某地区女性生殖道念珠菌感染的病原学调查

董 晶，杨 虹，吴 波

(北京大学深圳医院:1.检验科；2.皮肤科，广东深圳 518036)



·论 著·

某地区女性生殖道念珠菌感染的病原学调查

董 晶1，杨 虹1，吴 波2△

(北京大学深圳医院:1.检验科；2.皮肤科，广东深圳 518036)

目的 探讨该地区女性生殖道念珠菌(VVC)感染的病原学分析。方法 对2013年5月至2014年4月该院体检女性的阴道分泌物标本进行KOH悬滴法检测，复诊时进行真菌培养检查的标本，使用沙保罗培养基分离菌株并鉴定菌种，将分离的白色念珠菌做药物敏感试验。结果 15 199例标本共检出真菌阳性标本926例。不同年龄组间和不同季节间比较，差异均有统计学意义(χ2=45.714，P<0.001；χ2=13.784，P=0.003)，老年组患者和冬季阳性率较低。286例真菌标本培养出念珠菌197例，其中白色念珠菌78.17%(154/197)，光滑念珠菌10.15%(20/197)，热带念珠菌6.09%(12/197)，近平滑念珠菌3.05%(6/197)，克柔念珠菌2.03%(4/197)，酿酒酵母菌0.51%(1/197)。白色念珠菌对制霉菌素敏感率为100.0%，5-氟胞嘧啶敏感率94.2%，氟康唑敏感率94.8%，咪康唑敏感率75.3%，酮康唑敏感率85.1%，伊曲康唑敏感率77.9%。结论 生殖道念珠菌感染主要是育龄女性，且菌种分布差异无统计学意义。

念珠菌； 外阴阴道念珠菌病； 药敏试验

为了解该地区女性生殖道念珠菌(VVC)感染情况，现对该院体检女性生殖道分泌物进行KOH悬滴法镜检，体检后1周内来复诊的患者，对其分泌物标本中的念珠菌进行菌种鉴定，并对白色念珠菌进行药物敏感试验,以探讨VCC感染状况，为临床治疗提供实验室数据。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年5月至2014年4月该院体检女性的阴道分泌物标本15 199例，年龄18～72岁，平均年龄(33.4±12.6)岁。

1.2 标本采集及镜检 采用一次性无菌阴道窥器暴露宫颈，无菌棉拭子蘸取后穹窿分泌物置于1 mL无菌生理盐水试管中，将标本均匀涂于玻片上，加1～2滴10%KOH溶液，于显微镜下检查真菌孢子或假菌丝。

1.3 培养与鉴定 通过该院医学检验网络系统，调查体检后1周内来门诊就诊的体检者临床资料，临床医师要求真菌培养检查者，使用无菌棉拭子蘸取其后穹窿分泌物接种于沙保罗培养基，30 ℃恒温箱培养24～72 h，观察菌落生长情况，可疑菌落革兰染色镜检，阳性标本挑取生长良好的菌落转种于科玛嘉显色培养基，35 ℃恒温箱培养24～48 h。绿色为白色假丝酵母菌，蓝色为热带念珠菌，应用法国梅里埃公司生产的API-20C AUX酵母样真菌鉴定反应试剂条鉴定,严格按照操作说明书并判读鉴定结果。

1.4 药敏试验 挑取经沙保罗培养基次代培养的新鲜白色念珠菌菌落置于无菌生理盐水中制备成0.5麦氏单位的菌悬液，再用生理盐水对倍稀释后以无菌棉签蘸取菌悬液均匀涂布于真菌药敏平板培养基(广州迪景微生物科技有限公司)，室温静置3～5 min，用无菌镊子将Rosco纸片贴于培养基表面，保持纸片间间距大于24 mm。将培养基放入35 ℃恒温箱培养18～24 h后测量抑菌环直径，根据制造商说明书判定并记录药敏结果。

1.5 统计学处理 所有数据均采用SPSS 17.0统计软件进行分析，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同年龄组标本真菌阳性率比较 15 199例标本中926例检出真菌孢子或假菌丝，阳性率6.09%。中年组与老年组阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=45.714，P<0.001)，但青年组与中年组阳性率比较，差异无统计学意义(χ2=0.033，P=0.855)，老年组阳性率明显下降。见表1。

表1 3组患者真菌感染结果比较

2.2 不同季节真菌阳性率结果比较 根据平均气温划分春夏秋冬4季(2～4月为春季，5～9月为夏季，10～11月为秋季，12～1月为冬季)。按季节对真菌阳性标本进行统计分析，结果显示，春夏秋3个季节比较，差异无统计学意义(χ2=5.683，P=0.058)，冬季与春夏秋3个季节比较，差异有统计学意义(χ2=13.784，P=0.003)。见表2。

表2 不同季节真菌阳性率结果比较

表3 197株念珠菌菌种鉴定结果比较(n)

2.3 念珠菌的检出及鉴定结果 分离培养出念珠菌197株，阳性标本中未发现多种念珠菌感染。白色念珠菌154例(78.17%)，光滑念珠菌20株(10.15%)，热带念珠菌12株(6.09%)，近平滑念珠菌6株(3.05%)，克柔念珠菌4株(2.03%)，酿酒酵母菌1株(0.51%)。真菌阳性组与阴性组比较，差异无统计学意义(χ2=7.569，P=0.182)。见表3。

2.4 白色念珠菌药敏试验结果 药敏试验提示白色念珠菌对临床常用的几种抗真菌药物有较好的敏感性，制霉菌素敏感率为100.0%，5-氟胞嘧啶94.2%，氟康唑94.8%，咪康唑75.3%，酮康唑85.1%，伊曲康唑77.9%。见表4。

表4 154株白色念珠菌药敏试验结果比较[n(%)]

3 讨 论

念珠菌广泛存在于自然界，至少75%的女性在一生中都发生过生殖道念珠菌感染[1]。以往临床根据患者有无临床症状将女性念珠菌生殖道感染按念珠菌性阴道炎或念珠菌携带者分类，近年来这种分类及命名方式已被外阴阴道念珠菌病(VVC)所取代[2]。念珠菌的逆行性感染导致妊娠女性发生胎膜早破、早产、新生儿鹅口疮、产褥感染。有研究表明,感染念珠菌的女性进行检查和治疗,能够减少早产儿和新生儿念珠菌感染的发生[3-4]。由于生殖道内雌激素及糖原水平上升，有60%～90%的带菌孕妇会发展成有症状的VVC，故研究普通人群念珠菌携带者具有一定意义。但妇科门诊一般为典型症状的阴道炎患者，念珠菌携带者比例相对较低。对体检人群标本的实验统计结果应更符合普通人群念珠菌感染的统计学资料。本研究对15 199例体检人群标本进行实验统计，显微镜检出率为6.09%，与陈春伟[5]报道的11.82%，丁胜利等[6]的15.24%均有差异，可能与取样人群及实验操作的差异有关。本组收集门诊就诊真菌培养资料，将标本分成阳性、阴性2组进行比较，差异无统计学意义(P=0.182)，菌种分布与其他研究类似，以白色念珠菌为主[7-8]。随着抗真菌药物的广泛应用，白色念珠菌耐药率有增多趋势[9]。本研究对白色念珠菌进行药敏试验，显示其对制霉菌素、5-氟胞嘧啶、氟康唑敏感性较高，均为94.0%以上，对咪康唑、伊曲康唑、酮康唑敏感率稍低，分别为75.3%、77.9%、85.1%。本实验结果都明显高于黎小东等[8]的研究，可能与标本来源有关。Rathod等[10]分析大量关于VVC文献后认为，不少文献缺乏足够的实验数据，而是引用“经验性”的数据，VVC的调查应建立在对足量样本科学性的实验统计基础上。本组实验使用了较多样本进行数据统计，但由于体检者在院停留时间短，取材少，未进行真菌培养；对于门诊患者就诊成本及时间考虑，临床医师也只会对部分症状患者进行真菌培养检查，不是所有确诊或疑似VVC都会进行真菌培养鉴定，所以目前获得的实验数据还不足以令人满意。下一步的研究将考虑规范及优化实验流程以获取更多且可信的数据。

本组各年龄段患者，18～35岁真菌阳性率最高(6.56%)，其次是36～50岁(6.47%)，50岁以上感染率明显减少(2.21%)。考虑为青年组及中年组处于婚育期，雌激素分泌、性生活、生育均为高峰，而老年女性处于绝经期，雌激素水平明显下降。该地区靠近热带，夏季月份较北方长，夏秋交界不明显，冬季阳性率较夏秋两季低，可能与冬季气温较低有关。春季阳性率较夏秋两季，差异无统计学意义(P>0.05)。

国外研究表明，很多患者只是通过临床症状或既往病史被诊断为VVC，并无实验室依据。由于不同病因引起的阴道炎症状相似，所以这种诊断的可靠性值得怀疑，而不同病因的阴道炎治疗方法有所不同，故实验室的诊断数据非常必要[2]。KOH悬滴法是一种快速、有效的实验方法，但本组镜下检出率为6.09%，相对于普通人群(20%～30%)的感染率[11]，明显偏低，相当部分的感染标本镜下未被检出，并且197例症状典型的标本中，也有99例标本通过KOH悬滴法镜检并未发现真菌孢子或菌丝。故本组认为，真菌培养配合KOH悬滴法镜检能降低念珠菌检测的假阴性率，对VVC的诊断具有临床意义，尤其对于真菌镜检阴性但有VVC症状的患者，真菌培养及鉴定是有必要的。

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Pathogeny research of vulvovaginal candidiasis from women with physical examination in Shenzhen*

DONGJing1,YANGHong1,WUBo2△

(1.DepartmentofLaborartory；2.DepartmentofDermatologis,ShenzhenHospital,PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518036,China)

Objective To investigate the pathogenic information of genital candida infections in women lived in Shenzhen.Methods KOH smear was used to examine vaginal secretions from women with physical examination in PKU Shenzhen hospital from May 2013 to April 2014.When these women subsequent went to our hospital for secretion fungal culture,Sabouraud medium was used to isolate candida strains,which would be identified by using CHROMagar chromogenic medium and API-20C AUX (bioMerieux France).Drug sensitivity tests were made for isolated Candida albicans.Results Total 926 fungal postive samples were detected by microscopic examination from 15 199 samples.There was significant difference in fungal postive rates among different age groups (χ2=45.714,P<0.001) or different seasons (χ2=13.784,P=0.003).the postive rates of the old group were lower.For seasons,lower rate was found in winter.Total 197 strains of candida species were isolated from 286 samples,of which C.albicans was the most frequently species(78.17%,154/197),followed by C.glabrata(10.15%,20/197),C.tropicalis(6.09%,12/197),C.Parapsilosis (3.05%,6/197),C.krusei (2.03%,4/197),Saccharomyces cerevisiae (0.51%,1/197).All the isolates of Candida albicans were susceptible to nystatin．94.2% to 5-flurocytosine,94.8% to fluconazole,75.3% to miconazole,85.1%to ketoconazole，and 77.9% to itraconazole.Conclusion Genital Candida infections mainly occur in women of childbearing age.As for candida species composition,there is no statistical significance between the group of fungal postive samples and the group of negative samples by microscopic examination from.

Candida; vulvovaginal candidiasis; susceptibility test

广东省深圳市科技计划资助项目(201202007)。

董晶，男，本科，主管技师，主要从事临床医学检验研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.12.017

A

1672-9455(2015)12-1702-03

2014-12-25

2015-02-15)