ATB STREP 5对肺炎链球菌药敏试验结果判读的缺陷性分析*

肖亚雄，彭宇生，王 鹏，黄忠团，代小琴

(四川省宜宾市第一人民医院检验科 644600)



·论 著·

ATB STREP 5对肺炎链球菌药敏试验结果判读的缺陷性分析*

肖亚雄，彭宇生，王 鹏，黄忠团，代小琴

(四川省宜宾市第一人民医院检验科 644600)

目的 探讨ATB STREP 5肺炎链球菌药敏试剂盒在用于肺炎链球菌药敏结果判读中存在的缺陷。方法 以临床实验室标准化协会(CLSI)M100-S23文件提供的肺炎链球菌对应抗菌药物折点为标准，对ATB STREP 5试剂盒抗菌药物覆盖情况与各抗菌药物折点浓度进行对比分析。结果 ATB STREP 5试剂盒不包括CLSI推荐的碳青霉烯类和噁唑烷酮类等抗菌药物。ATB STREP 5试剂盒提供的11种抗菌药物中，有9种抗菌药物折点与CLSI M100-S23文件推荐的抗菌药物折点不一致，可能导致临床药敏报告出现假耐药的情况。结论 在现行CLSI参考标准下，单独使用ATB STREP 5试剂盒进行肺炎链球菌药敏试验将产生较大误差甚至错误，必须联合使用其他药敏试验方法进行修正后方可发出报告。

肺炎链球菌； 耐药性； 缺陷

肺炎链球菌为苛养菌，临床实验室标准化协会(CLSI)推荐使用最低抑菌浓度(MIC)法及E-test法来测定该菌的耐药性[1]。法国生物梅里埃公司所生产的ATB STREP 5药敏试剂盒为MIC法，其操作简单，适合于临床运用，在国内已得到了广泛应用[2-4]。但是笔者在应用该试剂盒的过程中发现，该试剂盒在抗菌药物种类的范围设置及抗菌药物敏感、中介、耐药折点设置方面存在缺陷。可能对临床用药造成误导。本研究以CLSI M100-S23文件中的2G-肺炎链球菌抑菌圈直径和MIC解释作为参考标准(以下简称CLSI标准)[1]，对ATB STREP 5肺炎链球菌药敏试剂盒所包含的抗菌药物覆盖情况、对应MIC等在临床运用中的局限性进行了分析，以期引起使用该试剂盒的检验同仁的注意，更好地为临床抗菌药物的合理使用提供正确的指导。

1 材料与方法

1.1 材料 ATB STREP 5肺炎链球菌药敏试剂盒(生物梅里埃公司生产)。

1.2 方法 以CLSI M100-S23文件中的2G-肺炎链球菌抑菌圈直径和MIC解释作为参考标准，对生物梅里埃公司生产的ATB STREP 5肺炎链球菌药敏试剂盒所提供的11种抗菌药物所覆盖的范围及对应折点情况与CLSI M100-S23文件进行对比分析，查找差异，并对其在临床运用中可能出现的误差或错误进行分析。

2 结 果

2.1 ATB STREP 5试剂盒抗菌药物种类覆盖情况分析 ATB STREP 5试剂盒一共包含11种抗菌药物：青霉素、阿莫西林、头孢噻肟、红霉素、喹奴普丁/达福普丁、克林霉素、四环素、左氧氟沙星、氯霉素、万古霉素、复方磺胺甲噁唑。上述11种抗菌药物覆盖了青霉素类、三代头孢菌素类、大环内酯类、链阳霉素类、林可酰胺类、四环素类、氟喹诺酮类、氯霉素、糖肽类、叶酸代谢途径抑制剂类抗菌药物；CLSI M100-S23文件对于肺炎链球菌药敏试验所选药物除要求覆盖上述各类抗菌药物外，还要求包括碳青霉烯类(美罗培南)、噁唑烷酮类(利奈唑胺)、二代头孢菌素类(头孢呋辛)、头孢洛林(非脑膜炎)及安莎霉素类(利福平，不单独使用)等，见表1。

2.2 ATB STREP 5试剂盒与CLSI标准推荐抗菌药物折点比较分析 从表1可见，ATB STREP 5试剂盒提供的11种抗菌药物中，半数以上抗菌药物的浓度范围与现行CLSI标准折点存在差异，具体表现：青霉素浓度范围为0.031～4.000 μg/mL，而针对于非脑脊液分离出的肺炎链球菌MIC≥8 μg/mL才可判读为耐药，如果根据试剂盒说明书进行判读，当4 μg/mL最高浓度孔中有细菌生长，可能实际MIC为4～8 μg/mL，应判读为中介，根据说明书可误判为耐药；红霉素、喹奴普丁/达福普丁、克林霉素、四环素、氯霉素等6种抗菌药物仅提供了1个浓度折点，这一折点正好为敏感折点，根据试剂盒说明书，单一浓度抗菌药物测试孔中如果有细菌生长则判读为耐药，而实际上根据CLSI标准，可能实际为中介的抗菌药物被误判为耐药；阿莫西林、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑则因为耐药拐点的上调也可能误将原本中介的抗菌药物误判为耐药，见表1。

表1 ATB STREP 5试剂盒浓度范围与CLSI M100-S23文件折点比较

注：CSF表示脑脊液分离菌株；非CSF表示非脑脊液分离菌株；-表示无数据。

3 讨 论

常规临床检验指标如血糖、血脂、血细胞计数参考范围或临床标准相对较稳定，因此一个标准或参考值可以沿用多年。而细菌耐药性与上述检验指标不同，因为细菌耐药性与临床抗菌药物的合理/不合理使用[5-6]，以及细菌本身耐药基因的变异等诸多因素存在直接关联[7-8]，因此对于细菌耐药、敏感判读的折点相对上述其他临床指标而言变异较大。CLSI标准每年更新，临床微生物实验室通常采取当年或上一年颁布的标准作为参照，其中M100-S23文件由CLSI于 2013年颁布。

肺炎链球菌是临床标本中分离率较高的一种链球菌，其中大部分属于致病菌或条件致病菌，因此需要出具临床药敏报告以供临床医生参考。选择正确的试验方法和试剂盒是满足临床要求所必需的。ATB STREP 5试剂盒操作简单、判读方便、无需特殊仪器，较传统的微量肉汤稀释法或药敏纸片法更适合于临床运用。但是，由于该试剂盒提供的反应孔内抗菌药物浓度是固定的，同一种抗菌药物包括1个低浓度孔(用于敏感的判读)和1个高浓度孔(用于耐药的判读)，有的仅有1个判读敏感的浓度孔。一旦抗菌药物敏感、耐药判读折点发生变化时，则有可能导致判读结果错误，对临床用药产生误导。

本研究将ATB STREP 5试剂盒说明书提供的抗菌药物浓度和CLSI标准制订的折点进行比较，发现从抗菌药物覆盖范围来看，该试剂盒提供的抗菌药物种类缺少碳青霉烯类(美罗培南)、噁唑烷酮类(利奈唑胺)、二代头孢菌素类(头孢呋辛)等抗菌药物。其中CLSI标准指出，厄他培南、亚胺培南、美罗培南可用于治疗肺炎链球菌引起的感染，而该试剂盒没有覆盖。另外从抗菌药物浓度范围来看，除头孢噻肟与万古霉素2种抗菌药物与CLSI标准一致外，其余9种抗菌药物均存在浓度覆盖范围过窄的情况，可能导致原本中介的抗菌药物被误判为耐药，导致临床原本可以使用的抗菌药物受到限制。

加强抗菌药物的合理使用，一直是国内外临床专家、微生物专家呼吁和关注的问题[9]。就目前来看，国内临床实验室所使用的梅里埃ATBSTREP5肺炎链球菌药敏试剂盒与CLSI标准存在较大差异。因此，如果采用该试剂盒结果出报告需要慎重，对于未覆盖的抗菌药物需要补充其他覆盖该抗菌药物的试剂盒进行补充，或用手工方法进行补充报告，对于使用ATBSTREP5试剂盒判读为耐药的抗菌药物报告一定要谨慎，需要其他试验进行补充验证为耐药后方可发出，以防止中介误判为耐药而发出错误报告，误导临床用药。

[1]CLSI.M100-S23 Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:twenty-third informational supplements[S].Wayne,PA:CLSI,2013.

[2]吴佳学.儿科痰培养肺炎链球菌耐药分析[J].中华医院感染学杂志,2009,19(1):96-98.

[3]郭远瑜,王红旗,窦琳琳,等.浙江萧山医院肺炎链球菌的分离和多重耐药菌及耐药性分析[J].中国卫生检验杂志,2014,24(5):745-748.

[4]吾金虎,陶云珍,王运中.苏州地区2010～2011年儿童临床分离肺炎链球菌耐药监测[J].中国热带医学,2012,12(5):571-573.

[5]黄会英,郑瑞.细菌耐药与抗菌药的合理应用分析[J].黑龙江医学,2014,27(2):356-358.

[6]王平珍,刘秋龙,周庆华,等.多重耐药铜绿假单胞菌感染的危险因素与合理用药的研究[J].实验与检验医学,2014,32(3):260-263.

[7]贾方增,郑小涛,陈统献,等.不同病区金黄色肺炎链球菌的耐药性及mecA基因携带差异研究[J].中华医院感染学杂志,2014,24(7):1567-1569.

[8]Mezzatesta ML,Caio C,Gona F,et al.Carbapenem and multidrug resistance in Gram-negative bacteria in a single centre in Italy:considerations on in vitro assay of active drugs[J].Int J Antimicrob Agents,2014,44(2):112-116.

[9]刘祖德,鲁燕侠,刘晓军,等.抗菌药物使用现状及对策分析[J].中华医院感染学杂志,2011,21(9):1868-1869.

Defect analysis of ATB STREP 5 kit in the susceptibility test of Streptococcus pneumoniae*

XIAOYa-xiong，PENGYu-sheng，WANGPeng，HUANGZhong-tuan,DAIXiao-qin

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofYibinCity,Yibin,Sichuan644600,China)

Objective To explore the defects of ATB STREP 5 kit in the susceptibility test of Streptococcus pneumoniae.Methods The varieties and breakpoint concentrations of antibiotics included in ATB STREP 5 kit were analyzed by using the breakpoint concentrations of anti-Streptococcus pneumonia drugs recommend in CLSI document M100-S23 as standard.Results ATB STREP 5 kit did not include carbapenems and oxazolidinone antibacterial drugs that were recommended by CLSI. Among 11 kinds of antibacterial drugs included in ATB STREP 5 kit,there were 9 kinds of antibacterial drugs having different breakpoint concentrations compared with CLSI M100-S23 standard. These defects might lead to false resistant results in reports.Conclusion According to current CLSI reference standards,if ATB STREP 5 kit was the single method used for susceptibility detection of Streptococcus pneumonia,errors even mistakes would occur. The susceptibility results of Streptococcus pneumonia detected by ATB STREP 5 kit should be corrected by other methods before reporting.

Streptococcus pneumoniae； drug resistance； defection

四川省宜宾市科技局重点科技计划资助项目(2012SF005)。

肖亚雄，男，主管技师，硕士，主要从事临床微生物耐药性研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.015

A

1672-9455(2015)07-0915-02

2014-10-16

2015-01-15)