基因型检测对乙型肝炎病毒感染程度的诊断效果

贾冬青

(山东省荷泽市单县中心医院检验科 274300)



·论 著·

基因型检测对乙型肝炎病毒感染程度的诊断效果

贾冬青

(山东省荷泽市单县中心医院检验科 274300)

目的 探讨基因型检测对乙型肝炎病毒(HBV)感染程度的诊断效果。方法 选取2014年1～6月收治的120例HBV感染患者，进行HBV DNA载量、基因型分布及E抗原检测。结果 B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者分别有82例(68.33%)、30例(25.00%)和8例(6.67%)，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者与DNA载量之间无明显相关性(P>0.05)。B基因型患者HBV E抗原阴性比例显著高于C基因型和B、C混合基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)；B、C混合基因型患者HBV E抗原阴性比例显著高于C基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)。慢性乙型肝炎以B基因型为主，原发性肝癌以C基因型为主，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 荷泽地区HBV基因型以B、C为主，基因型分布与感染严重程度及E抗原阴性率有关，与DNA表达载量无关。

乙型肝炎病毒；基因型；程度；DNA载量

乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个世界性的公共卫生问题，其感染引发的乙型病毒性肝炎是血源传播性疾病，主要经血液传播、母婴传播和性接触传播[1]。我国作为乙肝大国，HBV携带者人数近1亿，约占7.81%[2]。HBV作为一种双链DNA病毒，其基因型分布存在明显的地域性[3]。为探讨HBV基因型检测的临床价值，本文对本院2014年1～6月收治的120例HBV感染患者的HBV基因型进行检测，探讨其与感染程度之间的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1～6月收治的120例HBV感染患者，男76例，女44例；年龄22～82岁，平均(46.9±15.8)岁；慢性乙型肝炎68例，乙型肝炎后肝硬化36例，原发性肝癌16例。入选标准：符合2000年全国病毒性肝炎学术会议所制定的《全国病毒性肝炎防治方案》中有关乙型肝炎的诊断标准；血清HBV DNA检测采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和/或抗-HBV检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)阳性；近6个月内无免疫调节剂应用史；知情同意。排除标准：合并有其他病毒性肝炎、自身免疫性疾病等严重疾病；近6个月内应用免疫调节剂；长期酗酒者；妊娠期妇女或哺乳者。患者按HBV DNA载量水平分为高载量组(HCV DNA>1×105copy/mL)、中载量组[HCV DNA(1×103～1×105)copy/mL]、低载量组(HCV DNA<1×103copy/mL)。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 PCR仪为Hema 9600基因扩增仪；全自动酶免疫分析仪为瑞士哈数顿公司产品，杂交炉为深圳亚能生物制品有限公司产品。HBV核酸定量试剂盒由凯杰生物工程(深圳)有限公司提供；HBV E抗原检测试剂盒购自北京万泰生物医药有限公司；HBV E抗原检测试剂购自上海科华生物技术有限公司。

1.2.2 HBV DNA载量检测 按操作步骤，采用实时荧光定量PCR检测HBV DNA。

1.2.3 HBV基因分型检测 一步法提取患者血清HBV基因组DNA，进行多引物PCR扩增。93 ℃预变性6 s；93 ℃ 30 s，58 ℃ 40 s，72 ℃ 45 s，10个循环；93 ℃ 30 s，56 ℃ 40 s，72 ℃ 45 s，10 个循环；93 ℃ 30 s，55 ℃ 40 s，72 ℃ 45 s，15个循环；72 ℃ 7 min。PCR产物琼脂糖电泳：将5 μL PCR产物与1 μL 6×载样缓冲液混匀后加入琼脂糖凝胶上样孔中，同时做DNA标准参照物和PCR阴性对照。电压15 V/cm，20 min。结束后于320 nm紫外灯下观察，并将图像保存于Gel-Doc 2000凝胶成像仪[4]。

1.2.4 HBV E抗原检测 采用双抗体夹心ELISA检测HBV E抗原，严格按说明书操作。

1.3 统计学处理 统计分析所有资料采用SPSS19.0软件进行分析处理，计数资料以n(%)表示，采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。相关性分析采用Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 基因型分布 B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者分别有82例(68.33%)、30例(25.00%)和8例(6.67%)，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2 基因型分布与DNA载量的关系 见表1。B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者与DNA载量之间无明显相关性(P>0.05)。

表1 120例HBV感染者基因型分布与DNA载量的关系

2.3 基因型分布与HBV E抗原的关系 见表2。B基因型患者HBV E抗原阴性比例显著高于C基因型和B、C混合基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)；B、C混合基因型患者HBV E抗原阴性比例显著高于C基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 120例HBV感染者基因型分布与HBV E抗原的关系[n(%)]

注：与B、C混合基因型比较，*P<0.05；与C基因型比较，#P<0.05。

表3 120例HBV感染者基因型分布与临床表型的关系[n(%)]

注：与B、C混合基因型比较，*P<0.05；与C基因型比较，#P<0.05。

2.4 基因型分布与临床表型的关系 见表3。慢性乙型肝炎以B基因型为主，原发性肝癌以C基因型为主，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

我国属于乙型肝炎的高发区，有1.5亿HBV 感染者，其中2 000万人为慢性乙型肝炎患者，每年因此导致大约50万人死亡[5]。HBV感染造成的乙型肝炎，以及肝硬化、肝细胞癌等肝脏疾病，严重威胁着人类的健康。

HBV属于嗜肝DNA病毒科的一种部分双链环状DNA病毒，其感染的流行强度在地域间存在很大差异，不同地区感染HBV 的基因型亦存在差异。本组数据显示，120例HBV感染者中，B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者分别有82例(68.33%)、30例(25.00%)和8例(6.67%)，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。提示荷泽地区HBV感染者中主要以B基因型为主，其次是C基因型和B、C混合基因型感染。国外研究表明，HBV感染者B、C基因型主要分布在东亚及东南亚，A、D基因型主要分布在美国和欧洲，E基因型多分布在非洲，这与本文结果一致[6-7]。潘登[8]在其学位论文中对来自中国包括香港、台湾地区共计1 642例HBV全基因组序列进行分析，其中A型8例(0.5%)，B型634例(38.6%)，C型935例(57.0%)，D型30例(1.8%)，I型35例(2.1%)，以C型为主，B型次之。也有研究表明，国内南方以B型为主，北方以C型为主[9]。

本组数据显示，B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者与DNA载量之间无明显相关性(P>0.05)，提示HBV DNA与DNA载量之间无明显相关性。吴意等[3]报道，HBV DNA表达载量在B基因型、C基因型和B、C混合基因型患者间差异无统计学意义，不同基因型的HBV载量无差异，与本文结果一致。也有学者证实，不同基因型HBV感染患者HBV DNA载量存在明显差异。高海彦等[5]发现，不同HBV基因型DNA载量存在显著差异，C基因型HBV DNA载量显著高于B基因型。本文发现B基因型患者HBV E抗原阴性比例显著高于C基因型和B、C混合基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)；B、C混合型患者HBV E抗原阴性比例显著高于C基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)，与徐严等[10]报道一致。

目前普遍认为，HBV感染者C基因型引起的炎性坏死及纤维化程度比B基因型更加严重，且C基因型与肝硬化和肝癌有关，可能与不同基因型某些致癌位点变异发生情况差异有关[11]。本组数据显示，慢性乙型肝炎以B基因型为主，原发性肝癌以C基因型为主，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。随着病情的加重，C基因型HBV比例增加，B基因型HBV比例降低，原发性肝癌患者未发现B、C混合基因型。也有研究认为，B、C混合基因型感染与肝病的恶化有关，如急性肝炎、肝硬化和肝癌等[12]。

综上所述，荷泽地区HBV基因型以B、C为主，基因型分布与感染严重程度及E抗原阴性率有关，与DNA表达载量无关。

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Effect of genotype inspection on the diagnosis of the degree of hepatitis B virus infection

JIADong-qing

(DepartmentofClinicalLaboratory,CentralHospitalofShanCounty,Heze,Shandong274300,China)

Objective To investigate the effect of genotype inspection on the diagnosis of the degree of hepatitis B virus (HBV) infection.Methods 120 cases of patients with HBV infection were enrolled from January 2014 to June 2014.The HBV DNA capacity,genotype and HBeAb were inspected.Results There were 82 cases (68.33%) of HBV B genotype,30 cases (25.00%) of HBV C genotype and 8 cases (6.67%) of HBV B/C genotype,with significant difference between groups (P<0.05).There was no significant correlation between HBV B genotype,HBV C genotype,HBV B/C genotype and HBV DNA capacity (P>0.05).The HBeAb negative rate of patients infected by HBV B genotype was significantly higher than that of patients infected by HBV C genotype and HBV B/C genotype (P<0.05).The HBeAb negative rate of patients infected by HBV B/C genotype was significantly higher than that of patients infected by HBV C genotype (P<0.05).HBV B genotype was the main genotype of chronic hepatitis B,and HBV C genotype was the main genotype for primary hepatic carcinoma,with significant difference (P<0.05).Conclusion In Heze area,HBV B genotype,HBV C genotype were the main genotypes for HBV infection.HBV genotype was correlated with infection degree and HBeAb negative rate,while not related with HBV DNA capacity.

hepatitis B virus;genotype;degree;DNA capacity

贾冬青，女，本科，主管技师，主要从事生化、免疫检测。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.034

A

1672-9455(2015)23-3536-02

2015-04-22

2015-06-22)