柴石解郁片中黄芪甲苷HPLC-ELSD测定方法的建立及评价

杨美林，仲崇琳，徐军

(吉林省中医药科学院，长春 130012)

柴石解郁片是由夏枯草、丹参、防己等十二味中药经一定的工艺制成的胶囊剂。该药解郁安神，用于治疗抑郁症(肝郁气滞型)的患者。为了更好地控制柴石解郁片的质量，本试验建立了HPLC-ELSD法测定柴石解郁片中黄芪甲苷含量的方法[1～5]。

1 仪器与试药

LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津公司)；N2010色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；Alltech2000ES型蒸发光散色器(美国GRACE公司)。

柴石解郁片(吉林省中医药科学院制，批号：130301、130302、130303)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μ)；流动相：乙腈-水(32∶68)；流速：1.0mL/min；检测：蒸发光散色器；漂移管温度：105℃；雾化气体：氮气；流速：3.0L/min；柱温：室温。

2.2 对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.25mg/mL的黄芪甲苷对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，研细，精密称取6g，置具塞锥形瓶内，加入甲醇50mL溶解，密塞，超声处理30min，放冷后过滤，取续滤液25mL蒸干，残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL，合并正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，即得。

2.4 专属性试验

分别吸取“2.2”、“2.3”项下对照品溶液10μL、供试品溶液及阴性对照品溶液各20μL，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱(图1)。

A.对照品HPLC图谱；B.样品HPLC图谱；C.阴性对照品HPLC图谱

由图1可知，阴性对照品溶液在黄芪甲苷峰位置处无吸收峰，黄芪甲苷峰与其他成分基线分离。

2.5 线性关系的考察

分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定其峰面积积分值。以峰面积积分值的自然对数(Y)为纵坐标，黄芪甲苷进样量的自然对数(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=6327.62+2 719 018.63X，r=0.9997。结果表明，黄芪甲苷线性范围为1.024μg～5.12μg。

2.6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下连续进样5次，得其色谱峰面积的相对标准差为0.60%，表明其精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取同一批号供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下，每隔3h进样1次，测定峰面积，得其色谱峰面积的相对标准差为0.78%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.8 重现性试验

取同一批号的样品，按“2.3”项下方法制备，在“2.1”项色谱条件下平行测定5次，测得黄芪甲苷含量分别为0.0949mg/片、0.0963mg/片、0.0947mg/片、0.0948mg/片、0.0965mg/片，平均0.0954mg/片，RSD=0.92%，表明该方法重现性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的样品6份，分别精密加入一定量黄芪甲苷对照品溶液，按照“2.3”项下方法制备回收率样品，测定黄芪甲苷含量并计算回收率，结果黄芪甲苷平均回收率为97.59%，RSD=0.92%，测定结果表明，该方法回收率良好。

2.10样品含量测定

分别称取3个批号的样品，按“2.2”、“2.3”项下方法制备对照品及供试品溶液，按上述色谱条件分别吸取对照品溶液5μL、15μL及供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算含量。结果见表1。

表1样品含量测定结果

Table1Resultsofcontentdeterminationofsamples

批 号Batchnumber黄芪甲苷含量(mg/片)Astragalusglycosidescontent(mg/tablet)1303010.09541303020.09721303030.0961

3 讨论

根据测定结果，柴石解郁片中黄芪甲苷的含量均不少于0.0954mg/片。本研究所用的测量柴石解郁片中黄芪甲苷的定量分析方法结果准确、重现性好，可作为控制该制剂质量的手段之一。柴石解郁片中其它药材成分含量的定量分析，有待于进一步研究。

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