猪伪狂犬病的实验室诊断及防控措施

徐霄妍，柴　磊，关婷婷，张　昕，韩　露

（1.河南省动物卫生监督所，河南 郑州　450002；2.焦作市畜产品质量安全监测中心；3.河南省畜牧总站）

猪伪狂犬病的实验室诊断及防控措施

徐霄妍1，柴磊2，关婷婷2，张昕2，韩露3

（1.河南省动物卫生监督所，河南 郑州450002；2.焦作市畜产品质量安全监测中心；3.河南省畜牧总站）

1　猪伪狂犬病的临床症状

仔猪发病主要表现为突然发病，病程一般在72h内，死亡率几乎100%，即仔猪出现体温升高（41℃以上），呼吸困难，转圈、鸣叫、痉挛、呕吐、腹泻、精神萎靡、运动不协调、步态不稳、流涎、颈部肌肉僵硬、四肢划水样运动，最后昏迷或因体温下降而死亡。

育肥猪一般为隐性感染，症状相对较轻，易于恢复，发病时体温升高、呼吸困难，生长延缓，一般不发生死亡，病愈后呈长期隐性感染带毒或排毒。

种猪主要表现为不育症，公猪睾丸炎，母猪返情，屡配不孕等。

妊娠母猪在初期，可在感染后的20d左右发生流产，妊娠后期经常发生流产、产死胎、木乃伊胎，以产死胎为主，母猪产后可发生无乳和体温升高。

2　实验室培养和观察

2.1病料处理

无菌采取病死仔猪的脑组织及扁桃体，研碎后用PBS液制成10%悬液或鼻咽洗液，经2000rmp离心10 min，取上清液作为感染动物或细胞培养物的接种材料。

2.2细胞培养

将病料悬液的上清液接种于猪肾细胞或鸡胚细胞，细胞接毒后逐日观察细胞病变。细胞接毒后24～72h，出现细胞病变，细胞单层出现双折光性细胞，逐渐增多，然后完全脱落，形成合胞体，其形态和大小各异。

2.3电镜观察

取病毒细胞培养物冻融后的离心上清液1滴，滴于蜡盘上。将被覆Formvar膜的铜网膜面向下放到液滴上，吸附2～3min，取下铜网，用滤纸吸掉多余的液体，再将该铜网放到pH值为7.0的2%磷钨酸染色液上染色1～2min，取下铜网，用滤纸吸掉多余的染色液，干燥后放在电镜下进行观察。病毒细胞培养物在电镜下观察，可见到典型的疱疹病毒粒子，病毒粒子的核心直径约为75nm，核衣壳直径105～110nm。

3　酶联免疫方法检验

采用农业部NY/T678-2003猪伪狂犬病免疫酶试验方法，在包被板的待测样品孔中每孔加入100ul待检血清样品，在阳性对照和阴性对照孔中每孔加入100ul对照血清，至室温1h，弃去孔内液体，并在纱布或吸水纸上拍干。然后用洗涤液将反应板洗涤3～5次，每次洗涤后均弃去孔内液体，最后一次洗涤后除净孔内液体并拍干。接下来，每孔加入100ul酶结合物溶液，室温下作用20min，并重复弃去孔内液体至拍干步骤。接下来各孔加入100ul底物液，室温放置15min后，各孔加入50ul终止液，于酶标仪650nm处测定吸光度（OD值）。经检验，该血清样品中含有伪狂犬病毒gE抗体。

4　防控管理措施

目前尚无治疗PR的有效药物。紧急情况下，用高免血清治疗，可降低死亡率。

4.1消毒与隔离

猪圈和运动场用2%～3%氢氧化钠或20%新鲜石灰水进行消毒。如发现发病，至少连续2周对场区严格消毒并采取隔离措施，淘汰病猪并连续半年实行观察，严格执行购猪隔离观察制度、消毒制度、免疫接种制度。防止购入种猪时带入病原，注意隔离观察，经确认购入种猪为健康时方可混群饲养。另外还要控制猪场人员流动，执行登记制度。

4.2灭源与接种

鼠类是该病的主要传染源，因此在猪场内部要扑灭鼠类，杜绝传染疫苗接种是防止PR发生和流行的重要措施，目前国内主要应用灭活苗和弱毒苗预防PR，具有良好的免疫效果。但灭活苗和弱毒苗只能降低接种猪的发病率和死亡率，不能阻止带毒猪排毒。PR一旦传入猪场就很难根治，在发生过PR的猪场，停止使用疫苗后又会引起该病发生。

4.3建立淘汰制度

建立淘汰制度即把所有成年猪进行血清中和试验，阳性者淘汰，以3～4周间隔，反复进行，一直至两次试验全部阴性为止。母猪产仔断乳后，尽快分开，隔离饲养，每窝仔猪均需与其他窝仔猪隔离。到16周龄，作血清学检查，所有阳性猪淘汰，30d后再作血清学检查，把阴性者合成较大群，最终建立新的无病猪群。□

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2015-03-25）