88份痰培养检验结果的调查分析

喻云平，费 樱，余红岚

(1.贵阳医学院医学检验学院，贵阳 550004；2.贵阳医学院附属医院微生物免疫科，贵阳 550004；3.贵阳市第一人民医院检验科，贵阳 550002)



·论 著·

88份痰培养检验结果的调查分析

喻云平1，费 樱2，余红岚3△

(1.贵阳医学院医学检验学院，贵阳 550004；2.贵阳医学院附属医院微生物免疫科，贵阳 550004；3.贵阳市第一人民医院检验科，贵阳 550002)

目的 调查该院痰标本病原菌的分布及耐药情况，指导临床合理用药。方法 对痰标本进行涂片检查，筛选合格标本进行细菌鉴定及药敏试验。结果 128份标本中，筛选出合格标本88份(合格率68.75%)；每例痰培养分离出病原菌各1株，共88株，其中革兰阳性菌14株，占15.9%，均为金黄色葡萄球菌；革兰阴性菌74株，占84.1%，以肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌为主。金黄色葡萄球菌对阿莫西林和苯唑西林的耐药率为71.43%，对四环素、头孢唑啉、亚胺培南及克林霉素的耐药率均为64.29%，对罗米沙星和红霉素的耐药率均为57.14%。肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌对大多数抗菌药物的耐药率较低，大肠埃希菌对头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均为62.50%。鲍曼不动杆菌对所用的实验药物呈普遍耐药趋势,对抗菌谱广的亚胺培南、头孢吡肟及阿米卡星的耐药率分别达77.78%、77.78%及55.56%。结论 对于有呼吸道感染症状的患者应尽早送合格的痰标本进行痰培养及药敏试验。

痰涂片； 病原菌； 痰培养； 耐药性

呼吸道标本是我国临床微生物室最常见的标本类型，而此类标本的采集和运送存在不确定性，影响了肺部感染病原菌的判断，进而可能导致抗菌药物的不合理使用。痰培养及药敏试验结果是呼吸道感染诊断与治疗的依据，目前临床医生对感染性疾病的诊断和治疗主要依靠实验室检查结果。随着抗菌药物的广泛应用和细菌的变异，细菌耐药性的产生及耐药菌株引起的感染日益严重，多种致病菌已对临床常用抗菌药物产生耐药。为指导临床合理性用药，现将本院2014年1～2月住院患者痰标本进行涂片镜检，并进行培养分离鉴定及药敏分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 128株病原菌来源于贵阳市第一人民医院2014年1～2月住院患者痰液，所有标本进行涂片镜检、培养分离鉴定及药敏试验。

1.2 仪器与试剂 西门子公司生产的MicroScan WalkAway 40全自动细菌分析仪及配套的细菌鉴定药敏分析试剂板；二氧化碳细胞培养箱YCP-50。血平板和巧克力平板均为广州市迪景微生物科技有限公司产品。标准菌株:大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、金黄色葡萄球菌ATCC 25923。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片的制备 将临床送检的痰标本进行涂片及革兰氏染色，根据染色结果将痰标本分为3类[均为低倍视野(LHP)]：(1)合格标本(鳞状上皮细胞≤10/LHP，白细胞≥25/LHP)；(2)可接受标本(鳞状上皮细胞<10～<25/LHP，白细胞≥25/LHP，且细菌种类为3种或3种以上)；(3)不合格标本(鳞状上皮细胞≥25/LHP，白细胞≤10/LHP)。

1.3.2 细菌分离 痰标本同时涂片革兰氏染色并接种血平板、巧克力平板，24～48 h后分离可疑细菌。

1.3.3 细菌培养鉴定及药敏试验 操作严格按《全国临床检验操作规程》进行。细菌鉴定和药敏试验均采用西门子MicroScan WalkAway 40 Plus 全自动细菌分析仪及配套试剂。

1.3.4 临床处理调查 查阅患者病历，统计临床医生根据药敏结果调整用药方案的具体情况。

1.4 统计学处理 耐药率、合格率、临床处理情况采用百分比表示；合格标本与不合格标本间耐药率的比较采用SPSS11.5软件进行χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 痰涂片结果 在128份痰标本涂片中，合格标本70份，可接受标本18份，合格率为68.75%，不合格标本40份，不合格率为31.25%。

2.2 痰培养分离病原菌构成比 在分离出的88株病原菌中，革兰阴性菌74株，占84.1%，革兰阳性菌14株，占15.9%,检出率较高的病原菌依次为肺炎克雷伯菌(28.4%)、金黄色葡萄球菌(15.9%)、铜绿假单胞菌(12.5%)、鲍曼不动杆菌(10.22%)、大肠埃希菌(9.09%)、奇异变形杆菌(6.81%)、嗜麦芽黄单胞菌(2.27%)、阴沟肠杆菌(2.27%)、产酸克雷伯菌(2.27%)、黏质沙雷氏菌(2.27%)、摩根摩根氏菌(2.27%)、洛菲氏不动杆菌(2.27%)、催产克雷伯菌(1.13%)、洋葱伯克霍尔德菌(1.13%)、产气肠杆菌(1.13%)。产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌的检出率：肺炎克雷伯菌32%(8/25)、大肠埃希菌75%(6/8)。

2.3 合格标本痰培养中主要细菌的耐药情况 肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌对各抗菌药物的耐药率较低，大肠埃希菌对头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均大于60.00%，鲍曼不动杆菌对所用的试验药物呈普遍耐药,对抗菌谱广的亚胺培南、头孢吡肟及阿米卡星的耐药率分别为77.78%、77.78%及55.56%，主要格兰阴性菌对抗菌药物的耐药率结果见表1。金黄色葡萄球菌对阿莫西林、苯唑西林、亚胺培南、克林霉素、四环素、头孢唑啉的耐药率均大于60.00%，分别为71.43%、71.43%、64.29%、64.29%、64.29%、64.29%，对红霉素、罗米沙星的耐药率均大于50.00%，均为57.14%，对环丙沙星、利福平、庆大霉素的耐药率均为50.00%，对万古霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、氨苄西林、哌拉西林、喹奴普丁、利奈唑胺、氯霉素、青霉素的耐药率均为0.00%。

表1 主要革兰阴性菌对抗菌药物的耐药率(%)

续表1 主要革兰阴性菌对抗菌药物的耐药率(%)

2.4 临床医生对检验结果的处理情况 查阅病历显示，有72例(81.81%)检验报告结果被临床医生采用，根据报告结果调整抗菌药物或继续使用对检验结果敏感的抗菌药物，有14例(18.18%)检验结果未被临床医生采用。

3 讨 论

呼吸道感染疾病在临床感染性疾病中最为常见，而痰培养及药敏试验为病原学诊断及合理使用抗菌药物提供了依据[1]。合格痰标本的筛选依赖于涂片镜检，只有痰标本达到合格条件，细菌培养及药敏结果才值得参考采用[2-3]。口咽部存在大量的定植菌使咳痰采集的标本易受污染，本院临床送检的痰标本有68.75%合格、31.25%不合格，该结果从一定程度上验证了上述观点。

本研究结果显示，呼吸道感染的主要致病菌为革兰阴性菌，占所有分离细菌的84.1%，与国内外近年报道基本一致[1,4-6]。革兰阴性菌中检出前4位的细菌分别是肺炎克雷伯菌(28.4%)、铜绿假单胞菌(12.5%)、鲍曼不动杆菌(10.22%)和大肠埃希菌(9.09%)，其次为奇异变形杆菌(6.81%)，再次为嗜麦芽黄单胞菌(2.27%)、阴沟肠杆菌(2.27%)、产酸克雷伯菌(2.27%)、黏质沙雷氏菌(2.27%)、摩根摩根氏菌(2.27%)、洛菲氏不动杆菌(2.27%)。为何引起院内呼吸道感染的这些病原菌过去一直被视为机体“正常菌群”，而如今却成为主要病原菌呢？这与下面3个主要因素相关：(1)抗菌药物滥用导致耐药菌株的产生。(2)长期大量放疗、化疗、激素、免疫抑制剂的使用导致机体防御能力下降。(3)医源性侵入使细菌逃脱机体固有免疫的防御而直接入侵体内。这些因素能使感染的细菌种类不断变异。本次检出的革兰阳性菌只有金黄色葡萄球菌，占检出病原菌的15.9%。

本次检出的革兰阴性菌中，铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌对各种抗菌药物的耐药率较低，这与近年来的研究基本相符[7]。黄学忠等[7]研究发现，过去5年痰标本铜绿假单胞菌检出率为39.2%，且亚胺培南耐药菌株占74.1%，但对头孢他啶、头孢吡肟、替卡西林、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、环丙沙星等的耐药率呈明显下降趋势，但本研究中铜绿假单胞菌的检出率低于文献结果，且并未检出对亚胺培南耐药的菌株，这可能与本次检出细菌较少有关。大肠埃希菌对第3代头孢菌素类药物(头孢噻肟、头孢曲松)的耐药率均大于60.00%，且75%的大肠埃希菌产ESBLs，耐药情况十分严峻，给临床抗感染治疗带来较大的困难。夏梦岩等[8]报道肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的产ESBLs率分别为31.5%～85.3%和41.3%～87.2%，且对碳青霉烯类仍然敏感。本研究检出的肺炎克雷伯菌产ESBLs率为32%，耐药情况与上述研究基本相符。鲍曼不动杆菌对所用的试验药物普遍耐药,对抗菌谱广的亚胺培南、头孢吡肟及阿米卡星的耐药率分别达77.78%、77.78%及55.56%，这与近年来鲍曼不动杆菌对大多数抗菌药物耐药率都在50%以上的研究结果相一致[9-10]。金黄色葡萄球菌对阿莫西林、苯唑西林、亚胺培南、克林霉素、四环素、头孢唑啉的耐药率均大于60.00%，对红霉素、罗米沙星的耐药率均大于50.00%,对万古霉素敏感，与文献[11]报道一致。

本研究调查了临床医生对检验结果的处理情况，发现有81.81%的细菌培养及药敏结果被临床医生采用，这提示检验科需要做好细菌培养及药敏检验全程的质量控制以便及时、准确地向临床提供检验结果，为临床合理用药提供参考。

综上所述，对于有呼吸道感染症状的患者应尽早送合格的痰标本进行痰培养及药敏试验，以便及时掌握引起呼吸道感染的病原菌种类及其耐药性，帮助临床及时、合理地使用抗菌药物，避免由于经验性使用抗菌药物导致细菌耐药性增加的情况。

[1]陈倩如,陆国标.228 例痰培养病原菌分布及细菌耐药性分析[J].当代医学,2013,19(1):27-28.

[2]杨朵,辛续丽,马东媛,等.痰培养标本合格性评估标准的比较[J].检验医学,2012,27(9):773-775.

[3]梁金花.238 份痰标本涂片与培养结果分析[J].检验医学与临床,2012,9(13):1634-1635.

[4]戴以顺,齐兴江,江周书.下呼吸道感染病原菌分布及药敏分析[J].中华医院感染学杂志,2014,24(11):2619-2620.

[5]陈友军,唐双阳,李乐.呼吸道感染痰培养的病原菌分布及其耐药分析[J].中国卫生检验杂志,2011,21(8):2067-2069.

[6]王福兰,李福玲,王桂荣,等.ICU 下呼吸道感染者病原菌分布及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2012,22(3):635-637.

[7]黄学忠,林佩佩,陈晓飞.痰标本铜绿假单胞菌 224 株 5 年耐药变迁[J].检验医学与临床,2013,10(5):560-561.

[8]夏梦岩,高全成,袁晨光.大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药性的变迁研究[J].中华医院感染学杂志,2014,24(2):287-289.

[9]钱菁菁，周翠，吴莲凤，等．鲍曼不动杆菌耐药特性及同源性研究[J]．中国卫生检验杂志，2014,24(8):1188-1190.

[10]白国强,李昂,段美丽.鲍曼不动杆菌的耐药机制及抗生素治疗研究进展[J].山东医药,2014,54(4):87-90.

[11]刘军辉,李鹏,王淑梅,等.葡萄球菌的耐药性分析[J].西安交通大学学报:医学版,2011,32(1):135-136.

Investigation and analysis of 88 cases of sputum culture results

YUYun-ping1，FeiYing2，YUHong-lan3△

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine，GuiyangMedicalUniversity,Guiyang，Guizhou550004，China；2.DepartmentofMicrobiologyandImmunologyofGuiyangMedicalCollegeHospital,Guiyang,550004,China;3.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofGuiyang,Guiyang,Guizhou550002，China)

Objective To investigate the distribution and the drug resistance of pathogenic bacteria in the sputum specimens,in order to guide clinical rational drug use.Methods The sputum specimens were smeared and observed. Qualified sputum specimens were selected for bacterial identification and susceptibility testing.Results Among 128 cases of sputum specimens,there were 88 cases of qualified specimens screened (qualified rate was 68.75%). 88 strains of pathogenic bacteria were respectively isolated from 88 cases of qualified specimens via sputum culture,including 14 strains (15.9%) of Gram positive bacteria and 74 strains (84.1%) of Gram negative bacteria. All of the isolated Gram positive bacteria were Staphylococcus aureus. The isolated strains of Gram negative bacteria were mainly Klebsiella pneumonia,Acinetobacter baumannii,Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli. The resistance rates of Staphylococcus aureus to amoxicillin and oxacillin were both 71.43%,to tetracycline,cefazolin,imipenem and clindamycin were 64.29%,and to romi lomefloxacin and erythromycin were both 57.14%. The drug resistance rates of Klebsiella pneumonia and Pseudomonas aeruginosa to most of the antibiotics were low. The drug resistance rates of Escherichia coli to cefotaxime and ceftriaxone were both 62.50%. Acinetobacter baumannii was resistant to all of the experimental drugs,and its resistance rates to imipenem,cefepime and amikacin were 77.78%,77.78% and 55.56%,respectively.Conclusion The qualified sputum specimens from patients with respiratory tract infection should be sent to culture and test the drug sensitivity as soon as possible.

sputum smear; pathogenic bacteria; sputum culture; drug resistance

喻云平，男，检验师，硕士，主要从事自身感染性疾病的免疫机制研究。△

，E-mail:1049251463@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.022

A

1672-9455(2015)07-0931-02

2014-10-05

2014-12-22)