高效液相二极管阵列检测法比较巴西肉桂CANELA与中国肉桂中桂皮醛的含量

李莉 冯孟鑫 马恺悦 王佳宇 侯文珍 赵百孝 刘春生 马长华

·巴西草药研究专题·

高效液相二极管阵列检测法比较巴西肉桂CANELA与中国肉桂中桂皮醛的含量

李莉 冯孟鑫 马恺悦 王佳宇 侯文珍 赵百孝 刘春生 马长华

目的 比较巴西肉桂CANELA与中国肉桂中桂皮醛的含量差异,为肉桂药材的新品种选育及品质评价提供科学依据和方法。方法 采用高效液相二极管阵列检测法分别测定6批巴西肉桂CANELA与中国肉桂中桂皮醛的含量。结果 6批巴西肉桂CANELA及中国肉桂中桂皮醛的平均含量分别为18.3%和5.27%,均明显高于2010年版《中华人民共和国药典》(一部)规定的1.5%。结论 以桂皮醛为指标进行评价,巴西肉桂CANELA品质优于中国肉桂。本研究为确定巴西肉桂CANELA化学成分与药用价值奠定了基础,也可为肉桂药材品种的资源普查、新品种选育、品质评价等提供科学参考。

巴西肉桂CANELA; 中国肉桂; 桂皮醛; 高效液相二极管阵列检测法

肉桂Cinnamomum zeylanicum Bl.又名玉桂、玉树、大桂等,为樟科植物肉桂的干燥树皮,是一种常见的药食同源的传统中药,已有两千年的历史,在国内主要分布在广西、广东等地,国外主要分布于越南、印度、巴西、斯里兰卡、印尼等国[1]。其药用价值高,具有补火助阳、引火归源、散寒止痛、活血通经等功效,食用一般作为家庭烹调调味用品。产自巴西的草药CANELA葡萄牙语意为肉桂,常用作香料和调味品,与中国肉桂食用的用途类似,但其药用价值与中国肉桂相比如何迄今未见报道。

肉桂提取的挥发油中桂皮醛(Cinnamaldehyde)占总提取物52.92%～61.20%,是肉桂的主要活性成分,具有解热、镇痛、抗菌、抗病毒等多种药理作用,且毒副作用低[2-6]。2010年版《中华人民共和国药典》(一部)将桂皮醛作为肉桂质量控制的指标性成分,其含量的高低直接影响到肉桂的功效。本文采用高效液相—二极管阵列检测法(highperformance liquid chromatography-diode array detection,HPLC-DAD)在290 nm下分别测定巴西肉桂CANELA与中国肉桂中桂皮醛的含量,通过比较两者的差异,为巴西肉桂CANELA的化学成分与药用价值研究奠定基础,同时为肉桂药用品质评价、品种资源普查、质量控制提供参考依据[7-12]。

1 材料

1.1 材料

药材:巴西肉桂CANELA 6批,购于巴西草药市场,样品的凭证标本保存于北京中医药大学大学标本室;中国肉桂6批(购自北京市花家地南里同仁堂药店),经北京中医药大学刘春生教授鉴定均为樟科植物锡兰肉桂Cinnamomum zeylanicum Bl.的干燥树皮。

1.2 试剂

桂皮醛(中国药品生物制品鉴定所,批号: 110710-201217)、乙腈(色谱纯,Fisher)、甲醇(色谱纯,Fisher),娃哈哈纯净水。

1.3 仪器

Waters Breeze高效液相色谱仪(美国Waters公司),水浴锅,粉碎机(型号:FW-100,北京中兴伟业仪器有限公司),电子天平sartorius AG BS110S(北京赛多利斯仪器系统有限公司),Waters Sunfire C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters Sunfire C18色谱柱(150 mm× 4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(35∶75);检测波长:290 nm;流速:1 mL/min;进样量:10μL;柱温:30℃。

2.2 溶液制备

对照品溶液的制备:取桂皮醛对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含10μg的溶液,即得。

供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声处理(功率 350 W,频率35 kHz)10分钟,放置过夜,同法超声处理一次,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液1 mL,置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性考察 采用2.2项下方法制备对照品溶液及巴西肉桂CANELA和中国肉桂的供试品溶液,分别精密吸取对照品及各供试品溶液10μL,按2.1项下色谱条件进样分析,以考察待测成分相互间是否有干扰、其他成分是否对待测成分有干扰。各色谱图见图1。如图所示,测定方法专属性量好,待测成分与其它成分分离度大于1.5,即其他成分对待测成分测定无干扰。

2.3.2 线性关系考察 分别精密吸取2.2项下所制备对照品溶液1μL、3μL、5μL、10μL、15μL、20μL,按2.1项下色谱条件进行测定并记录峰面积。以进样量x为横坐标,峰面积y为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得到回归方程y=3.11 ×1012x-3.08×105,R2=1,线性范围为0.1014～4.056μg。结果表明在0.1014～4.056μg进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度实验 精密吸取按2.2项下所制备对照品溶液10μL,按2.1项下色谱条件连续进样6次,记录峰面积并计算其RSD值为0.20%。结果表明本方法精密度良好。

2.3.4 稳定性实验 精密称定中国肉桂约0.1 g,按2.2项下方法制备中国肉桂样品供试品溶液一份,分别于室温放置0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时,按2.1项下色谱条件进样分析,记录峰面积并计算其RSD值为2.00%。结果表明本方法稳定性良好。

2.3.5 重复性实验 精密称定中国肉桂样品6份,每份约1 g,按2.2项下方法制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件进样分析,记录峰面积并计算其RSD值为1.60%,结果表明本方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率实验 取6份中国肉桂样品,每份约0.05 g,精密称定,分别精密加入一定量的桂皮醛标准溶液,按2.2项下方法制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件进样分析,记录峰面积,计算回收率与RSD。所得桂皮醛的平均回收率为105.84%,计算其RSD为2.00%。表明该方法准确度良好。结果见表1。

2.4 含量测定

分别称取6个批次的巴西肉桂CANELA和中国肉桂样品约0.5 g,精密称定,按2.2项下方法制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件进样分析,记录峰面积,计算各待测成分含量与RSD。每个批次平行测定3次。结果见表2。

如表所示,巴西肉桂CANELA、中国肉桂中桂皮醛的含量分别为18.3%、5.27%,巴西肉桂CANELA中桂皮醛的含量约为中国肉桂的3.5倍。

3 讨论

肉桂作为药食同源的传统中药,在印度、巴西、老挝、越南等地也作为食用香料广泛应用,是古老香料之一,为家庭烹调佳品。近年来还被用于提取挥发油用作芳香疗法的精油,其市场拥有广阔前景。在国外巴西肉桂CANELA被广泛用作辛香料和调味品,但其药用价值相关研究未见报道。本研究从其化学成分与含量角度对巴西肉桂和中国肉桂品质进行比较,以期为药用肉桂的资源扩大及巴西肉桂的进一步研究提供依据。

本研究通过采用HPLC-DAD法对肉桂中主要活性成分,即2010年版《中华人民共和国药典》(一部)规定的指标性成分桂皮醛进行含量测定。结果表明巴西肉桂CANELA、中国肉桂中均含桂皮醛,测得含量分别为18.3%和5.27%,均高于药典所规定的1.5%,符合要求。且巴西肉桂CANELA中桂皮醛含量明显高于中国肉桂,因此,可以考虑将巴西肉桂CANELA引进作为药用肉桂替代品,用于提取桂皮醛等有效成分。本实验为巴西肉桂CANELA化学成分研究与药用价值研究奠定一定的基础,并为药用肉桂的品质鉴定、品种资源普查、新品种选育、质量控制提供了参考和依据。

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Comparison of the contents of Cinnamaldehyde between Brazilian cinnamomum zeylanicum Bl.and Chinese cinnamomum zeylanicum Bl.by HPLC-DAD

LI Li,FENG Meng-xin,MA Kai-yue,et al.School ofChinese Materia Medica,Beijing University ofChinese Medicine,Beijing 100102,China

ZHAO Bai-xiao,E-mail:baixiao100@gmail.com;MA Chang-hua,E-mail:machuanghua60@sina.com.cn

Objective To compare the contents of Cinnamaldehyde between Brazilian CANELA. and Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl.and provide the reference for the breeding of variety and quality control of Cinnamomum zeylanicum Bl..M ethods Take 6 Brazil CANELA.and 6 Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl.as the research objects.The contents of Cinnamaldehyde in Brazil and Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl. were determined by High Performance Liquid Chromatography. Chromatographic column:waters sunfire C18 chromatographic column(150 mm x 4.6 mm,5 microns); mobile phase:acetonitrile:water(35:75);detection wavelength:290 nm;flow rate:1 mL/min; injection volume:10μL;column temperature:30℃.Results The Cinnamaldehyde,which is the index component in Cinnamomum zeylanicum Bl.was found both in Brazil and Chinese sample.The contents of Cinnamaldehyde Brazilian CANELA..and Cinnamomum zeylanicum Bl.were 18.3% and 5.27%, respectively,They are greater than the stipulated 1.5%in the 2010 edition of Chinese pharmacopoeia. Conclusion The content of Cinnamaldehyde in Brazilian CANELA was significantly higher than the Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl..The study provides the reference for the census of variety resources, breeding of new variety and quality control of Cinnamomum zeylanicum Bl..It also lays the foundation for the chemical composition and medicinal research of Cinnamomum zeylanicum Bl..

Brazilian CANELA.; Chinese Cinnamomum zeylanicum Bl.; Cinnamaldehyde; HPLC-DAD

R284

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2015.11.002

2015-08-18)

(本文编辑:蒲晓田)

国家国际科技合作专项(2011DFA31370)

100102 北京中医药大学中药学院[李莉(硕士研究生)、冯孟鑫(硕士研究生)、马恺悦(硕士研究生)、王佳宇(硕士研究生)、侯文珍(硕士研究生)、刘春生、马长华)],针灸推拿学院(赵百孝)

作者介绍:李莉(1989-),女,2012级硕士研究生。研究方向:质量控制。E-mail:316613715@qq.com

赵百孝(1963-),博士,教授,博士生导师。研究方向:针灸推拿。E-mail:baixiao100@gmail.com;马长华(1960-),教授,硕士生导师。研究方向:药品质量控制。E-mail:machanghua60@sina.com