电针百会穴对小鼠大脑中动脉栓塞的保护作用研究

蔡璇，许菁，徐姣，潘邓记

脑梗死病理生理机制复杂，目前临床上普遍认为电针对脑梗死有治疗作用，但缺乏基础研究方面的论证。本研究观察电针治疗脑梗死的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料 ①实验动物：14～18周的雄性昆明小鼠48只，购自华中科技大学同济医学院动物房，体质量(30.0±3.0)g。②仪器：G6805-2A型低频电子脉冲治疗仪(上海医疗电子仪器有限公司)，健卫仕牌一次性无菌针灸针(上海泰成科技发展有限公司)。

1.2 方法 ①造模:通过颈内动脉线栓法建立小鼠大脑中动脉阻塞模型[1],术后室温恒定在25℃。②分组：将造模后小鼠随机分为电针组和针刺组各24只。③干预:电针组,造模术后第1天开始治疗，参照全国针灸学会实验针灸研究会制定的“实验动物针灸穴位图谱”，选取百会穴，φ0.32×15mm毫针刺入，接电针仪。采用连续波，频率3次/s，强度以针柄颤动，但动物能保持安静为度。每日1次，每次15min。针刺组，造模术后第1天开始针刺小鼠相同穴位,不予通电，每日1次，每次15min。

1.3 评定标准 ①神经功能评分[2]：术后4周，采用5分制评分法分别对2组小鼠进行评分。②梗死体积：从2组小鼠中各随机选择18只小鼠，断头取脑，冷冻后固定；选择每一切片的尾侧面用HPIAS-1000高清晰度图像处理系统进行分析，测量梗死体积。③免疫组化检测Bcl-xl蛋白表达：将2组各剩余的6只小鼠的脑组织进行检测。④脑片与膜片钳：2组各18只小鼠予以麻醉，开颅取脑，冷却固定，保持低温状态并持续通气。用振动切片机切成300μm厚的切片， 脑片放于5% CO2和95% O2饱和的Krebs碱性缓冲液5ml，在37℃下孵育30min平衡，然后上机记录神经元电活动。

2 结果

治疗4周后，电针组神经功能评分明显低于针刺组(P<0.01)，梗死体积明显小于针刺组(P<0.01)，Bcl-xl的表达量明显高于针刺组(P<0.01)。膜片钳结果显示，电针组BK-channel的宽度明显窄于针刺组(P<0.01)。见表1,图1a～b。

组别神经功能(分)脑梗死体积(mm3)Bcl⁃xl蛋白表达(个)动作电位宽度(ms)针刺组3．61±0．9227．28±2．59233．41±11．571．82±0．44电针组1．82±0．73a17．84±1．81a367．07±16．76a1．60±0．25a

与针刺组比较,aP<0.01

a.针刺组 b.电针组

图1a～b 2组小鼠Bcl-xl蛋白表达的免疫组织化学染色(×400)(箭头所示为Bcl-xl蛋白表达阳性细胞)

3 讨论

本研究结果显示，电针组小鼠的脑梗死体积及神经功能评分均明显低于针刺组，表明电针组小鼠大脑功能区损伤后的恢复程度好于针刺组小鼠。本研究发现电针组小鼠Bcl-xl的表达较针刺组明显增加。研究表明Bcl-xl参与多种蛋白质-蛋白质相互作用而发挥其抑制凋亡功能[3]。 在内源性凋亡途径中，Bcl-xl通过阻断Bax对线粒体外膜的破坏发挥抗凋亡作用[3]。Bcl-xl通过干扰Caspase-3的活性阻止凋亡，也可以通过维持线粒体膜电位和控制活性氧(ROS)的毒性发挥其抗凋亡的作用[4]。大电导钾通道(BK-channel)被认为是可以起到保护神经元免受缺血再灌注损伤的作用[5]。本研究结果显示，电针组BK-channel的宽度明显窄于针刺组，提示电针组存在BK-channel的功能改善，电针可能通过加强了BK-channel的功能而达到了神经保护的作用。

文献提示电针百会穴可抑制神经细胞凋亡，减轻脑缺血再灌注损伤，为本实验提供了用穴依据[6-7]。在本实验中，电针百会穴可上调Bcl-xl蛋白表达，并出现电针小鼠梗塞体积的减小及神经功能评分的改善，有可能是通过阻断Bax对线粒体外膜的破坏或通过干扰死亡诱导信号复合体的组装，抑制Caspase-8、干扰Caspase-3的活性阻止凋亡而实现的。另外，BK-channel的功能改善也在电针组得到证实，说明在离子通道水平，电针也通过改善BK-channel的功能，抑制了钙超载，保护了神经元。

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