乌美天麻与野生天麻不同部位化学成分对比研究

刘继永，赵卉，王玉方，周长霞，张亚玉※，刘敏

(1．中国农业科学院特产研究所，长春 130112； 2．辉南县喜霞林下中药材种植专业合作社，吉林 辉南 135100；3．吉林省标准研究院，长春 130022)

植物天麻(GastrodiaelataBlume)属兰科天麻属多年生寄生植物，其寄主为蜜环菌(Armillariamellea(Vahl ex Fr)Quel)，以蜜环菌的菌丝或菌丝的分泌物为营养来源，借以生长发育，生于林下湿润肥沃的土壤上。天麻为兰科植物天麻的干燥块茎，是我国名贵的中药材之一，又名赤箭、赤箭芝、独摇芝、定风草、离母、合离草。据本草纲目记载，天麻辛、温、无毒，主治诸风湿痹、四肢拘挛、瘫痪不遂、眩晕头痛等症[1]。

“乌美”天麻是吉林省辉南县“喜霞林下中药材种植专业协会”通过野生“长白山乌杆天麻”提纯复壮选育出的天麻品种，2010年，“乌美”天麻被吉林省农委、省农作物品种审定委员会审定通过，成为吉林省目前惟一审定通过的天麻品种。

为了系统评价“乌美”天麻质量，本试验对“乌美”天麻和野生天麻根茎、地上茎和花序中氨基酸和天麻素含量进行对比分析。

1 材料

1.1 材料

“乌美”天麻采自吉林省辉南县“喜霞林下中药材种植专业协会”的林下种植基地，栽培基质为火山灰。野生天麻采自吉林省辉南县(东经126°45′，北纬42°32′，海拔734m)，生长基质为林下腐殖土。

1.2 仪器与试剂

全自动氨基酸分析仪(L-8900，日本日立公司)，超高效液相色谱仪(ACQUITY UPLC H-Class，Waters公司)，电热鼓风干燥箱(DHG-9240A，上海一恒科技有限公司)，多样品平行蒸发仪(Syncore101，Buchi公司)，回流提取器(500mL，上海本昂仪器公司)。

天麻素标准品(中国药品生物制品检定所)，乙腈、甲酸(色谱纯，Fisher公司)，超纯水(自制)，无水乙醇(分析纯，北京化工厂)，浓盐酸、苯酚、柠檬酸钠、氢氧化钠、氯化钠(优级纯，北京化工厂)，氨基酸混合标准溶液(Type H，日本和光纯药工业株式会社)。

2 方法

2.1 天麻素测定

2.1.1样品溶液制备精密称取“乌美”天麻和野生天麻根茎、茎和花序的干燥粉末(表1)，用50%乙醇于85℃水浴回流提取4h，放冷，称重，补足减失的乙醇，过滤，减压浓缩，用乙腈∶水(3∶97，v/v)溶液定溶于25mL容量瓶，待测。

表1不同部位天麻素含量测定供试样品质量

Table 1 The samples quality for test gastrodine of different parts of Gastrodia (g)

2.1.2标准品溶液制备精密称取天麻素标准品，加乙腈配制成浓度为0.05mg/mL的标准品溶液。

2.1.3色谱条件色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T(2.1mm×50mm，31.8μm)；柱温35℃；流速0.5mL/min；流动相A：0.05%甲酸溶液，0min～3min，100% A；检测器PDA；检测波长220nm。

2.1.4线性关系标准品溶液按2.5μL、5.0μL、7.5μL、10μL进样，在上述色谱条件下测定峰面积，以峰面积为纵坐标、含量(mg/mL)为横坐标绘制标准曲线，得出天麻素回归方程为Y=8.37×106x，R2=100。

2.1.5精密度标准品溶液重复进样5次，每次5.0μL，天麻素面积RSD值为0.3%。说明该方法重复性良好。

2.2 氨基酸测定

供试材料中17种氨基酸含量依照“GB/T5009.124-2003”有关方法进行测定。用四分法缩减分取供试样品各25g，粉碎并过0.25mm孔径标准筛。精密称取粉碎后样品(表2)，于50mL水解管中，加入15mL酸解剂，在氮气保护状态下封管。将水解管放在110℃恒温干燥箱中水解22h。待冷却到室温后用超纯水定容至50mL，用移液管吸取1.0mL滤液置于真空干燥箱中，70℃蒸干，残留物用同体积超纯水重复清洗蒸干2次，加入1.0mL上机缓冲液稀释，摇匀后过微孔滤膜待测。

精密称取“乌美”天麻和野生天麻根茎、茎和花序的干燥粉末(表2)，分别用15mL 6.0mol/L的盐酸溶液于110℃水解22h，放冷，定容，待测。

表2测定不同部位天麻氨基酸含量供试样品质量

Table 2 The samples quality for test AA of different parts of G.elata (g)

3 结果与分析

3.1 2种天麻不同部位天麻素含量分析

天麻素标准品UPLC色谱图(图1)。

图1 天麻素标准品UPLC色谱图

按“2.1.3”项下色谱条件进样测定(图2～图7)，计算，野生天麻和“乌美”天麻3个部位天麻素含量见表3。

表3野生天麻和“乌美”天麻3个部位天麻素含量

Table 3 Gastrodin contents in three parts of Wild G.elata and Wu-mei G.elata (g/kg)

图2 图3

图4

图5 图6

图7

3.2 2种天麻不同部位氨基酸含量分析(表4)

表4野生天麻和“乌美”天麻3个部位氨基酸含量

Table 4 AA contents in three parts of Wild G.elata and Wumei G.elata (g/100g)

表3、表4分别给出了野生天麻和“乌美”天麻根茎、茎和花序中天麻素和氨基酸含量。2种天麻中，天麻素及17种氨基酸和总氨基酸含量大小顺序为根茎<茎<花序，这与植物源-库关系理论完全相符合。“乌美”天麻花序中天麻素含量是根茎的20.95倍、是茎的2.77倍；野生天麻根

茎中天麻素含量是根茎的13.62倍、是茎的2.86倍。“乌美”天麻花序中天麻素含量是野生天麻的1.32倍；野生天麻根茎中除Glu、Ile、Leu、Phe略高于“乌美”天麻外，其它氨基酸和总氨基酸含量均低于“乌美”天麻。说明“乌美”天麻比野生天麻具有较好的综合品质。

4 讨论

实验结果表明，从2种天麻中天麻素及氨基酸含量在不同部位中量的分配来看，“乌美”天麻各项指标均略高于野生天麻，其原因可能是由于遗传背景和生长环境不同所造成。

4.1 栽培基质

“乌美”天麻是以火山灰为栽培基质，野生天麻生长基质大多为林下腐殖土，火山灰的透气性略优于腐殖土，优良的栽培基质有利于天麻生长。

4.2 菌材

“乌美”天麻是以人工培育的蜜环菌菌棒或树叶为菌材，其营养成分丰富[2]。人工培养的蜜环菌菌索中蛋白质、脂肪、多糖含量均高于野生菌索；氨基酸组成二者相似，但人工培养的菌索氨基酸总量高于野生菌索。

[1]徐锦堂,兰进.天麻的营养繁殖茎及其抑菌功能[J].植物学报,2001,43(4):348-353.

[2]孙小卫,沈业寿.野生和人工培养的蜜环菌菌索营养成分比较[J].生物学杂志,2004,(2)：23-25.