可见光分光光度法测定头孢曲松钠*

刘荣森，张长水

（1.河南林业职业学院，河南洛阳471002；2.河南科技大学化工与制药学院，河南洛阳471003）

头孢曲松钠（Ceftriaxone Sodium）是第三代头孢菌素类抗生素，用于敏感致病菌所致的下呼吸道感染、尿路、胆道感染，以及腹腔感染、盆腔感染、皮肤软组织感染、骨和关节感染、败血症、脑膜炎等及手术期感染预防。测定头孢曲松钠的含量对药品质量的控制及指导临床用药都具有极其重要的意义。

目前，已报道的测定头孢曲松钠的方法有：可见光分光光度法[1-3]、紫外分光光度法[4]、流动注射化学发光分析法[5，6]、毛细管区带电泳法[7]、共振锐利散射光谱法[8]、高效液相色谱法[9]等。但基于生成普鲁士蓝来测定头孢曲松钠的方法还未见报道。

研究表明：在一定温度下，Fe3+能被头孢曲松钠还原为Fe2+，Fe2+与铁氰化钾生成可溶性普鲁士蓝，通过测定普鲁士蓝的吸光度间接测定头孢曲松钠的含量。本法和其他分光光度法相比，由于使用无毒、价格便宜的铁氰化钾进行显色，使测试成本低廉；采用FeCl3在一定条件下直接氧化头孢曲松钠，由于分析步骤少，使分析误差较低；使用可见光分光光度法进行分析，具有测试仪器简单、操作容易等优点；本法还具有灵敏度高，线性范围较宽等特点。用于市售头孢曲松钠针剂中头孢曲松钠含量的测定，结果令人满意。可用于基层医药检验部门对头孢曲松钠的检测。

1 实验部分

1.1 材料、仪器与试剂

注射用头孢曲松钠粉针剂（市售）。

TU-1900 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电热水浴锅（郑州科工贸公司）；电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；pH-3C 型精密酸度计（上海大普仪器有限公司）。

头孢曲松钠对照品（大连美仑生物技术有限公司），用二次水配成100μg·mL-1的标准溶液，4℃冷藏避光保存；FeCl3（A.R.）:加入适量HCl，用二次水配制成1.500×10-2mol·L-1的溶液；铁氰化钾（AR）:用二次水配置成1.500×10-2mol·L-1的溶液。

1.2 实验方法

在12.50mL 比色管中，加入2.00mL 1.500×10-2mol·L-1FeCl3溶液，一定量的头孢曲松钠标准溶液或待测溶液，在100℃水浴中加热30min。冷却至室温，加入0.80mL 1.500×10-2mol·L-1铁氰化钾，加水至刻度，室温放置20min。以试剂空白为参比，在733nm 处测定溶液的吸光度。

2 结果和讨论

2.1 最大吸收波长

按照1.2 实验方法配制试剂空白溶液（不加入头孢曲松钠）。以蒸馏水为参比溶液，扫描了试剂空白在500～900nm 范围内的吸收光谱（图1 曲线b）；以试剂空白为参比，扫描了头孢曲松钠与FeCl3在100℃水浴中加热30min 后与铁氰化钾反应生成普鲁士蓝的吸收光谱（图1 曲线a），最大吸收波长为733nm，而试剂空白在733nm 处吸收很小。故本试验以试剂空白为参比，在733nm 处测定生成的普鲁士蓝的吸光度。

图1 吸收光谱Fig.1 Absorption spectrum

2.2 FeCl3 氧化头孢曲松钠反应的温度和时间对吸光度的影响

考察了反应温度和反应时间对FeCl3氧化头孢曲松钠的影响。固定反应时间为30min，测定了FeCl3氧化头孢曲松钠反应温度分别为为25、30、50、70、90、100℃的吸光度。随着反应温度逐渐升高，溶液吸光度随着增大，温度达到100℃时，溶液的吸光度达到最大。故选择头孢曲松钠与FeCl3反应温度为100℃。

固定反应温度为100℃，考察了FeCl3氧化头孢曲松钠的反应时间对吸光度的影响，在5～80min 时间范围内，每隔5min 测定一次吸光度。当反应时间到30min 时，溶液的吸光度最大。故选择头孢曲松钠与FeCl3反应时间为30min。

2.3 FeCl3 用量对吸光度的影响

FeCl3作为氧化剂，需把头孢曲松钠氧化完全，实验表明，当FeCl3用量达到1.80mL 时，溶液吸光度最大，若FeCl3的用量继续增大，溶液的吸光度几乎保持不变。为保证头孢曲松钠完全被氧化，FeCl3需稍过量，使故本实验选择加入2.00mLFeCl3（1.500×10-2mol·L-1）。

2.4 铁氰化钾用量的选择

固定FeCl3用量为2.00mL，考察了铁氰化钾用量对吸光度的影响，随着铁氰化钾用量的增大，吸光度也增大，当铁氰化钾用量达到0.80mL 时达到最大，再增加铁氰化钾用量，溶液吸光度几乎不变，说明当铁氰化钾用量为0.80mL 时已与还原生成的Fe2+反应完全。本实验选择加入0.80mL 铁氰化钾（1.500×10-2mol·L-1）。

2.5 显色时间的影响

FeCl3与头孢曲松钠反应后，冷却至室温，加入0.80mL 的铁氰化钾溶液，在室温下放置显色，随着放置时间的延长，溶液的吸光度增大，当显色时间到20min 时，吸光度达到最大。20min 到60min，溶液的吸光度基本不变，说明显色反应已完成。故显色时间选择室温下放置20min。

2.6 溶液中过量的Fe3+对吸光度的影响

考察了过量的Fe3+对吸光度的影响。按照试验方法，分别加入2.00mL 1.500×10-2mol·L-1FeCl3溶液，但不加入头孢曲松钠，在100℃水浴中加热30min。冷却至室温，加入0.80mL 1.500×10-2mol·L-1铁氰化钾，加水至刻度，以蒸馏水为参比，每隔5min 测定其在733nm 处的吸光度，从5 到60min 吸光度都很小且基本不变。故选择试剂空白为参比，过量的Fe3+不影响本试验的测定结果。

2.7 工作曲线

配制头孢曲松钠含量分别0.1、0.3、0.6、1.0、1.5、2.0、2.6、3.2、4.0、4.8、5.6、6.4、7.2μg·mL-1的标准溶液，按照1.2 的实验方法测定吸光度，并绘制标准曲线。头孢曲松钠含量在0.11～7.20 μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系，线性回归方程A=0.2717ρ（μg·mL-1）+0.0325，相关系数R=0.9992，表观摩尔系数ε=1.8×105L·（mol·cm）-1。选择头孢曲松钠含量为1.00μg·mL-1的标准溶液，进行11 次重复测定，相对标准偏差为1.32 %。检测限（3σ/k）为0.014μg·mL-1。

2.8 样品测定

用市售头孢曲松钠粉针剂进行含量的测定。准确称取适量的头孢曲松钠针剂（相当于头孢曲松钠0.1000g），加水溶解，转移至100mL 容量瓶中，稀释至刻度。按照最优实验条件进行测定，结果见表1。产品平均加标回收率为100.5%，结果令人满意。

表1 样品的测定及回收率的试验（n=6）Tab.1 Determination results of samples and recovery（n=6）

3 结论

本研究利用生成普鲁士蓝的反应间接测定头孢曲松钠的含量，选择了最佳实验条件。结果表明：头孢曲松钠含量在0.11～7.20μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系,平均回收率达到100.5%。能用于市售头孢曲松钠粉针剂含量的测定。

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