光泽黑兔生长性能与微卫星标记关系的研究

刘庆华 郑秦文 王建烽

（福建农林大学动物科学学院,福建福州 350002）

光泽黑兔生长性能与微卫星标记关系的研究

刘庆华 郑秦文 王建烽

（福建农林大学动物科学学院,福建福州 350002）

选用5对微卫星标记引物，分别对光泽黑兔6个品系的基因组DNA进行检测。利用最小二乘分析方法标记基因型与体重、体尺这两个生长性能间的关系。结果表明：座位So133 213bp等位基因对成年兔体重有负面效应；微卫星座位So103中240bp等位基因对成年兔体重有较强的负面效应；座位So144 217bp、座位So133 213bp，以及座位So103 236bp等3个等位基因对体长性状有正面效应；座位So133 213bp、座位So103 244bp等2个位基因对胸围性状有正面效应；座位So144 203bp等位基因对胸围性状有负面效应。

光泽黑兔 微卫星DNA 生长性能

光泽黑兔属于闽西南黑兔的一个地方类群[1]。本研究以微卫星DNA作为遗传标记，从分子水平上研究光泽黑兔的生长性能与遗传标记之间的关系，旨在为开展遗传标记辅助选择、数量性状基因定位、光泽黑兔进一步选育等工作提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验兔的选择

实地随机采集光泽黑兔6个品系共计195只黑兔耳组织样本。采集之前，逐只测定成年兔的体重、体长和胸围。

1.2 引物的合成

引物由厦门泰京生物技术有限公司合成。

表1 5对微卫星引物序列

1.3 标记基因型检测

基因组DNA提取采用常规的酚、氯仿抽提方法[2]。PCR反应体系为25μL：2.5μL 10×bufer、2.5μL Mg2＋、0.5μL dNTPs、引物各0.5μL、0.5μL TaqDNA聚合酶、2μL DNA模板（50mg.μL-1）、16μL ddH2O。PCR反应条件为：94℃预变性4 min→94℃变性30 sec→55℃或其他温度退火30 sec→72℃延伸35 sec，33 cycles→72℃再延伸10 min→4℃保存。

采用12%的非变性胶聚丙烯酰胺凝胶电泳分离微卫星等位基因，银染后，利用POPGENE计算各微卫星座位的等位基因大小。

1.4 统计分析方法

根据每一个体的标记基因型及表型资料，采用最小二乘法进行分子标记与各性状相关分析，确定与性状显著性相关的标记，再对不同基因型间的体重、体尺性能进行多重比较。

2 结果与分析

2.1 微卫星座位与体重体尺性状的方差分析

根据5个微卫星位点的电泳结果结合个体的体重体尺记录，在实际的统计分析中，由于一些位点中某些基因型的出现频率太低，缺少分析价值，因此按每种基因型至少出现3次观察值进行多重比较[3]。采用SAS（9.1）软件包的GLM程序以基因型为固定效应，对体重体尺性状数据进行方差分析和显著性检验，以判定微卫星DNA标记与性状相关性，结果见表2。

表2 光泽黑兔5种微卫星座位GLM方差分析结果（F值）

2.2 与体重性状显著相关的标记座位的多重比较

表3 黑兔微卫星座位SoI33不同基因型的体重比较

微卫星座位So133基因型FF成年兔体重最小二乘均值最高，其次是基因型CC型，FF、CC基因型个体的成年兔体重最小二乘均值极显著大于EE基因型个体（P＜0.01）。

表4 光泽黑兔微卫星座位SoI03不同基因型的体重比较

微卫星座位Sol03中CD和DD基因型个体的成年兔体重最小二乘均值显著高于其他基因型个体（P＜0.05），CC基因型个体的成年兔体重最小二乘均值最小。

2.3 与体尺性状显著相关的标记座位的多重比较

表5 光泽黑兔微卫星座位SoI44不同基因型的体尺比较

微卫星座位Sol44中FF基因型显著高于其他基因型个体；在胸围性状中，BB基因型个体的最小二乘均值显著低于其他基因型个体，BG基因型个体的最小二乘均值最高。大于CE、DF、EE、EF基因型个体（P＜0.05），极显著大于DE基因型个体（P＜0.01）；DD、CC、BE与其他基因型差异都不显著。其对应的胸围最小二乘均值显著大于AA、AE、BB、BF基因型个体（P＜0.05），极显著大于BE、CC、CE基因型个体（P＜0.01）。

表8 光泽黑兔微卫星座位SoI03不同基因型的体尺比较

微卫星座位Sol03中AA基因型个体的体长最小二乘均值显著大于其他基因型个体（P＜0.05）；极显著大于AC（P＜0.01）。EE基因型个体的胸围最小二乘均值显著大于AC、BB、CC、CD基因型个体（P＜0.05），与AA、DD基因型个体差异不显著（P＞0.05）。

3 小结与讨论

表6 光泽黑兔微卫星座位SoI33不同基因型的体尺比较

微卫星座位Sol33中EE基因型个体的体长最小二乘均值极显著大于BB、CC、FF基因型个体（P＜0.01），显著大于AA、DD基因型个体（P＜0.05），AA、DD、FF基因型之间差异不显著。EE基因型胸围最小二乘均值极显著大于CC基因型个体（P＜0.01），显著大于AA、BB、DD、FF基因型个体（P＜0.05）。

表7 光泽黑兔微卫星座位SoI30不同基因型的体尺比较

微卫星座位Sol30中BF基因型个体的体长最小二乘均值显著

本试验中，共检测4个微卫星标记对所研究的两个生长性能存在不同程度的相关。座位Sol33 213bp等位基因对成年兔体重有负面效应；微卫星座位Sol03中240bp等位基因对成年兔体重有较强的负面效应；座位Sol44 217bp、座位Sol33 213bp，以及座位Sol03 236bp等3个等位基因对体长性状有正面效应；座位Sol33 213bp、座位Sol03 244bp等2个位基因对胸围性状有正面效应；座位Sol44 203bp等位基因对胸围性状有负面效应。

高度相关的性状有着相同的分子基础（一因多效）或者是QTL连锁，部分性状可能由一个或一个以上QTL控制（多因一效），所以相关程度很高的性状存在高的遗传一致性[4、5]。本试验在一定程度上支持这一观点。如微卫星位点So103和so144对生长性能都有极显著相关。

由于本研究的样本数量较少，选择的微卫星位点与生长性能的相关性可能存在一定偏差。对于分子标记与性状相关的研究结果还有待于今后进一步的深入研究证实。

[1] 谢喜平，孙世坤，陈岩锋，等.闽西南黑兔选育研究 [J].家畜生态学报，2013，34（10）：26-28.

[2] J 萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔.分子克隆试验指南（第三版）[M].北京：科学出版社，2002：467-470.

[3] 金海国.微卫星DNA与延边黄牛肉用生长性状关系[J].中国兽医学报，2004，24（3）：285-288.

[4] 谢喜平，陈冬金，陈岩锋，等.闽西南黑兔遗传多样性的微卫星标记分析[J].家畜生态学报，2012，33（1）：37-41.

[5] 吴信生，刘中慧，赵辉玲，等.皖系长毛兔微卫星标记多态性及其与产毛量相关的研究[J].草食家畜，2006，（4）：17-21.

福建省教育厅科技项目资助（项目编号JA13097）