血浆色素上皮衍生因子及血管内皮生长因子含量与2型糖尿病视网膜病变相关性的研究

李亚永，薛 鹏，王瑜玲，刘 岩，李玉坤，江新利

（1.河北省石家庄市第一医院内科，河北 石家庄050011；2.河北医科大学第三医院内分泌科，河北 石家庄050051；3.河北医科大学第三医院神经内科，河北 石家庄050051；4.河北医科大学第三医院眼科，河北 石家庄050051）

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常见和最严重的眼部微血管并发症之一，也是致盲的重要眼病之一。DR最主要的病理改变是新生血管的形成。其中，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）是最重要的血管刺激因子和抑制因子，它们的协同作用在生理性和病理性眼底新生血管形成过程中起着关键作用，二者的动态平衡对血管渗漏与新生血管的形成至关重要［1］。但是，目前的研究多集中在动物模型，且多集中于眼球局部［2］。本研究通过检测血浆中PEDF及VEGF的含量，旨在明确循环中二者与DR的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年4—12月河北医科大学第三医院内分泌科、眼科门诊及住院2型糖尿病患者71例，年龄30～73岁，病程0.05～36年。排除标准：年龄＜30或＞75岁，1型糖尿病，严重心脑血管疾病（心力衰竭、心律失常、心肌梗死），感染，肝肾功能异常，肿瘤，自身免疫系统疾病，低蛋白血症，贫血。根据血糖水平和眼底荧光造影及眼底检查结果，将糖尿病患者分为2型糖尿病无视网膜病变（diabetes mellitus without retinopathy）即DM 无DR组22例，2型糖尿病伴非增殖期视网膜病变（diabetes mellitus nonproliferative DR）即 DM 伴DR组33例，2型糖尿病伴增殖期视网膜病变组（diabetes mellitus with proliferative DR）即 DM 伴PDR组16例。另选取正常志愿者（非糖尿病组）13例作为对照。所有入选对象均被告知实验过程并签署知情同意书。

1.2 血浆样本采集 于清晨空腹状态下，上臂肘前静脉取血3mL，用0.1mol／L 乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝；血浆标本4℃静置4h后3 500r／min离心10min，吸取上清，分装后置于-80℃冰箱待用。

1.3 血浆PEDF和VEGF含量测定 应用人PEDF酶联免疫吸附测定（enzyme-inked immunosorbent assay，ELISA）试 剂 盒 （美 国Chemicon公司）和VEGF ELISA试剂盒（美国ImmunoWay公司），采用双抗体夹心ELISA法检测。

1.4 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件包处理数据。计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验；非正态分布数据以中位数（四分位数间距）［M（QR）］表示，多组间比较和两两比较采用秩和检验；相关性采用直线相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 研究对象的基线特征 4组间性别差异无统计学意义（P＞0.05）。与非糖尿病组比较，DM 无DR组、DM伴NPDR组和DM伴PDR组年龄均较大（P＜0.05），且DM 伴NPDR组和 DM 伴PDR组年龄大于 DM 无 DR组（P＜0.05）；DM 伴NPDR组和DM伴PDR组病程更长，与DM无DR组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 各组血浆中PEDF和VEGF水平比较 与非糖尿病组比较，DM伴NPDR组和DM伴PDR组患者血浆中PEDF水平均明显升高（P＜0.05）；与DM无DR组比较，DM伴NPDR组和DM伴PDR组患者血浆中PEDF水平亦升高（P＜0.05）；DM无DR组与非糖尿病组比较、DM伴PDR组与DM伴NPDR组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。VEGF在4组中值的范围波动较大，但组间比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1 4组研究对象的基本特征Table 1 The basic characteristics of subjects in four grups

2.3 相关性分析 DR的严重程度与2型糖尿病病程、PEDF呈明显正相关（P＜0.01），而与性别、年龄、VEGF无相关性（P＞0.05）。见表3。

表2 各组血浆中PEDF和VEGF水平比较Table 2 Comparison of serum PEDF and VEGF concentrations in four groups［M（QR）］

表3 各变量与DR程度的相关性分析Table 3 The relativity analysis of variables and the degree of DR

3 讨 论

DR是糖尿病最常见和最严重微血管并发症之一，其基本病理改变是血视网膜屏障破坏，新生血管形成，后期新生血管膜收缩引起牵拉视网膜脱离。一些促血管生成因子和抗血管生成因子共同参与了DR的发生及进展，在这些因子中，VEGF与PEDF是研究的焦点。

本研究结果显示，血浆中PEDF随着糖尿病、DR的发生发展逐渐升高，虽然VEGF值范围波动较大，但与DR的发生发展无明显相关性。

VEGF是目前已知的功能最强的新生血管形成促进因子。研究发现，眼内VEGF水平随着DR的发展明显升高［3］。但是，关于DR患者血浆VEGF含量的数值差异极大。有实验表明增殖性DR患者的玻璃体内以及血浆的VEGF含量明显升高［4-5］。本研究结果显示，相对于非糖尿病患者，2型糖尿病患者血浆中VEGF的水平变化不大。随着DR的发生和发展，血浆中的VEGF亦无明显降低趋势，这可能跟样本量少有关。

目前国际上关于DR患者血浆中VEGF的含量的变化尚无一致结论。Cavusoglu等［6］发现随着DR的发展以及糖化血红蛋白水平的增加，血浆中VEGF的呈现逐渐上升的趋势。但Ozturk等［7］发现血浆中的VEGF水平并未随着DR的发生和发展呈现逐渐增加的趋势，在NPDR以及PDR的血浆中未发现VEGF的差异。Meleth等［8］也发现在不严重以及严重的DR患者血浆中VEGF无明显差别。结合本研究中观察到的糖尿病患者中血浆VEGF的含量变化，我们认为眼球局部VEGF含量的变化可能与DR的发展关系更为密切，而具体血浆中VEGF含量随着DR发生发展怎样变化，仍需进一步探讨。

PEDF被认为是最有效的天然血管抑制因子。在DR中PEDF是一个保护性因子，具有抗氧化应激、抗炎、减少毛细血管通透性等作用，可以拮抗VEGF的促血管增生作用。眼球内PEDF含量的减少，在DR发生过程中发挥着重要作用［3］。本研究结果显示随着DR的进展，患者血浆中PEDF有逐渐增加趋势，且血浆中的PEDF水平与DR的发生以及发展呈正相关，而非显示出对DR的保护作用。这可能是因为除眼外，机体多种组织均可产生PEDF，故PEDF在血液中的含量变化差异较大。既往对循环中PEDF的研究发现，血浆中的PEDF升高与机体胰岛素抵抗相关［9-11］，而这可能与肝脏或脂肪组织产生的PEDF增多有关［12］。Jenkins等［13］曾发现，与非糖尿病患者相比，2型糖尿病患者血浆中的PEDF含量明显升高，但PEDF含量与体质量指数、血肌酐以及低密度脂蛋白胆固醇含量有关，与药物应用、并发症以及性别无关。在本研究中，相对于非糖尿病人群，糖尿病患者血浆中的PEDF含量明显升高，且随着DR的发生与发展，血浆中的PEDF逐渐升高。故与既往国际上类似的观察结果相似，本研究发现血浆中PEDF水平随着DR的发生发展有增加的趋势，这可能与患者糖尿病病程延长、机体胰岛素抵抗程度增加有关。血浆PEDF的水平升高并未对DR起保护作用，这可能与眼内PEDF含量减少、对视网膜的保护作用减弱有关。

综上所述，本研究中血浆中PEDF的含量随着糖尿病、DR的发展呈现增加的趋势，这可能与糖尿病的病程增加、机体胰岛素抵抗的程度增加有关。而DR的发生发展与眼内PEDF含量的减少、对视网膜的保护作用减弱有关。

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