苦豆子总碱涂膜剂安全性试验研究

冷晓红，王志强

(1.宁夏职业技术学院，银川 750021；2.扬州大学兽医学院,江苏扬州 225008)



苦豆子总碱涂膜剂安全性试验研究

冷晓红1，王志强2

(1.宁夏职业技术学院，银川 750021；2.扬州大学兽医学院,江苏扬州 225008)

为研究苦豆子总碱涂膜剂在预防和治疗奶牛乳房炎方面的安全性，选用皮肤完好的健康家兔，观察家兔对苦豆子总碱涂膜剂皮肤刺激反应症状，并根据皮肤刺激反应的评分标准进行评分;选用皮肤完好的健康豚鼠进行试验，观察豚鼠对苦豆子总碱皮肤变态反应症状，根据皮肤刺激反应的评分标准进行评分。结果表明：苦豆子总碱涂膜剂皮肤刺激反应积分均值最大值为1.33，属于轻刺激性。根据皮肤变态反应的评分标准，计算所得受试物试验组去除激发受试物后24 h和48 h时的致敏率分别为25%和8.3%，属于轻度致敏强度。试验结果提示，苦豆子总碱涂膜剂临床用药安全，此结论为苦豆子总碱用于奶牛乳房炎的预防与治疗提供了依据。

苦豆子总碱涂膜剂；皮肤刺激性试验；皮肤变态反应试验

奶牛乳房炎是奶牛业一种常见多发病[1]。我国临床型乳房炎奶牛发病率为33.41%，隐性乳腺炎奶牛的阳性检出率为73.91%。资料显示，在我国因临床型奶牛乳房炎淘汰的奶牛占总淘汰牛的9%～11%，在经济上造成了一定的损失[2]。长期以来,对奶牛乳房炎的治疗主要采用抗生素和化学合成药物的乳房灌注疗法,随着奶牛乳房炎病原菌的耐药性逐渐增加，中药预防和治疗已成为发展趋势[3]。研究表明[4-5]，苦豆子总碱具有清热解毒、抗菌消炎、提高免疫力的功效，对引起奶牛乳房炎的三种病原菌金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大肠杆菌均有较强的抑菌活性。本研究通过对以苦豆子总碱为原料制备的涂膜剂进行家兔的皮肤刺激试验和豚鼠的皮肤变态反应试验研究，以期为苦豆子总碱涂膜剂在预防和治疗奶牛乳房炎方面的新药开发提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 3只皮肤完好的健康家兔，体重1.8～2.0 kg，购自扬州大学医学中心。动物生产许可证号：SCXK(苏)2012-0004，使用许可证号：SYXK(苏)2012-0029。自由采食和饮水，饲料和饮水均符合动物饲养标准。试验前在实验动物房环境中适应性饲养1 周，不限制饮水；皮肤完好的健康豚鼠36只，体重0.30～0.35 kg，购自南京市浦口区莱芙养殖场。动物生产许可证号：SCXK(苏)2014-0004，使用许可证号：SYXK(苏)2012-0029。自由采食和饮水，饲料和饮水均符合动物饲养标准。试验前在实验动物房环境中适应性饲养1周，不限制饮水。

1.2 受试药物 苦豆子总碱涂膜剂，(批号：20140502，宁夏职业技术学院制备)，该药以苦豆子总碱为主药，以聚乙烯醇等为成膜材料，并加入透皮吸收促进剂，经制剂技术制成。临用前生理盐水配制成所需浓度溶液。脱毛剂：净白温和脱毛膏，100 g/管，广州艾奇化妆品有限公司。阳性对照物：2，4-二硝基氯苯，Sigma公司生产。临用前以95%的乙醇于45～50 ℃热水中搅拌溶解，配制的诱导浓度为5 mg/mL和激发浓度为2.5 mg/mL的溶液。其他试剂：氯化钠，分析纯。

1.3 方法

1.3.1 家兔皮肤刺激性试验 参照文献[6]，在试验前24 h，用脱毛剂将家兔背部脊柱两侧的毛去掉，去毛范围，左、右各约3 cm×3 cm。次日将受试物原液0.5 mL直接滴于面积为2.5 cm×2.5 cm 的一侧去毛完整皮肤上，然后用一层无刺激塑料膜覆盖，再用无刺激胶布固定。另一侧去毛皮肤作为空白对照。敷贴时间为 4 h。试验结束后，用温水或无刺激性溶剂除去残留受试物。分别于去除受试物后1、24、48 h观察皮肤局部反应。结果评价：在各个观察时间点，按照表1对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并分别按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)。取其中最高皮肤刺激指数，按表2 评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。

表1 皮肤刺激反应的评分标准

表2 皮肤刺激强度分级表

1.3.2 豚鼠皮肤变态反应试验 参照文献[7]，将豚鼠随机分为阳性对照组、试验组、阴性对照组，每组12只，雌雄各半。

对试验组豚鼠，给予受试物诱导和激发处理。阳性对照组给予阳性致敏物2，4-二硝基氯苯诱导和激发处理。阴性对照组仅给以受试物激发处理。

诱导：于试验前24 h将豚鼠背部左侧3 cm×3 cm范围内去毛。将诱导浓度的消毒剂(受试物原液)0.5 mL，直接涂在 2 cm×2 cm左侧去毛皮肤上。用一层无刺激塑料膜覆盖，再以无刺激胶布固定，持续 6 h。第 7、 14天以同样方法重复一次。

激发：在末次诱导后14 d，将激发浓度的消毒剂溶液(受试物原液)0.5 mL直接涂在2 cm×2 cm右侧脱毛皮肤上，然后用一层塑料膜和无刺激胶布固定，6 h后将敷贴的受试物洗去。24 h和48 h后观察皮肤反应，按表3对皮肤反应评分。

选用的阳性对照物为2，4-二硝基氯代苯。阳性对照组的操作程序同试验组，以阳性致敏物替代受试物。

每次试验设置阴性对照组，仅对动物给予受试物的激发接触。

结果评价：药物引起的过敏性接触性皮炎，属迟发型变态反应。对于动物，仅见皮肤红斑和水肿。根据表3标准，将出现皮肤反应(评分≥1)的动物数除以该组实验动物数，求得致敏率(%)，按表4评定致敏强度。

表3 皮肤反应的评分标准表

表4 致敏强度分级标准表

注：致敏率为0时，可判为未见皮肤变态反应

2 结果与分析

2.1 家兔皮肤刺激性试验 受试药物对家兔皮肤刺激反应的评分结果见表5。从表中可以看出，该受试药物皮肤刺激反应积分均值最大值为1.33，由表2可知苦豆子总碱涂膜剂属于轻刺激性产品。

表5 家兔皮肤刺激反应评分结果表

2.2 对豚鼠皮肤变态反应试验结果 受试药物对豚鼠皮肤变态反应试验的评分结果见表6。从表中可以看出，试验组在激发处理24 h和48 h后的致敏率分别为25%和8.3%，对照表5可知该受试物致敏等级为轻度。

3 讨论与小结

3.1 奶牛乳房炎是危害奶牛的一种多发病，常规的治疗主要采用抗生素[8]，当前应用的奶牛乳头消毒剂主要为碘类消毒剂[9]，碘伏技术如果处置不当，碘就会残留在奶牛的乳腺中，导致奶制品碘超标。苦豆子总碱是从天然药用植物苦豆子中提取的生物碱，具有清热解毒，祛风燥湿，消炎止痛的功能，对引起奶牛乳房炎的多种病原菌有较好的抑制作用，对奶牛乳房炎症有抗炎作用，同时还具有增强机体免疫的功能。3.2 涂膜剂是近年来发展起来的一种新型剂型，具有以下优势：在涂布或者沾取时可以起到消毒抑菌的作用；涂布后约5 min左右即可在奶牛乳头形成一层保护膜，起到阻隔致病菌在乳头导管孔扩张时进入的作用，同时延长消毒作用时间；形成的保护膜在气温较低时可以防止奶牛乳头的冻伤；形成的药膜中的药物透过奶牛乳头皮肤可以进入奶牛乳房组织起到一定的治疗作用；使用方便，兽医在奶牛挤奶后用棉签涂布或使用药浴杯浸湿奶牛乳头即可；制备工艺简单，成本较低。以苦豆子总碱为原料开发苦豆子总碱涂膜剂用于奶牛乳房炎的预防和治疗，既保留了碘消毒液瞬间杀菌的特点，又克服了碘容易挥发的缺陷，同时还可避免牛奶中抗生素残留。

表6 受试药物对豚鼠皮肤变态反应试验评分结果表

3.3 依据中兽药注册管理办法，需进行包括皮肤刺激性及皮肤变态反应等安全性试验研究，以确定该药的使用安全。试验结果表明，苦豆子总碱涂膜剂对家兔皮肤刺激反应积分均值最大值为1.33，属于轻刺激性产品。对豚鼠皮肤变态反应试验在激发处理24 h和48 h后的致敏率分别为25%和8.3%，致敏等级为轻度。同时苦豆子总碱急性毒性试验研究表明[10]，苦豆子总碱的毒性较低，提示苦豆子总碱涂膜剂临床用药安全可靠。本实验的研究结果为苦豆子总碱涂膜剂新制剂开发提供了依据。

[1] 邓海平,蒲万霞,俞诗源,等.奶牛乳房炎主要病原菌及其分离鉴定方法研究进展[J].中国畜牧兽医,2007,34(3):32-34.

[2] 刘萍,郝满良,叶宝娜,等.奶牛乳腺炎的病因及其综合防治措施[J].中国畜牧兽医,2007,34(3):32-34.

[3] 冷晓红,王志强,李军.苦豆子生物碱对奶牛乳房炎致病菌体外抗菌活性的研究[J].中国兽药杂志,2013,47(9): 31-33.

[4] 李成应,李培锋,李晓楠.奶牛乳房炎的病因及其防治[J].畜牧与饲料科学,2005,(3):52-55.

[5] 李新芳,盂富敏,刘文江,等.苦豆子总碱注射液的药理研究[J].兰州医学院学报,1985,(2):1-5.

[6] 国家食品药品监督管理局,中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则[S].

[7] 国家食品药品监督管理局,药物刺激性过敏性和溶血性研究技术指导原则[S].

[8] 蒋春茂,周新民,周广生,等.奶牛乳房炎研究进展[J].中国畜牧兽医,2004.31(5):36-38.

[9] 杨晓芳,王伟忠,康涌涛,等.奶牛乳房炎的发病调查、检测及防治对策[J].中国畜牧兽医,2008,35(6)：70-71.

[10]陈申,刘宇,强哲,等.苦豆子总碱对小鼠急性毒性试验研究[J].中兽医医药杂志,2013,(2):12-13.

(编 辑：侯向辉)

Study on Safety of Total Alkaloid of Sophora Alopecuroides Temperature

LENG Xiao-hong1, WANG Zhi-qiang2

(1.NingxiaVocationalandTechnicalCollege,Yinchuan750021,China;2.YangzhouUniversityCollegeofVeterinaryMedicine，Jiangsu，Yangzhou225009，China)

For study the security of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature in prevention and treatment of dairy cow mastitis,the experiment choose health rabbit of skin in good condition,and observe irritation reaction symptoms of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature on rabbit skin according to the criteria for skin irritation reaction score; choose health guinea pig of skin in good condition, Observing of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature on guinea pig skin allergy symptoms according to the criteria for skin irritation reaction score. The results showed that maximum average score of skin irritation reaction was 1.33, belonging to light stimulus; sensitization rate of 24 h and 48 h was 25% and 8.3%, belonging to the light intensity of sensitization. The test results indicated that clinical medicine of the temperature was secure,and provided a basis for the prevention and treatment on cow mastitis.

total alkaloid of sophora alopecuroides temperature;skin irritation test; skin allergy test

宁夏科技支撑计划项目(宁科技字〔2013〕20号)

冷晓红，从事药用植物的教学与科研工作。E-mail:lxh-zss@163.com

2015-06-22

A

1002-1280 (2015) 08-0020-04

S859.79