黄芪多糖对幼犬淋巴细胞转化的影响及其抗氧化作用初探

卢 炜顾蓓蓓赵莎莎

（1.江苏农牧科技职业学院,江苏泰州 225300; 2.泰州市出入境检验检疫局,江苏泰州 225300）

黄芪多糖对幼犬淋巴细胞转化的影响及其抗氧化作用初探

卢 炜1顾蓓蓓2赵莎莎1

（1.江苏农牧科技职业学院,江苏泰州 225300; 2.泰州市出入境检验检疫局,江苏泰州 225300）

目的：研究注射不同剂量黄芪多糖对幼犬淋巴细胞转化的影响及其抗氧化作用。方法：24只4月龄中华田园犬随机分为四组：正常对照组（生理盐水）、低剂量组（黄芪多糖注射液0.1 mg·kg-1）、中剂量组（黄芪多糖注射液0.5 mg·kg-1）和高剂量组（黄芪多糖注射液1 mg·kg-1）。检测黄芪多糖对幼犬的淋巴细胞转化、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、丙二醛（MDA）含量的影响。结果：黄芪多糖显著促进幼犬淋巴细胞转化，提高血清T-SOD活力，降低血清MDA含量。结论：黄芪多糖可显著提高幼犬免疫力和抗氧化功能。

黄芪多糖 幼犬 淋巴细胞 抗氧化作用

黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，具有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用，是临床上扶正固本的常用中药之一[1]。黄芪含有多糖、皂苷类、黄酮类和氨基酸等多种生物活性物质。其中，黄芪多糖（astragalus polysaccharide，APS）含量最高，为黄芪多糖的主要药用活性成分，具有较强的免疫活性，并具有毒副作用小、不易产生耐药性、无残留等特点[1，2]。为了进一步研究黄芪多糖对犬的免疫调节作用，本试验研究了黄芪多糖对幼犬的淋巴细胞转化的影响及其抗氧化作用。

1 材料与方法

1.1 试验设计

选取4月龄健康中华田园犬24只，体重3.5～4.5kg，单舍饲养，按常规防疫程序进行防疫和犬舍消毒。试验开始后，随机分为四组：正常对照组（生理盐水）、低剂量组（黄芪多糖注射液0.1 mg·kg-1）、中剂量组（黄芪多糖注射液0.5 mg·kg-1）和高剂量组（黄芪多糖注射液1 mg·kg-1）。各组犬只按常规管理、饲喂。

1.2 试验试剂

黄芪多糖注射液（方正芪抗，吉林省方正动物药业科技有限责任公司）；RPMI-1640培养液（GIBCO）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；植物血凝素（上海依华科技公司）；总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、丙二醛（MDA）（南京建成生物技术研究所）。

1.3 样品采集

于试验第0、1、5、10d进行静脉采血，每只犬分别采集肝素钠抗凝血与非抗凝血各一份。抗凝血用于T淋巴细胞转化率测定，非抗凝血于4 000 r·min-1离心30 min分离血清后，用于血清T-SOD、MDA检测。

1.4 淋巴细胞转化率测定

将采集的抗凝血加入有PHA与RPMI-1640培养液的试管中，混匀后置于5% CO2培养箱37℃培养72 h。72 h后弃除上清，加入37℃预热的0.87% NH4Cl溶液3 mL，继续孵育15 min。加入生理盐水混合，于1000 r·min-1离心10 min。弃除上清，取沉淀进行推片，瑞士染色。

淋巴细胞转化率=（过渡型淋巴细胞+淋巴母细胞）/ 淋巴细胞总数×100%

1.5 血清T-SOD、MDA检测

血清T-SOD、MDA检测采用南京建成生物技术研究所试剂盒。操作步骤按试剂盒说明书进行。

1.6 数据处理

结果以平均数 ± 标准误（x± SE）表示。数据分析采用独立样本t-测验。采用SPSS 13.0方差分析程序对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 黄芪多糖对幼犬淋巴细胞转化率的影响

黄芪多糖对幼犬T淋巴细胞转化率的影响见图1。试验开始前，试验组与对照组淋巴细胞转化水平相当（p〉0.05）。注射黄芪多糖注射液后第1d，三种剂量组幼犬淋巴细胞转化率明显提高，较对照组差异显著（p〈0.05），并保持到第5d和第10d。

图1 黄芪多糖对幼犬淋巴细胞转化率的影响 %

2.2 黄芪多糖对幼犬血清T-SOD、MDA的影响

从表1中看出试验第0d，试验组和对照组幼犬血清中的T-SOD 酶活力无显著差异。在注射黄芪多糖注射液后第1d，三种剂量试验组血清T-SOD 酶活力均显著高于对照组（p〈0.05），并持续到第5d和第10d。

如表2所示，试验试验第0d，试验组和对照组幼犬血清MDA含量无显著差异。试验开始后第1d，三种剂量组幼犬血清MDA含量较对照组，均显著降低（p〈0.05），并维持到第5d和第10d。

3 讨论

研究表明[2，3]，黄芪的主要活性成分为黄芪多糖，而黄芪多糖本身并没有直接的抗菌或抗病毒作用，其作用途径主要是通过提高机体的免疫力和抗氧化水平，从而增强机体自身抵抗病菌和病毒的机能。本研究发现，注射黄芪多糖可促进幼犬淋巴细胞转化，提高血清T-SOD活力，降低血清MDA含量。

表1 黄芪多糖对幼犬血清T-SOD活力的影响 U/mL

表2 黄芪多糖对幼犬血清MDA含量的影响 nmoI/mL

黄芪多糖的免疫促进作用是通过体液免疫和细胞免疫两种途径共同实现的[4]。本研究发现黄芪多糖提高了幼犬淋巴细胞转化率，增强其细胞免疫功能。此结果与黄芪多糖在其他动物研究结果一致[5，6]。此外，黄芪多糖还可通过免疫球蛋白或补体成分而发挥作用的，一方面促使细胞的耗氧量增加，使SOD大量合成；另一方面免疫活性细胞代谢旺盛，SOD合成加快[7]。炎症反应产生的自由基可与细胞膜、蛋白质、核酸和酶等产生反应，造成细胞损伤，甚至引起细胞死亡。自由基作用于脂质可氧化产生醛，丙二醛蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性[8]。SOD是动物体内最主要的抗氧化酶，它能够清除自由基，防止对机体直接或间接的损伤作用[9]。本研究发现黄芪多糖提高幼犬血清T-SOD活力，降低MDA含量，说明黄芪多糖对自由基诱导的细胞损伤具有保护作用。

综上所述，本研究发现注射黄芪多糖可促进幼犬淋巴细胞转化，提高机体免疫力；提高血清T-SOD活力，降低血清MDA含量，从而对自由基诱导的细胞损伤具有保护作用。

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卢炜（1981-），男，讲师，硕士，主要从事动物营养生理研究。

江苏高校品牌专业建设工程资助项目，项目编号：PPZY2015C230