猪弓形虫病诊断方法研究进展

袁晓娟， 黄增荣， 赵孝木， 莫兴虎， 汪忠荣

(黔东南州动物预防控制中心，贵州凯里556000)



猪弓形虫病诊断方法研究进展

袁晓娟， 黄增荣*， 赵孝木， 莫兴虎， 汪忠荣

(黔东南州动物预防控制中心，贵州凯里556000)

猪弓形虫病可引起猪呼吸困难、高热和流产，暴发性流行时会导致大量死亡，对养猪业造成巨大经济损失。文章就猪弓形虫病的诊断方法进行概述，为防控该病提供一定的科学依据。

猪；弓形虫病；诊断方法

弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人兽共患原虫病。弓形虫于1908年由Nicolle和Manceaux在北非突尼斯的啮齿类梳趾鼠体内发现，并正式命名。我国于1955年由恩庶氏首先在福建的猫、兔等动物体内发现弓形虫， 1977年在北京、上海等地发生猪弓形虫病，并引起普遍重视。本病传染源主要是病畜和带虫动物，易感动物多，猫是各种易感动物的主要传染源。本病可经口、胎盘、皮肤、黏膜感染。据相关调查，猪是我国人群感染此病的重要传染源之一[1]。食用未熟的猪肉产品对人体存在着感染弓形虫的危险[2]。对于猪弓形虫病的诊断，必须结合病原学、免疫学和分子生物学等方法进行诊断。

1 病原学诊断

病原学诊断方法包括:直接涂片染色、组织切片染色、动物接种或细胞培养法、卵囊检查法。该方法是从病料中查出弓形虫存在最可靠的诊断方法，但缺点是敏感性低，耗时长，容易漏诊。

2 免疫学诊断

2.1 凝集试验 主要包括直接凝集试验(DAT)、间接血凝试验(IHAT)、改良凝集试验(MAT)。间接血凝试验主要用于大规模的流行病学调查。JmSenet等[3]证实IHAT检测IgM抗体更敏感，且比间接免疫荧光试验(IFAT)更能检测低滴度弓形虫抗体。王贝贝等[4]用建立的MAT方法适合于对初筛样本以及临床上疑似弓形虫感染个体的筛查，但该法费时、费力，不宜在基层推广使用。Lorry B等[5]发现MAT可用于畜群血清学检测，且该法可作为检测组织液的良好候选法。

2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA检测) ELISA因为灵敏度高、特异性强等优点已被广泛应用于弓形虫病的诊断。罗才庆等[6]对ELISA和IHAT比较发现，ELISA 更适用于猪弓形虫抗体检测。杨亚晓等[7]对临床上常用的金标法、IHAT、ELISA检测对弓形虫IgG抗体的检测效能进行比较分析：ELISA检测弓形虫IgG抗体的敏感性和特异性较高，适合于大规模的弓形虫IgG抗体筛查。在建立方法方面，白昀等[8]初步建立的间接ELISA检测对猪球虫、猪肺炎支原体等7种重要病原的阳性血清呈阴性反应，抗原批间、批内试验变异系数均小于8%，与商品化试剂盒的符合率达到95%左右，可用于猪弓形虫特异性抗体的检测。近年来，不少学者对重组抗原进行了研究，丁邦胜等[9]研究3种重组抗原(rSAG1+rHXGPRT+rAK)混合的间接ELISA 检测弓形虫IgM 和IgG，与进口ELISA检测总符合率高，敏感性、特异性较高，更经济实惠。Bartomiej等[10]使用5组弓形虫重组嵌合抗原建立酶联免疫吸附检测3个不同的群体家畜动物(马、猪、羊)血清中的IgG，结果得到所有嵌合抗原具有高特异性(100%)，其中最有效的弓形虫病的诊断的重组抗原是SAG2-GRA1-ROP1L，可以检测特定的抗体。

3 分子生物学诊断

聚合酶链反应(PCR) 是靠体外扩增病原核酸DNA 序列而进行病原诊断的技术。任科研等[11]研制的弓形虫PCR检测试剂盒能扩增出弓形虫特异性基因MIC3片段，最低能够检测到10个弓形虫速殖子的DNA，临床应用效果显著。李辉等[12]建立免疫-PCR检测弓形虫抗原最低浓度为 0.1 nng/mL，I-PCR 检测弓形虫抗原灵敏度高于传统ELISA检测6 000倍，高于ABC-ELISA 750倍。候照峰等[13]建立的弓形虫荧光定量PCR法检测弓形虫Yz-l株与Yz-2株均为阳性，且其他常见寄生原虫、寄生虫呈阴性；检测组织样品中，荧光定量PCR方法的检出率明显高于常规PCR方法。

环介导等温扩增法(LAMP)是一种新型的核酸扩增方法。王玉娇等[14]用建立的猪弓形虫病LAMP法检测猪弓形虫病血液样本，在样本DNA 稀释3×105倍后仍可检出猪弓形虫DNA，且该方法扩增不出新孢子虫、瑟氏泰勒虫及猪附红细胞体等病原体DNA，适合于猪弓形虫病的检测。邹杰等[15]建立的弓形虫LAMP法能够检测出10个拷贝的目的基因，与新孢子虫等近缘原虫DNA无交叉反应，且极大地缩短了时间。

4 小结

目前已应用于猪弓形虫病诊断的方法很多，病原学诊断方法结果最为可靠，但敏感性低、费时、易漏诊，在目前条件下尚无其他方法可全部替代。常规的免疫学方法虽具有简易、快速等优点，但对于阳性结果的分析要慎重。以PCR为代表的分子生物学诊断方法具有敏感、特异、检测迅速等优点，但存在假阳性、操作繁琐、需专用仪器等缺点，限制了分子诊断技术在基层和临床工作中的应用。因此，只有结合各种诊断方法的优缺点，弓形虫病诊断方法才会得到更快、更好的发展。

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[3] Jm Senet, R Robert, G Mauras. [Diagnosis of toxoplasmosis by indirect hemagglutination. II. Value of mixed total antigen fixation in the presence of glutaraldehyde in the early diagnosis of the disease][J]. Biomedicine/[publiee pour l’AAICIG], 1976, 25(6): 212～214.

[4] 王贝贝, 刘帅, 崔丽丽, 等.改良凝集试验 (MAT) 检测动物弓形虫血清抗体[J].中国兽医杂志,2012, 48(6): 25～27.

[5] Lorry B Forbes, Sarah E Parker, Alvin A Gajadhar. Performance of commercial ELISA and agglutination test kits for the detection of anti-Toxoplasma gondii antibodies in serum and muscle fluid of swine infected with 100, 300, 500 or 1000 oocysts[J]. Veterinary parasitology, 2012, 190(3): 362～367.

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[7] 杨亚晓, 陈玉昆, 魏世锦, 等.3 种方法检测弓形虫 IgG 抗体的效能[J]. 中国血吸虫病防治杂志,2014,(1):34.

[8] 白昀,王海燕,张悦,等. 弓形虫重组 MIC3 蛋白间接 ELISA 检测方法的建立[J].中国兽医科学,2013, 43(7): 738～743.[9] 丁邦胜,李霞,罗庆礼,等. 三种重组蛋白混合抗原的间接 ELISA 法检测人血清弓形虫 IgM 和 IgG 抗体[J].中国人兽共患病学报,2014,30(4): 358～363.

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[12] 李辉,许汴利,邓艳,等.弓形虫抗原检测方法的研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006,24(1): 67～69.

[13] 候照峰, 王尚尚, 贾红,等.弓形虫荧光定量 PCR 检测方法的建立与初步应用[J]. 中国兽医杂志, 2015, (1): 3～6.

[14] 王玉娇，贾立军.应用环介导等温扩增技术 (LAMP) 检测猪弓形虫病[J].畜牧与兽医,2014,(11):27.

[15] 邹杰, 吴文学, 索勋. 环介导等温扩增检测弓形虫方法的建立[A].首届中国兽药大会——兽医生物制品学.兽医微生物学学术论坛论文集[C].2008.

2015-08-18

从江香猪流行病学调查及免疫防制技术研究

袁晓娟(1989—)，女，研究方向：动物疫病防控。

E-mail：nbwarwor@126.com

S858.28

A

1007-1474(2015)06-0025-02

*通讯作者： 黄增荣(1982—)，男，博士，主要从事动物疫病防控及动物遗传育种。E-mail：huangzengrong@126.com