高效液相色谱-串联质谱在动物性食品兽药残留检测中的应用

金红岩 西藏职业技术学院850030

李封赛 东北农业大学动物医学院150030

封家旺 西藏职业技术学院850030

高效液相色谱-串联质谱在动物性食品兽药残留检测中的应用

金红岩 西藏职业技术学院850030

李封赛 东北农业大学动物医学院150030

封家旺 西藏职业技术学院850030

近年来，动物性食品安全问题被广泛关注，特别是动物性食品兽药残留问题。因此，对兽药残留检测方法的研究成为热点，特别是兽药残留问题，如何建立快速、灵敏度高和高通量的检测技术尤其受到关注。目前，针对兽药残留有多种检测方法，但多数不够完善，存在一定弊端，相比之下，高效液相色谱-串联质谱（HPLC-LC/MS）可实现高效分离，定性和定量准确度高，日益成为兽药残留检测的确证方法［1］。本文重点分析HPLC-LC/MS在动物性食品兽药残留分析领域的应用。

高效液相色谱-串联质谱；兽药残留；检测

兽药被用于动物疾病的防控，但由于不合理的使用，导致兽药在动物体内蓄积，人类食入兽药残留超标的食品，也会导致药物蓄积于体内，影响健康。在动物性食品兽药残留检测方法中，HPLC-LC/MS可实现在一级质谱条件下获得待见组分的准分子离子峰，并将准分子离子裂解，获得子离子峰，准确辨别目标化合物，排除基体干扰，具备灵敏度高、进样量少和基体干扰小等特点。因此，HPLC-LC/MS已成为较先进的动物性食品兽药残留检测方法。近年来，各国学者不断对HPLC-LC/MS检测方法进行创新和改进，为兽药残留监控体系的建立和完善提供保障［2］。

1　兽药残留原因分析

导致动物体内兽药残留超标的原因很多，但多数是由于养殖过程中用药不合理造成的，主要体现在不能严格执行给药时间和给药剂量，不按规定部位给药，未严格执行兽药的休药期，为躲避宰前检查而滥用兽药，使用违禁兽药和养殖设备遭受污染［3］等。

2　样品前处理

（1）提取方法。索氏提取：充分分析提取物的热稳定性，保证不易分解。本方法无需转移提取液，基质效应相对较小，但提取周期相对较长，提取过程中溶剂消耗量多，通常多用于含水量少的试样提取。超临界流体萃取：提取物的温度与压力超过临界时，状态介于气液态，此时的状态称为超临界状态。此时其密度接近液体，扩散系数比液体高，该流体表面张力小，更易渗透。此方法溶剂消耗量少，实验淋洗剂为二氧化碳。微波辅助萃取：微波作用于试样，可穿透试样，与目标提取物充分作用，使试样受热均匀，提取过程中极性溶剂可吸纳能量，加快高热环境下不稳定化合物的分离速度。微波萃取是在密闭条件下调动溶剂分子的运动，提高溶剂的活性，使微波萃取过程得以优化［4］。

（2）净化方法。液液萃取：该法是根据待测组分和样品基质的物理化学性质间存在差异，二者在互不相溶的两种体系中溶解度不同，符合上述条件即可进行液液萃取净化。固相萃取：由于原理不同分为两种情况，一种是待测试样过柱后能保留样品中杂质，但目标物可流出。另一种是目标物留在柱床，干扰物质经洗涤后流出萃取柱。固相萃取柱的填料通常使用活性炭或弗罗里硅土，此方法节省时间、精度高、溶剂使用少、选择性好，可用于痕量富集，避免乳化。基质固相分散：试样与一定量的反相键合硅胶混合，通过反复研磨，使样品和吸附剂的固定颗粒混合均匀，当混合物处于半固体状态时装柱，洗脱过程借鉴固相萃取法。本方法样品净化速度快，可减少样品和溶剂的使用量，整合了其他提取净化方法的优势，在很大程度上减少了待测样品中目标物的损失［5］。

3　兽药残留检测

随着集约化畜牧业的不断发展，兽药的使用范围也在不断扩大，兽药不仅用于治疗疾病，也用于促生长和提高饲料利用率，像一些抗生素、磺胺类药物，以及一些激素等。由于兽药的使用范围扩大和用药量的增加，必然会导致兽药残留的产生，兽药残留所检测的样品基质和被检测组分的结构变得更加复杂，检出限降低，这就对样品的前处理过程提出更加严格的要求。由于HPLC-LC/MS分抵背景干扰能力较强，灵敏度相对较高，可在很大程度上简化样品的前处理过程，像氯霉素和克伦特罗，通常是采用GC-MS检测，前处理过程需要衍生，过程相对繁琐，而HPLC-LC/ MS可去掉衍生步骤，使前处理过程更加简化。有研究表明，通过使用APCI离子源，HPLC-LC/MS检测动物组织中氯霉素，乙酸乙醋为提取液，使用C18柱固相萃取净化，回收率大于80％，检测限为0.02μg/kg［6］，与GC-MS相比灵敏度更高。我国学者使用HPLC-LC/MS检测动物组织中硝基呋喃代谢物时，为能达到欧盟委员会规定的四个确证点的要求，检测过程采用2-硝基苯甲醛和2-氯苯甲醛双衍生化处理，结果产生两个分子离子峰，增加了确证信息，达到了要求的检测限（0.5μg/kg），满足了最低检测限量的要求。但整个检测过程相对繁琐，操作过程复杂，HPLC-LC/MS可提供详细的质谱信息，采用NIRNI检测模式，达到要求的难度低［7］。

随着科学技术水平和检测技术的不断进步，仪器的价格将会不断降低，HPLC-LC/MS在兽药残留检测方面的应用会越来越广泛，HPLC-LC/MS分析方法将会被不断完善，HPLC-LC/MS也必将在动物性食品兽药残留检测方面发挥越来越重要的作用。

［1］牛丽娟，汤树生，郭召旭，等.复方伊维菌素和吡喹酮注射液的研制［J］.中国兽医杂志，2010，46（3）：70-72.

［2］C.Lavaliere，G.D.Ascenzo，P.Foglia，etal.Determinationof mycotoxinsinbovinemilkbyliquidchromatographytandem massspectrometry［J］.J.ChromatogrB.2005，820：183-196.

［3］王立平，蔡雪凤，侯翠艳.微生物抑制法检测乳中舒巴坦含量的研究［J］.食品科技，2010，35（6）：304-306.

［4］于咏兰，汪明.RP-HPLC检测注射型复方驱虫剂中吡喹酮和伊维菌素的含量［J］.中国兽医杂志，2010，46（1）：92-94.

［5］杨成对，宋莉晖.家禽肌肉组织中硝基咪哩类药物残留的液相色谱串联质谱测定［J］.分析测试学报，2006，25（4）：101-103.

［6］岳振峰.食品中兽药残留检测指南［M］.北京：中国标准出版社，2010.

［7］ShiY，PengDD，ShiCH，etal.Selectivedeterminationoftrace 17β-estradiolindairyandmeatsamplesbymolecularlyimprintedsolid-phaseextractionandHPLC［J］.FoodChem，2011，126：1916-1925.