05)，添加NCCE各试验组间差异不显著(P＞0.05);添加NCCE各试验组血清GSH-Px活性均高于对照(P＞0.05)，其中试验Ⅱ组最高，比对照提高2.6%(P＞0.05);各试验组肉鸡血清MDA含量均低于对照，但无显著差异。

表5 NCCE对肉鸡血清免疫球蛋白及补体C3、C4的影响Table 5 Effects of NCCE on immunoglobulins，complements C3 and C4 in broilers sera

表6 NCCE对肉鸡血清抗氧化水平的影响Table 6 Effects of NCCE on antioxidant levels in broilers sera

3 讨论

3.1 NCCE对肉鸡生产性能和屠宰性能的影响

试验结果表明添加500 mg/kg的NCCE能显著提高肉鸡后期日增质量和饲料转化率，显著增加肉鸡活质量，降低肉鸡腹脂率。各试验组与对照相比，肉鸡的屠宰率有所增加，全净膛率有所增加(P＜0.05)。可见NCCE对肉鸡的产肉性能具有良好的促进作用，其机制可能与NCCE具有的广泛生物学活性有关，NCCE含有黄酮及多酚类等活性物质，Afolabi研究结果［9］表明，黄酮类物质能明显改变小鼠胃黏膜的损伤，对其具有保护作用;Yakubu等研究结果［10］表明，添加0.08%的十字花科植物西兰花提取物(主要成分为黄酮及多酚类物质)对AA肉鸡具有一定的促生长作用，这与本试验的结果相类似。可见添加NCCE后，可能使肉鸡的胃黏膜得到了保护，进而提高了营养物质的消化率和肉鸡的生长速度。

3.2 NCCE对肉鸡免疫指标的影响

免疫器官是动物有机体执行免疫功能的组织，是淋巴细胞和其他免疫细胞发生、分化、增殖和产生免疫应答的场所［11］。动物有机体免疫功能的强弱与免疫器官的发育有着密切的关系。本试验结果表明，试验组与对照相比能提高免疫器官指数，这说明NCCE可以有效提高肉鸡免疫器官的发育，从而提高免疫器官指数，最终使机体的免疫力提高。Pattanaik等［12］报道，添加植物黄酮类物质，可显著提高肉雏鸡免疫器官指数。Fasscas等［13］报道，植物多酚可增加正常小鼠和免疫抑制小鼠的脾脏和胸腺质量。可见，不结球白菜活性提取物可以促进免疫器官的发育，抑制其细胞凋亡，提高机体抵抗力。

免疫球蛋白质是执行体液免疫，具有抗体活性的蛋白质，是衡量动物有机体免疫功能的重要指标［14］。本试验结果表明，试验组肉鸡血清中IgG、IgM、IgA及补体C3、C4水平都有一定的提高，Milos等［15］通过研究五味子黄酮对小鼠免疫生成细胞的影响，发现五味子黄酮可使免疫球蛋白数量明显增多;Sato等［16］报道党参主要活性成分党参多酚具有明显的增强雏鸡免疫功能的作用。NCCE可显著提高肉鸡血清中免疫球蛋白含量，从而使机体免疫力增强。本试验高剂量组(试验Ⅲ组)并未显示显著的促进作用甚至还有降低的趋势，这可能与机体对NCCE的适应性有关。

3.3 NCCE对肉鸡血清抗氧化能力的影响

SOD、GSH-Px是防御体系中清除H2O2的主要物质［17］，血清中SOD、GSH-Px活力间接反映了动物有机体清除自由基的能力，其活性越高，越有利于动物机体健康［18］。添加NCCE在一定程度上提高了血清中SOD、GSH-Px活力，可能是由于含有黄酮和多酚类等生物活性物质阻碍过氧化物的形成［19］。T-AOC可反映血清抗氧化系统功能情况，本试验结果表明，各试验组血清T-AOC活性均显著高于对照，说明添加NCCE能提高肉鸡血清的总抗氧化能力。有学者对NCCE进行体外抗氧化试验，发现其多酚类物质有很强的抗氧化作用，而其他次要成分发挥着重要的协同作用［20］。MDA含量可反映机体脂质过氧化的程度即机体氧化损伤的程度［21］，本试验中各试验组肉鸡血清MDA含量均低于对照，这可能是NCCE多种抗氧化成分进入循环系统最终在血清中表现出抗氧化活性的结果。

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