培养瓶透气性对蛹虫草生长的影响

李 菲，王 忠，黄宝菊，黄雪峰，郑方毅

[安发(福建)生物科技有限公司 352100]

培养瓶透气性对蛹虫草生长的影响

李 菲，王 忠，黄宝菊，黄雪峰，郑方毅

[安发(福建)生物科技有限公司 352100]

利用聚丙烯薄膜封口培养瓶进行蛹虫草栽培试验，研究培养瓶透气性对蛹虫草生长的影响。试验结果表明：蛹虫草菌丝生长需要良好的透气性，在蛹虫草发满菌后扎3个直径1 mm的透气孔最有利于蛹虫草的生长。

蛹虫草；透气性；子实体

冬虫夏草含有丰富的虫草素、虫草多糖等生物活性成分，还有钾、钙、镁、硒等多种微量元素，具有抗癌、抗肿瘤、抗氧化、清除自由基、提高免疫力之功效[1]。近年来，随着天然冬虫夏草资源的日渐枯竭，与其同属且具有相似活性成分和医疗保健功效的蛹虫草在一定程度上成为其替代品[2]。目前蛹虫草栽培已经实现规模化生产[3]，但培养过程中仍存在产量不稳定、污染率过高以及生产成本过大等问题。影响蛹虫草生长的因素有很多，比如菌种、营养液配方，以及生长中的温度、湿度、透气性、光照等条件。目前，关于温度、湿度、光照等方面对蛹虫草影响的研究较多，而透气性的研究较少[4]。聚丙烯封口膜价格低廉，用作蛹虫草培养瓶的封口材料，可在一定程度上为大规模化生产节约成本。为此，利用聚丙烯薄膜封口培养瓶进行蛹虫草栽培试验，通过研究培养瓶封口膜不同程度透气处理以及在不同时期透气处理对蛹虫草生长的影响，探索蛹虫草生长过程中所需的最佳透气条件，为进一步提高蛹虫草子实体产量提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

蛹虫草菌母种，由安发(福建)生物科技有限公司研发中心实验室提供。

葡萄糖、蔗糖(广东光华化学厂有限公司)；琼脂、硫酸镁、维生素B1(天津市福晨化学试剂厂)；蛋白胨(北京奥博星生物技术有限责任公司)；磷酸二氢钾(上海久亿化学试剂有限公司)；蚕蛹粉(西安渔人乐制饵厂)；450 mL的栽培瓶；250 mL的三角瓶；试管；JA1003N电子天平；SW-CJ-1A超净工作台；LDZX-50FB高压灭菌锅；SPX-250BS-Ⅱ生化培养箱；BSD-YX2200摇床；接种枪；TES1330A照度计；MS6508数显温湿度计。

1.2 培养方法

1.2.1 培养基配方 用于菌种分离培养的斜面培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、MgSO40.5 g、KH2PO41.0 g、VB10.1 g、pH自然值；用于培养菌丝体的液体培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨5 g、MgSO41.0 g、KH2PO42.0 g、VB10.1 g，pH自然值，分装至三角瓶；用于栽培的培养基：每瓶大米30 g、营养液42 mL(营养液配方：蔗糖20 g、蛋白胨5 g、MgSO41.0 g、KH2PO42.0 g、VB10.1 g、水1000 mL，pH自然值)。

1.2.2 生产菌制备 将蛹虫草母种进行分离接种至斜面试管，放置于生化培养箱中18℃培养，从培养第4 d开始每天进行10 h光照培养，7 d左右获得生产菌种。

1.2.3 液体菌种制备 将生产菌切成小块，接种至液体培养基中，温度20℃下静置培养24 h，后置于摇床以120 r/min转速振荡暗培养6 d左右，获得液体接种菌。

1.2.4 接种 在超净工作台无菌环境下，将液体菌种稀释5倍，每瓶大米培养基上接种5 mL的液体菌种。

1.2.5 后期培养 将接过菌种的培养瓶放置室内，在温度18℃、湿度50%～60%条件下进行黑暗培养10 d左右，至菌丝吃透培养基并覆盖整个培养基；发菌完成后进行弱光照培养，光照度200～400 lx，光照时长10 h/d，温度20℃，湿度70%～80%，培养6 d左右，至培养基完全转为橙色；转色后即可进行温差处理，刺激原基分化，温差控制在5～8℃，其他条件维持不变，培养5 d左右，至有较多小刺尖状突起形成；原基分化后进行恒温培养，温度22℃，湿度80%～90%，光照700～1000 lx，光照时长12 h/d，培养35 d左右采收。

1.3 试验设计

1.3.1 不同程度透气处理 试验设5个处理，处理1(CK)：培养瓶封口膜不扎孔；处理2：发满菌后在培养瓶封口膜上扎孔1个(孔径1 mm,下同)；处理3：发满菌后在培养瓶封口膜上扎孔3个；处理4：发满菌后在培养瓶封口膜上扎孔6个；处理5：发满菌后在培养瓶封口膜上扎孔9个。试验于蛹虫草发菌后进行，每个处理30瓶，重复3次，将各处理放置于经紫外灯消毒的培养室内进行培养，每天观察记录蛹虫草生长情况。

1.3.2 不同时期透气处理 试验共设5个处理，处理Ⅰ(CK)：全程不扎孔处理；处理Ⅱ：发菌完成后转色前进行扎孔处理(扎直径1 mm的孔 3个，下同)；处理Ⅲ：转色完成后原基分化前进行扎孔处理；处理Ⅳ：原基分化后子座抽生前进行扎孔处理；处理Ⅴ：子实体生长阶段进行扎孔处理(Ⅳ)。每个处理30瓶，重复 3 次，各处理放置于经紫外灯消毒的培养室内进行培养，每天观察记录蛹虫草生长情况。

2 结果与分析

2.1 不同透气程度对蛹虫草生长的影响

2.1.1 不同透气程度对菌丝生长的影响 由表1可知，处理1菌丝密度稀疏、菌落边缘不整齐，气生菌丝发达，菌丝纤细；处理2菌丝密度较稀疏、菌落边缘不整齐，气生菌丝较发达，菌丝较纤细；处理3、4、5菌丝长势基本相同，菌丝密度浓密，菌落边缘整齐，气生菌丝生长适中，菌丝健壮。表明不同透气程度对菌丝长势有一定影响，扎孔3个以下的处理随着透气程度的提高，菌丝密度趋向于浓密，菌落边缘越整齐，气生菌丝生长越好，菌丝越健壮；扎孔3个或3个以上的处理，菌丝生长情况均良好，透气程度对菌丝生长影响不明显。

表1 不同透气程度对蛹虫草菌丝生长的影响

2.1.2 不同透气程度对转色、原基分化的影响 由表2可知，处理1转色最慢，颜色最浅；处理3、4中等，转色情况较好，转色较快，颜色最好，均呈橙黄色；处理2、5中，颜色相同，均为黄色，但处理5转色更快一些。说明扎孔3个以下，透气程度越高，转色越快，菌落颜色更漂亮，扎孔3个或3个以上转色快慢及菌落颜色则不再受透气程度的影响。原基形成时间随着透气程度的提高而变短，原基数目随着透气程度的提高先增加后减少。

表2 不同透气程度对蛹虫草转色、原基分化阶段的影响

2.1.3 不同透气程度对子实体生长的影响 由表3可知，随着透气程度提高，子实体长势均匀度由差变好再变差，子实体颜色先由浅色趋向于正常再趋向于浅色，处理3子实体长势均匀度最佳、颜色最漂亮。差异显著性分析结果表明，处理3实体产量最高，每瓶(下同)平均产量为5.43 g，显著高于处理2、5及对照处理；其次为处理①，平均产量为4.70 g，与其他处理差异不显著，与对照处理差异显著；其他两个处理产量高于对照组，但差异不显著。试验结果表明，扎孔3个的处理子实体生长情况最佳、产量最高。

表3 不同透气程度对蛹虫草子实体生长的影响

注：同列数据后字母无相同者表示在0.05水平上显著差异， 表6同。

2.2 不同时期透气处理对蛹虫草生长的影响

2.2.1 不同时期透气处理对菌丝体生长的影响 由表4可知，处理Ⅱ表现最佳，菌丝体浓密，气生菌丝适中，菌落边缘整齐，菌丝长势健壮，菌丝体生长情况最佳；处理Ⅲ次之；处理Ⅳ中菌丝长势次于处理Ⅲ。处理Ⅰ、Ⅴ长势相同，菌丝气生性强，密度稀疏，菌丝较纤细，长势最差。说明较迟进行透气处理不利于菌丝生长。

表4 不同时期透气处理对蛹虫草菌丝体生长的影响

2.2.2 不同时期透气处理对转色、原基分化的影响 由表5可知，处理Ⅱ蛹虫草最早完成转色，菌落颜色最佳；其他处理转色明显较慢，且颜色不佳；处理Ⅰ、Ⅴ转色最慢；处理Ⅰ颜色最差。表明在发满菌时进行透气处理更有利于蛹虫草转色。原基形成时间处理Ⅱ、Ⅲ相同，处理Ⅲ原基数量相对较少；处理Ⅳ、Ⅴ原基形成时间较长，数量均不多；处理Ⅰ原基数量最少。说明在原基分化前进行透气处理，更有利于蛹虫草原基分化。

表5 不同时期透气处理对蛹虫草转色、原基分化的影响

2.2.3 不同时期透气处理对子实体生长的影响 由表6可知，处理Ⅱ、Ⅲ中子实体均匀度为中等以上，颜色均为橙黄色。处理Ⅱ子实体产量最高，每瓶平均产量为6.03 g，显著高于处理Ⅳ、Ⅴ及对照处理；其次为处理Ⅲ，平均产量为4.65 g，与其他处理差异不显著，但与对照处理差异显著。表明在发满菌时进行透气处理，更有利于蛹虫草子实体生长和产量的提高。

表6 不同时期透气处理对蛹虫草子实体生长的影响

3 结论与讨论

不同程度透气试验结果表明，蛹虫草菌丝生长需要良好的透气性，这与张金艳等[4]研究结果相同。本研究结果还发现，当透气孔达3个及以上时，菌丝长势相同。说明达到一定透气程度时菌丝生长不再受透气程度的影响。原基分化阶段，在一定程度上原基数目及子实体产量随透气程度提高而增多，但当透气程度达到3个孔以上时，原基数目及子实体产量开始减少。这可能是透气程度太大、瓶内湿度不够所致[5]。

不同时期透气试验结果表明，发满菌后越早进行透气处理，菌丝生长越密实，转色越快，原基数目越多，子实体长势好、产量高。

综上所述，蛹虫草菌丝生长需要良好的透气性，在发满菌后即进行透气处理且透气孔为3个时，蛹虫草各阶段长势最佳。

[1]高怀安，陈世忠，王丽荣.秦巴蛹虫草与冬虫夏草某些化学成分的对比研究[J].中药通报，1987，12(2)：44-45.

[2]张平，朱述钧，钱大顺，等.北冬虫夏草功能成分及保健作用分析[J].江苏农业科学,2003(6)：105-107.

[3]王雅玲，郑双双，吕国忠，等.我国蛹虫草人工栽培培养基的现状调查[J].食用菌，2009(1)：1-2.

[4]张金艳，吴坤森，段俊，等.培养瓶透气性对蛹虫草生长的影响[J].广东农业科学，2010(4)： 45-47.

[5]王兰珍,林桂荣.不同培养条件对蛹虫草原基分化形成的影响[J].福建农业科技，2009(4)：44-45.

(责任编辑：林玲娜)

Effects of breathability of cultural bottle on the growth of Cordyceps militaris

LI Fei, WANG Zhong, HUANG Bao-ju, HUANG Xue-feng, ZHENG Fang-yi

[Anfa(Fujian)Bio-ScienceandTechnologyCo.,Ltd,FujianProvince352100]

In this paper, cultivation experiment ofCordycepsmilitariswas carried out using cultural bottle sealed with polypropylene film in order to study effects of breathability of cultural bottle on growth ofCordycepsmilitaris. The results showed that the growth ofCordycepsmilitarihypha needs good aeration. It was beneficial for growth ofCordycepsmilitaristo make three 1-mm diameter aeration holes on polypropylene film when hypha occupied whole medium.

Cordycepsmilitaris; breathability; sporocarp

2015-10-19

李菲，女，1991年生，研究实习员。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2015.11.008