T淋巴细胞亚群与炎性因子在评估再生障碍性贫血病情及预后中的应用

何亚利，梁顺容，钟一梅

（江门市五邑中医院检验科，广东江门 529000）

T淋巴细胞亚群与炎性因子在评估再生障碍性贫血病情及预后中的应用

何亚利，梁顺容，钟一梅

（江门市五邑中医院检验科，广东江门 529000）

目的研究T淋巴细胞亚群与炎性因子检测在再生障碍性贫血（AA）病情及预后评估中的价值。方法选取本院收治的40例AA患者作为AA组，并进一步分为急性再生障碍性贫血（AAA）组和慢性再生障碍性贫血（CAA）组；同时选取同期于本院体检的40例健康者作为对照组。比较两组患者的血常规指标、外周血T淋巴细胞亚群百分率和血清炎性因子水平。结果AA组患者外周血辅助性T淋巴细胞（Th）Th1、Th17细胞百分率及Th1/Th2、Th17/调节性T淋巴细胞（Treg）比例均高于对照组（P＜0.05），Th2、Treg细胞百分率低于对照组（P＜0.05）；AAA组外周血Th1、Th17细胞百分率及Th1/Th2、Th17/Treg比例高于CAA组，Th2、Treg细胞水平低于CAA组（P＜0.05）。AA组患者血清白细胞介素（IL）-2、IFN-γ、IL-17水平高于对照组，IL-4、IL-6、IL-10水平低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；AAA组血清中IL-2、干扰素-γ（IFN-γ）、IL-17水平高于CAA组，IL-4、IL-6、IL-10水平低于CAA组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；血红蛋白（Hb）水平、PTL与Th1、Th17细胞水平及IL-2、IFN-γ、IL-17水平呈负相关，与Th2、Treg细胞水平及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相关。结论AA患者外周血中T淋巴细胞亚群百分率及血清炎性因子水平存在异常，而且与反映病情严重程度及预后的指标具有良好的相关性。

再生障碍性贫血； 辅助性T淋巴细胞； 调节性T淋巴细胞； 炎性因子

再生障碍性贫血（AA）是血液系统的常见疾病，是骨髓造血功能衰竭所致的全血细胞减少综合征，临床主要表现为贫血、出血、感染，无肝脾淋巴结肿大，该病的发生与细胞免疫功能异常密切相关［1］。T淋巴细胞是调节细胞免疫功能的重要细胞，不同的T淋巴细胞亚群在细胞免疫调节过程中发挥了不同的作用［2］。笔者分析了T淋巴细胞亚群与炎性因子在评估AA病情及预后中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年4月至2014年9月本院收治的40例AA患者作为AA组，所有患者均符合《血液病诊断及疗效标准》中AA的诊断标准［3］；选取同期于本院进行体检且合格的40例健康者作为对照组。两组人群均在告知研究事项后签署知情同意书。AA组：男24例、女16例，年龄（36.92± 5.52）岁，再按照病情严重程度分为急性再生障碍性贫血（AAA）和慢性再生障碍性贫血（CAA）亚组。AAA组：20例，其中男13例、女7例，年龄（37.12±5.61）岁；CAA组：20例，其中男11例、女9例，年龄（36.86±5.48）岁。对照组：共40例，男23例、女17例，年龄（37.20±4.93）岁。各组人群性别比、年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血常规检测 采集两组患者的外周静脉血，采用Sysmex XE-5000血常规分析仪检测血红蛋白（Hb）和血小板计数（PLT），Hb检测采用SLS-血红蛋白测定法，PLT采用RF/DC测定法。

1.2.2 T淋巴细胞亚群检测 采集两组患者的外周血5 mL，肝素抗凝后加入淋巴细胞分离液，3 000 r/min离心10 min后分离得到外周血单核淋巴细胞后首先孵育FITC标记的CD4抗体，PBS洗涤后加入破膜剂，破碎细胞后加入PE标记的干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）10、IL-17及CD25抗体，分别用于检测辅助性T淋巴细胞（Th）Th1、Th2、Th17、调节性T淋巴细胞（Treg）；室温孵育30 min后用流式细胞仪检测不同T淋巴细胞亚群的百分率。

1.2.3 炎性因子的检测 采集两组患者的外周静脉血5 m L，室温静置30 min后于3 000 r/min离心10 min，收集血清后采用酶联免疫吸附法检测血清干扰素（IFN-γ）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17水平。试剂盒均为美国Biomedical公司产品，检测方法为酶联免疫法。

1.3 统计学处理 采用SPSS18.0软件录入和分析数据，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用一元线性回归，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 外周血T淋巴细胞亚群 AA组患者外周血中Th1、Th17细胞百分率及Th1/Th2、Th17/Treg比例均高于对照组，而Th2、Treg细胞百分率低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；AAA组外周血Th1、Th17细胞百分率及Th1/ Th2、Th17/Treg比例均高于CAA组，而Th2、Treg细胞百分率均低于CAA组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组受试者外周血T淋巴细胞亚群百分率或比值的比较（±s）

*：P＜0.05，与对照组比较；△：P＜0.05，与CAA组比较。

组别 n Th1（%） Th2（%） Th1/Th2 Th17（%） Treg（%） Th17/Treg AA组 40 25.48±2.98* 10.87±1.48* 2.34±0.32* 1.84±0.25* 8.84±0.95* 0.21±0.03*AAA组 20 27.32±3.45*△ 8.78±1.21*△ 2.54±0.42*△ 2.02±0.21*△ 7.65±0.75*△ 0.25±0.05*△CAA组 20 24.12±2.62* 11.32±1.54* 2.26±0.06* 1.73±0.23* 9.54±1.02* 0.19±0.04*对照组40 18.45±2.14 16.63±1.97 1.11±0.13 1.14±0.15 14.78±1.92 0.08±0.01

2.2 血清炎性因子水平 AA组患者血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于对照组，IL-4、IL-6、IL-10水平低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；AAA组血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于CAA组，IL-4、IL-6、IL-10水平低于CAA组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2各组受试者血清炎性因子水平比较（pg/mL，±s）

*：P＜0.05，与对照组比较；△：P＜0.05，与CAA组比较。

IL-2 IL-4 IL-6 IL-10 IL-17 AA组 40 17.52±2.04*205.52±27.72* 4.74±0.22* 11.38±1.52* 13.49±1.85* 17.91±2.15组别 n IFN-γ * AAA组 20 19.12±3.21*△215.14±32.25*△4.52±0.14*△ 10.21±1.35*△12.12±1.65*△19.21±3.21*△CAA组 20 15.68±2.54*185.94±26.54* 5.12±0.23* 13.12±1.46* 14.65±2.01* 16.35±2.65*对照组40 10.48±1.28 127.48±17.58 7.58±0.92 17.79±2.34 22.29±2.58 7.85±0.94

2.3 血常规指标与T淋巴细胞百分率及炎性因子水平的相关性 Hb水平、PTL计数与Th1、Th17细胞百分率及IL-2、 IFN-γ、IL-17水平呈负相关，与Th2、Treg细胞百分率及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相关，见表3。

3 讨 论

细胞免疫功能紊乱是造成AA发生和发展的关键环节；而CD4+T淋巴细胞作为体内最为重要的Th，是机体免疫功能调控的中心。Th1细胞和Th2细胞是最早被认识的两类Th细胞亚群，正常条件下，体内Th1和Th2细胞的数目和功能互相影响并处于动态平衡的状态，维持机体正常的细胞免疫功能和体液免疫功能［4］；当Th1/Th2细胞发生极化时，Th细胞不同亚群的平衡被打破、细胞免疫功能亢进，进而抑制造血干细胞的功能［5］。Th17细胞是近年来新发现的一类Th细胞，主要分泌IL17、IL-21、IL-23等细胞因子。在体内，Th17细胞与Treg互相调节并维持平衡；Treg的细胞表面表达CD4、CD25及CD39，经T细胞抗原受体（TCR）介导的信号激活后能够抑制效应T淋巴细胞、维持免疫耐受［6］。Th17细胞功能增强、Treg的免疫抑制功能减弱会导致造血功能损伤［7］。AA组患者外周血Th1、Th17细胞百分率高于对照组，Th2、Treg细胞百分率低于对照组，且AAA组与CAA组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

如前所述，不同的T淋巴细胞亚群可以分泌不同的炎性细胞因子，进而通过细胞因子来发挥对细胞免疫功能的调控作用。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ并增强细胞免疫反应［8］；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6并主导体液免疫反应、抑制细胞免疫反应［9］。Treg细胞主要分泌IL-10、转化生长因子（TGF）β，两者均是免疫系统中十分重要的抑制因子，不仅可以直接抑制效应T细胞的功能，还能够抑制Th17细胞的分化和成熟［10］；IL-17是Th17细胞分泌的最重要的炎性因子，能够通过活化下游信号分子丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、NF-κB来造成炎性细胞募集、抑制造血功能、破坏造血组织［11］。本研究分析了血清中T淋巴细胞分泌产生的炎性因子水平，AA组患者血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于对照组，IL-4、IL-6、IL-10水平低于对照组，而且AAA患者与CAA患者间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。这提示AA患者体内存在Th1细胞和Th17细胞的功能亢进，Th2和Treg细胞的功能减弱，而且与病情严重程度有关。

AA最主要临床表现是严重的贫血、感染和出血征象，细胞免疫异常对骨髓造血功能的抑制直接表现为Hb水平和PLT减少。在临床实践中，Hb水平和PLT是判断AA患者病情及预后的常用指标［12］。为了明确T淋巴细胞亚群及炎性因子水平对AA病情及预后的评估价值，笔者分析了血常规指标与T淋巴细胞及炎性因子水平的相关性，结果显示：Hb水平、PTL计数与Th1、Th17细胞百分率及IL-2、IFN-γ、IL-17水平呈负相关，与Th2、Treg细胞百分率及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相关，与国内外文献报道基本一致［13-14］。

本研究表明，AA患者外周血中T淋巴细胞亚群百分率及血清炎性因子水平存在异常，与反映病情严重程度及预后的指标具有良好的相关性。本研究的局限性在于选择样本量较少，缺少对相关性的深入研究，有待于今后扩大样本加以完善。

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Application of T lymphocyte subsets and inflammatory factors in evaluating severity and prognosis of aplastic anemia

He Yali，Liang Shunrong，Zhong Yimei

（Department of Clinical Laboratory，Jiangmen Wuyi Traditional Chinese Medicine Hospital，Jiangmen，Guangdong 529000，China）

ObjectiveTo study the application value of T lymphocyte subsets and inflammatory factors in evaluating severity and prognosis of aplastic anemia.Methods40 patients with aplastic anemia in the hospital were enrolled in the study as AA group，which was further divided into acute aplastic anemia（AAA）subgroup and chronic aplastic anemia（CAA）subgroup.In addition to that，40 healthy people who

physical examination in the hospital during the same period were enrolled in the study as control group.Then blood routine tests were performed，T lymphocyte subsets content in peripheral blood and serum inflammatory factor content were detected and the results were compared.ResultsTh1，Th17 contents and Th1/Th2，Th17/Treg ratio in AA group were higher than those in control group（P＜0.05），while Th2，Treg contents were lower（P＜0.05）；Th1，Th17 contents and Th1/ Th2，Th17/Treg ratio in AAA group were higher than those in CAA group（P＜0.05），while Th2，Treg cells contents were lower. Serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents in AA group were higher than those in control group（P＜0.05），while IL-4，IL-6，IL-10 contents were lower（P＜0.05）；serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents in AAA group were higher than those of CAA group，while IL-4，IL-6，IL-10 contents were lower.Hb，PTL contents were negatively correlated with Th1，Th17 contents and serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents，while positively correlated with Th2，Treg cells contents and serum IL-4，IL-6，IL-10 contents.ConclusionPeripheral blood T lymphocyte subsets and serum inflammatory factors contents in aplastic anemia are abnormal and are correlated with the severity and prognosis related indicators.

aplastic anemia； helper T cell； regulatory T cells； inflammatory factor

10.3969/j.issn.1673-4130.2015.17.026

A

1673-4130（2015）17-2516-03

2015-01-08）

何亚利，主管检验技师，主要从事临床血液学与检验的研究。