蛋鸡场血清抗体与卵黄抗体的检测比较实验

杨 杰

（安徽省界首市动物疫病预防与控制中心,安徽界首 236500）

蛋鸡场血清抗体与卵黄抗体的检测比较实验

杨 杰

（安徽省界首市动物疫病预防与控制中心,安徽界首 236500）

随着蛋鸡场规模的逐步扩大，万只以上的规模户随处可见，养殖理念逐步提升，对防疫环节重视程度提高，逐步追求精准的防疫时机，在免疫之前，了解抗体水平十分重要。在生产实践中，血清检测抗体操作烦琐，且给蛋鸡生产带来一定的影响。理论上讲，鸡蛋中卵黄抗体在鸡排卵前与血清抗体是一致的，但卵黄排入输卵管后，与母体不再有联系，所以，卵黄抗体与排卵前血清中的抗体是一致的，也就是与鸡蛋产出前一天血清抗体一致。对于产蛋鸡来说，使用卵黄测抗体的方法对鸡不产生应激，操作简单，节省人力。操作方法得当，与血清抗体的误差范围大致相当。在生产实践中具有简单、易行的效果，可以大力推广。但在使用卵黄测抗体的时候，细节上应多加注意。界首市兽医实验室针对血凝与血凝抑制实验检测血清与卵黄抗体效价进行了对比试验，现总结如下。

1 样品的采集

在界首市蛋鸡养殖户中任意选取存栏均在10 000只以上规模蛋鸡场3个，随机采集10份血样，同时采集10枚相对应的鸡蛋，血样带回离心分离血清装入离心管4℃冰箱备用。

2 实验材料

禽流感H5（RE-6）抗原 哈尔滨维科生物技术开发公司 2ml批号：2014006 有效期 24个月

禽流感H5（RE-6）阳性血清：哈尔滨维科生物技术开发公司，2 ml，批号：2014004。有效期 24个月。

禽流感H9抗原：哈尔滨维科生物技术开发公司，2 ml，批号：2013002，有效期 24个月。

禽流感H9阳性血清：哈尔滨维科生物技术开发公司，2 ml，批号：2013002，有效期 24个月。

新城疫抗原：青岛异邦生物工程有限公司，2 ml，批号：20150201。有效期 24个月。

新城疫阳性血清：青岛异邦生物工程有限公司，2 ml，批号：20150202。有效期 24个月。

3 试验方法

3.1 1%鸡红细胞悬浮液的制备

采集至少3只未免疫健康公鸡的血液，用0.9%生理盐水洗涤3～5次，每次均以1 000 r/min离心10 min，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞层，将沉淀的红细胞加0.9%生理盐水洗涤反复洗涤3～5次，将最后一次离心后的红细胞泥，用0.9%生理盐水配成体积分数为1%红细胞悬液，4℃冰箱保存备用。

3.2 血清抗体检测

抗原效价与4个血凝单位抗原的配制：抗原不可反复冻融，因为抗原反复冻融容易造成抗原效价降低，所以每次配制4倍抗原之前必须检测抗原效价，根据效价才能准确配制4倍抗原；4个血凝单位抗原要现用现配，混悬液要混匀，配好的抗原在室温下放置不得超过4 h。

判断结果时应注意：将反应板倾斜，在观察红细胞有无呈泪珠状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位。

3.3 卵黄抗体检测

对卵黄进行3种浓度对比，卵黄原液直接抽取、卵黄与生理盐水1：1稀释、卵黄与生理盐水1：4稀释3个梯度分别进行禽流感H5亚型、禽流感H9亚型、新城疫抗体效价测定。

3.4 结果

共对采集30个样品进行了检测，结果详见表1～表4。

表1 血清抗体效价

表2 卵黄原液直接抽取抗体效价

表3 卵黄与生理盐水1：1稀释抗体效价

表4 卵黄与生理盐水1：4稀释抗体效价

从表1～表4可以得出以下结论：（1）血清禽流感H5（RE-6）抗体均值8.50，禽流感H9抗体均值8.37，新城疫抗体均值8.63；卵黄原液直接抽取禽流感H5（RE-6）抗体均值8.37，禽流感H9抗体均值8.37，新城疫抗体均值8.60；卵黄与生理盐水1：1稀释禽流感H5（RE-6）抗体均值8.36，禽流感H9抗体均值8.33，新城疫抗体均值8.6；卵黄与生理盐水1：4稀释禽流感H5（RE-6）抗体均值7.67，禽流感H9抗体均值7.50，新城疫抗体均值7.40。（2）卵黄原液直接抽取和卵黄与生理盐水进行1：1稀释两组检测结果与血清检测结果最为一致，但是卵黄原液直接抽取，在对样品进行稀释时操作起来较为难以把握，稍有不留心稀释容易造成不均匀，且在抽取卵黄原液时量的把握易出现量不足的问题。故卵黄与生理盐水1：1稀释的浓度在现实工作中具有操作简单、易行的效果，经济适用，值得大力推广。

4 体会

（1）试验环境温度与反应时间：实验环境温度与实验结果出现时间的长短有密切的关系，一般在环境温度应尽量控制在20℃～25℃经过20～30min即可读出抗原效价和卵黄抗体滴度。当温度过低，如低于15℃时，出现结果就要慢，往往需要超过40min才能出现清晰的结果。因此，为了在较短的时间内出现结果，应将试验中的环境温度控制在20℃～25℃。

（2）病毒悬液和红细胞悬液在使用前必须摇匀，如没有摇匀，加入时浓度高低不一，会人为造成误差。因此抗原和红细胞使用前一定要摇匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。

（3）卵黄的稀释，应反复多次稀释，极尽均匀，以免影响实验结果。

总之，在实验室实际操作血凝与血凝抑制试验中受很多因素的影响，因此在实验操作中必须认真细致做好每一个环节，综合分析确保检测的准确性，以便为蛋鸡养殖户（场）制定合理的免疫程序提供一份可靠的保障。