养心氏片对大鼠冠脉结扎致心肌缺血模型的影响

姜作玲 高 莉 王 辉 赵俊梅 梅 颍

(1 上海医药集团青岛国风药业股份有限公司,青岛,266071; 2 南京市市级机关医院中医科,南京,210018)

养心氏片对大鼠冠脉结扎致心肌缺血模型的影响

姜作玲1高 莉1王 辉1赵俊梅1梅 颍2

(1 上海医药集团青岛国风药业股份有限公司,青岛,266071; 2 南京市市级机关医院中医科,南京,210018)

目的:研究养心氏片对冠脉结扎致心肌缺血大鼠的影响作用。方法:将90只健康SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、硝苯地平对照组、养心氏片高、中、低剂量组,连续给药10 d后,行冠脉左前降支结扎术制备大鼠心肌缺血模型,检测心肌力学变化,测定各组血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量变化,并用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积。结果:养心氏片能明显减少心肌梗死范围,同时可以改善心肌缺血大鼠CK、LDH等血清心肌酶学及心电图状况等指标的异常(P<0.05)。结论:养心氏片对冠脉结扎致大鼠心肌缺血有保护作用。

养心氏片;心肌缺血;保护

养心氏片是由黄芪、党参、丹参、葛根、淫羊藿、人参、甘草等十三味药材组成,采用现代先进工艺制成的中药制剂。其功能主治为益气活血,化瘀止痛。用于气虚血瘀所致的胸痹,症见心悸气短、胸闷、心前区刺痛;冠心病心绞痛见于上述证候者。

本研究通过观察养心氏片对大鼠冠脉结扎致心肌缺血前后心肌梗死范围、心肌力学、心电图状况、血清生化等指标的影响,探讨了养心氏片对抗大鼠心肌缺血的影响作用。实验采用手术开胸结扎冠脉左前降支导致大鼠急性心肌缺血模型,通过观察心肌缺血前后心电图、心肌力学、心肌梗死范围、血清酶学等指标,来评价养心氏片对心肌梗死、心绞痛、冠心病等疾病的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 试验动物 SD大鼠,雌雄各半,体重180～200 g,90只,由吉林大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK-(吉)2007-0015。

1.2 药品及试剂 养心氏片,由青岛国风药业股份有限公司提供,批号:080501;该药成人日拟用剂量为10～15丸/次,3次/d,0.05 g/丸,即成人每日每千克体重用量为0.037 5 g(成人均以60 kg体重计算),实验时用蒸馏水配制。硝苯地平片:由山西云鹏制药有限公司生产,批准文号:国药准字H4020798,产品批号:C080502。成人日用量为30 mg。红四氮唑(TTC)C19H15N4Cl=334.81,中国惠世生化试剂有限公司,上海,批号:070708(避光保存)。CK检测试剂盒;LDH检测试剂盒;SOD黄嘌呤氧化酶法检测试剂盒;MDA硫代巴比妥酸法检测试剂盒;NO硝酸还原酶法检测试剂盒(以上试剂盒均来自南京建成生物工程研究所,批号:20091002)。

1.3 仪器 医用台式离心机(TDL80-2B型,Anke,上海安亭科学仪器厂生产);BP121S型电子天平(SARTORIUS,上海良平仪器仪表有限公司);WH-2微型旋涡混合仪(上海泸西分析仪器厂),HX-300动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司);BL-420E+生物功能实验系统及其配套软件(成都泰盟科技有限公司)。

1.4 试验方法 按性别、体重和手术时间将大鼠随机分为以下6组,每组15只动物,雌雄各半,分组及剂量见表1。

表1 大鼠实验分组和剂量设计一览表

注:药物经蒸馏水配制成适宜浓度后,按10 mL/kg(体重)的给药体积灌胃给药。

健康SD大鼠,按“表1实验动物与分组”项下相关内容进行分组,各组动物实验顺序按时间交叉进行,连续给药10 d(假手术组、模型对照组给予等容积溶媒),末次给药后1 h,ip 40 mg/kg戊巴比妥钠麻醉,将动物仰卧位固定,行气管插管术[1],接人工呼吸器(频率为55次/min,调节潮气量16,吸∶呼=1∶2),稳定5 min,记录一段正常Ⅱ导联心电图(ECG)。于第3、4肋间打开胸腔,剪破心包膜,于左冠状动脉前降支下穿线以备结扎[2]。稳定10 min记录一段ECG,剔除稳定后ECG仍不正常者。行冠脉结扎术,阻断血流30 min,迅速关闭胸腔,记录结扎后5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、60 min的Ⅱ导联心电图(并读出ST段(J点)、T波值)及10 min、30 min、45 min、60 min、90 min心率(HR)值,最后一次ECG记录完后,即刻取血、取心脏,测定CK、LDH、SOD活力和MDA、NO含量等生化指标及心肌缺血与梗死范围等形态学指标[3-4]。假手术组大鼠手术过程中除不结扎外,其余同上[5-8]。

2 结果

2.1 对心肌梗死范围影响 梗死范围用TTC染色法。处死动物,立即取出心脏,用生理盐水冲洗干净心脏内余血,用滤纸吸去水分,称重,顺房室沟将心肌平行切成厚度约1 mm的片状,置1%TTC缓冲溶液中37 ℃水浴中充分反应7 min,正常心肌染成为红色,梗死区心肌不着色。将未染色部分心肌切下称重,计算梗死区心肌重量占左心室重量的百分比[10-15]。

结果表明,与假手术组比较,模型组大鼠心肌出现显著的缺血梗死区域(P<0.01)。与模型组比较,硝苯地平组、养心氏片高、中剂量组梗死区域明显减少(P<0.05)。养心氏片低剂量组心肌梗死区域的减少与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与硝苯地平组比较,养心氏片高、中剂量组降低心肌梗死面积的强度与之差异无统计学意义(P>0.05),其中以养心氏片高剂量组作用最强。各组对心肌缺血大鼠心肌梗死范围的影响见表2。

表2 养心氏片对冠脉结扎致心肌缺血大鼠心肌梗死范围的影响±s)

注:与模型对照组比较,*P<0.05，**P<0.01。

2.2 各组对血清生化指标的影响 与假手术组比较,结扎大鼠冠脉后,模型动物血清中CK、LDH的活力明显升高,SOD活力明显下降，MDA含量明显升高,NO含量明显下降(P<0.01)。与模型组比较,硝苯地平、养心氏片高剂量能明显改善心肌缺血大鼠各血清心肌酶学等指标的异常(P<0.05);养心氏片中剂量组能明显降低心肌缺血大鼠血清MDA的含量,升高超氧化物歧化酶的活力(P<0.05);养心氏片低剂量能明显降低心肌缺血大鼠血清MDA的含量(P<0.05)。结果详见表3[11]。

2.3 各组对心率的影响 与假手术组比较,结扎冠脉后大鼠的心率变化率明显升高(P<0.05)。与模型组比较,硝苯地平能明显降低心肌缺血大鼠心率升高(P<0.05);养心氏片高剂量组能明显降低心肌缺血大鼠心率升高(P<0.05);养心氏片中、低剂量组能分别降低结扎后30、10 min时大鼠心率(P<0.05);对心率的影响结果详见表4。

2.4 各组对心肌缺血模型大鼠标准Ⅱ导联心电图(T波、S-T段(J点))指标的影响 硝苯地平组、养心氏片高、中剂量组能明显降低冠脉结扎致大鼠各时间点标准Ⅱ导联S-T段(J点)的抬高(P<0.05),各给药组均能明显降低冠脉结扎致大鼠各时间点标准Ⅱ导联T波的抬高(P<0.05),改善心肌缺血时大鼠的心电图状况。结果详见表5、表6中所示。

表3 养心氏片对冠脉结扎致心肌缺血大鼠血清生化指标的影响±s,n=10)

注:模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。

表4 养心氏片对冠脉结扎致心肌缺血大鼠心率(HR)的影响±s,n=10)

注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。

表5 养心氏片对冠脉结扎致心肌缺血大鼠标准Ⅱ导联S-T段(J点)的影响±s,n=10)

注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。

表6 养心氏片对冠脉结扎致心肌缺血大鼠标准Ⅱ导联T波的影响±s,n=10)

注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。

3 讨论

心脏是机体血液循环的“泵”器官,是保证全身供血、供氧的重要组织,而心脏本身做功所需要的能量和营养物质几乎唯一地由冠脉循环提供。当心肌缺血时,使冠脉血流量不足,导致心肌氧的供需平衡失调,心肌缺血缺氧会导致心肌细胞代谢过程紊乱,尤其是能量物质生成锐减,正常心功能难以维持,心肌收缩及舒张功能障碍;又因血流中断,有害产物难以清除,心肌细胞和血清中各种酶等发生改变,造成心肌细胞损伤。同时由于心功能的下降,导致心肌力学和血流动力学各项指标发生不同程度的改变。心肌细胞内含有丰富的酶,如肌酸激酶等,心肌细胞损伤死亡后,酶随着细胞膜通透性的增高而入血。随着血流的减少,缺血心肌处于缺血缺氧状态,脂质极易发生过氧化反应,形成脂质过氧化物。由于缺氧所致过氧化物和自由基的增多,心肌细胞膜受损更甚,外漏之血液中的肌酸激酶等的增多[11,12,14]。

养心氏片通过降低心肌缺血大鼠的HR,抑制大鼠冠脉结扎所致T波升高的作用,明显减小心肌坏死百分比%,使得心肌耗氧量降低,改善缺血心肌氧供需失衡的状况。同时养心氏片能减少心肌酶的漏出,降低血清中CK、LDH活性;降低因脂质过氧化而升高的MDA含量,升高SOD活性,提高缺血心肌细胞的抗氧化能力,减少脂质过氧化引起的自由基损伤,又能升高血清NO含量,保护受损心肌细胞,降低心肌受损程度[5-6]。

综上所述,养心氏片抗心肌缺血主要作用机制可能是,稳定保护缺血心肌细胞,增加冠脉供血,减少心肌受损程度,减少梗死面积;改善心肌力学,降低心肌耗氧量。养心氏片经过现代先进工艺提取、纯化,制成片剂后,其有效成分含量提高,通过对大鼠冠脉结扎致心肌缺血模型的实验研究,表明养心氏片具有明显的抗心肌缺血的作用,其中以片剂高剂量作用最强,为临床广泛应用于心血管疾病治疗提供了试验依据[12-14]。

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(2014-04-26收稿 责任编辑：王明)

The Effects of Yangxinshi Tablet on Myocardial Ischemia in Rats

Jiang Zuoling1, Gao Li1， Wang Hui1, Zhao Junmei1, Mei Ying2

(1ShanghaiPharmaceuticalGroupQingdaoGrowfulPharmaceuticalCo.Ltd，Qingdao266071，China；2NanjingGovernmentalHospital,Nanjing210018，China)

Objective:To study the effects of Yangxinshi tablet on myocardial ischemia induced by ligation of the coronary artery in rats.Methods:Ninety rats were randomly divided into six groups: sham group，model group，Yangxinshi tablet high dose group，medial dose group，low dose group and Nifedipine group. After 10 days of continuous administration，rat myocardial ischemia model was induced by ligation of the left anterior descending branch of the coronary artery, then the changes in myocardial mechanics were detected. The activities of creatine kinase(CK)，lactate dehydrogenase (LDH)，superoxide dismutase(SOD), malonaldehyde(MDA), nitric oxide(NO) were determined in each groups. Myocardial infarction sizes were measured after triphenyl tetrazolium chloride (TTC) staining.Results:Yangxinshi tablet significantly reduced myocardial infarction size, obviously decreased activities of CK, LDH and other Serum Myocardial Enzyme and improved abnormalities of ECG(P<0.05).Conclusion:Yangxinshi tablet shows protective effects on myocardial ischemia.

Yangxinshi tablet；Myocardial ischemia；Protective effects

“十一五”国家科技支撑计划项目(编号:2006BA106A18-12)

梅颍(1960.12—),女,主任中医师,研究方向:老年病,E-mail:meiyingy1@163.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.04.021