环氧合酶-2及表皮生长因子在结直肠肿瘤中的表达及意义

王志强　黄述斌　李松梅　徐　亮　方　伟

作者单位： 247000　安徽省池州市人民医院病理科



环氧合酶-2及表皮生长因子在结直肠肿瘤中的表达及意义

王志强黄述斌李松梅徐亮方伟

作者单位： 247000安徽省池州市人民医院病理科

[摘要]目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、表皮生长因子(EGFR)在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法选取结直肠癌54例，以病灶组织为观察组，癌旁正常组织为对照组，采用免疫组织化学Envision方法检测COX-2、EGFR的表达。结果癌旁正常组织、癌组织中COX-2的阳性表达率分别为48%、76%；EGFR的阳性表达率分别为26%、63%。EGFR蛋白表达与浸润深度、淋巴结转移有相关性(P<0.05)；COX-2表达与肿瘤大小、淋巴结转移存在相关性(P<0.05)。COX-2与EGFR之间具有相关性(r=0.375,P<0.05)。结论COX-2、EGFR对结直肠癌的发生、发展有协同作用，与结直肠的浸润、转移密切相关，可作为判断结直肠癌生物学行为和预后的重要参考指标。

[关键词]环氧合酶-2；表皮生长因子；结直肠肿瘤；免疫组织化学

随着人口老龄化、饮食习惯和生活方式的改变，结直肠癌的发病率明显上升，每年新发约120万例，病死约60万例，并呈逐年增高趋势[1]。因此开展结直肠癌防治研究展极为重要。为探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在结直肠肿瘤中发生、发展的作用，本次试验采用免疫组化方法检测COX-2、EGFR在结直肠肿瘤中的表达，并探讨两者之间的关系。

1资料与方法

1.1一般资料选取我院2012年6月至2015年1月资料完整的根治性结直肠癌手术切除标本54例为研究对象，其中结肠癌23例，直肠癌31例；男性30例、女性24例；年龄43～81岁，中位年龄63岁。癌旁3 cm内正常黏膜作为对照。

1.2研究方法标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，光镜观察。免疫组化采用EliVision二步法，所用抗体及试剂盒均购自福州迈新公司。染色过程严格按照试剂盒说明书操作步骤进行，PBS代替一抗作阴性对照。

1.3结果判断根据阳性细胞数及阳性信号出现的位置综合判断。COX-2阳性染色定位于细胞浆的棕黄色颗粒，EGFR阳性染色定位于细胞浆和细胞膜的棕黄色颗粒。细胞着色强度评分：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞百分数评分：0为0分，≤25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%～100%为4分；染色强度与阳性细胞百分数之和≥3分即为免疫组化阳性[2]。

1.3统计学方法应用SPSS 13.0统计软件处理数据，计数资料用例或率表示，采用χ2检验；应用spearman等级相关分析COX-2、EGFR相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1COX-2、EGFR在结直肠癌、癌旁黏膜的表达情况COX-2、EGFR在结直肠癌、癌旁黏膜中的阳性表达分别为76%(41/54)、48%(26/54)和63%(34/54)、26%(14/54)，阳性表达见图1、2。

图1COX-2在直肠癌中的阳性表达(免疫组化染色×200)

图2EGFR在直肠癌中的阳性表达(免疫组化染色×200)

2.2COX-2、EGFR在结直肠癌不同分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移中的阳性表达情况EGFR蛋白表达与浸润深度、淋巴结转移相关(P<0.05)，而与性别、年龄、肿瘤部位、大小以及分化程度无关(P>0.05)；COX-2表达与肿瘤大小、淋巴结转移相关(P<0.05)，而与性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、分化程度无关(P>0.05)。详见表1。

2.3COX-2与EGFR的相关性spearman等级相关分析显示，COX-2蛋白表达水平与EGFR蛋白表达水平之间呈正相关关系(r=0.375,P<0.05)。详见表2。

3讨论

结直肠癌在我国发病率已占到常见肿瘤的第4位，其发生侵袭转移是患者死亡的主要原因。已知结直肠癌的浸润转移是多步骤、多因素参与的复杂过程，多种相关基因的激活是导致肿瘤细胞发生浸润转移的重要因素[3]。研究[4]表明COX-2可能在结直肠肿瘤发生发展过程中起一定作用，但与结直肠肿瘤生物学行为之间相关性研究尚未达成一致观点。

COX-2是前列腺素(PG)合成过程中的限速酶，其表达上调是肿瘤发生的重要分子基础，主要通过其产物PG刺激肿瘤细胞增殖，并产生抗凋亡产物的PG和消耗促凋亡底物花生四烯酸，从而抑制细胞凋亡[5]。同时下调T、B淋巴细胞增殖，降低自然杀伤细胞毒性，抑制白介素等细胞因子的合成，从而局部干扰免疫监视[6]。肠上皮细胞COX-2表达可增加细胞黏附于细胞外基质的能力，抑制凋亡，诱导肿瘤产生。也有推测COX-2升高使自由基活跃，增加细胞恶性转化趋势。同时COX-2促进肿瘤血管生长，为肿瘤生长和转移提供营养[7]。吴齐兵等[8]研究发现，COX-2在结肠癌中高表达增强了肿瘤的生长能力，且与肿瘤发生淋巴结转移密切相关。本次试验结果与之相符，COX-2表达对结直肠癌淋巴结转移的判断具有一定的临床意义，尤其对于早期癌病例，是否作为预测有无淋巴结转移的标志物之一值得探讨。

表1　COX-2、EGFR蛋白阳性表达率与结直肠癌生物学行为的关系[例(%)]

表2　COX-2和EGFR蛋白在结直肠癌中表达的相关性

注：r=0.375，P<0.005

EGFR是一种分布广泛的细胞因子，在多种实体肿瘤中过度表达，在肿瘤的发生发展中有重要作用，有促进肿瘤细胞增殖并抑制其凋亡、血管生成等作用[9]。EGFR与其配体结合引起自身磷酸化和激活酪氨酸激酶，启动细胞内信号传导途径，导致DNA复制增加，刺激细胞生长、增殖，影响肿瘤血管及间质生长，促进肿瘤转移和复发。异常的EGFR信号通路与肿瘤细胞的增生、迁移、间质浸润、抗凋亡、血管生成相关[10]。很多肿瘤中存在EGFR高表达或异常表达，研究发现其表达与临床病理特征及预后相关，但研究结果并不一致[11]。本次试验显示，EGFR在结直肠癌组织中阳性表达明显高于与癌旁正常组织，并随着肿瘤浸润深度和淋巴结转移，其表达水平显著增高。提示EGFR高表达与结直肠癌的浸润与转移密切相关，并为肿瘤的治疗提供提供分子靶点。

结直肠癌的发生发展涉及多种癌基因的激活，抑癌基因的失活以及由此引起的细胞生物学行为的改变。COX-2与EGFR在结直肠癌中表达的相关性鲜有报道。本次试验发现，两者在肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移中差别显著，且具有明显相关性，在一定程度上表明COX-2、EGFR对结直肠癌的发生、发展具有协同作用。

参考文献

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[8]吴齐兵,孙国平. 探讨COX-2在结肠癌中表达的临床意义及预后[J]. 安徽医学,2010,31(7):730-732.

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[10]张红雨,陈红涛,邓婉芳. 胃癌组织表皮生长因子受体和下游信号的表达及临床意义[J]. 中华实验外科杂志,2010,27(7):904-906.

[11]张帆,杨兴无,李连宏. 胃癌中EGFR的表达与临床、病理、预后及多药耐药蛋白P170、TOPOⅡ、GST-π表达的关系[J]. 临床与实验病理学杂志,2013 29(10):1060-1068.

(2015-04-08 收稿2015-8-15 修回)

Expression of cyclooxygenase-2 and epidermal growth factor receptor in colorectal cancer and its significance

WangZhiqiang,HuangShubin,LiSongmei,etal

DepartmentofPathology,People’sHospitalofChizhou,Chizhou247000,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and epidermal growth factor receptor (EGFR) in colorectal cancer and its significance. Methods54 samples of colorectal cancer were selected, and the carcinoma tissues and normal para-carcinoma tissues were defined as study and control objects, respectively. Their expression of COX-2 and EGFR were determined by immunohistochemical method of Envision. ResultsIn normal para-carcinoma tissues and carcinoma tissues, the positive rates of COX-2 expression were 48% and 76%, the positive rates of EGFR expression were 26% and 63%, respectively. The positive expression of EGFR protein was related to the depth of invasion and lymph node metastasis of colorectal cancer (P<0.05), and the COX-2 expression was related to the size of carcinoma and lymph node metastasis (P<0.05). Furthermore, there was significant correlation between expression of COX-2 and EGFR (r=0.375,P<0.05). ConclusionCOX-2 and EGFR play a synergistic role in the carcinogenesis and development of colorectal cancer, which is closely related to invasion and metastasis of carcinoma tissues, and could be used as important indicators to determine the biological behavior and prognosis of colorectal cancer.

[Key words]Cyclooxygenase-2; Epidermal Growth Factor Receptor; Colorectal Neoplasms; Immunohistochemistry

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.11.014