白芍总苷对急性期寻常性银屑病患者外周血白细胞介素12、白细胞介素35表达的影响

王小艳，陈星宇，朱玲玲，逄明杰，张洪英

（山东省青岛市市立医院，青岛 266011）

在临床中，我们应用白芍总苷胶囊（TGP，商品名帕夫林，宁波立华制药有限公司生产）治疗银屑病取得了较好的疗效，但其作用机制尚未明确。通过既往研究可以知道，TGP 可通过p38-MAPK 途径抑制血管内皮生长因子、IL-23，从而参与抑制角质形成细胞的增殖[1]。可抑制白细胞介素（IL）-18 mRNA和蛋白的表达，ERK1/2 信号途径可能介导这一抑制作用[2]。寻常型银屑病的发病与异常免疫反应相关，特别是IL-12 参与Th1 细胞在银屑病发生中的免疫反应[3]。IL-12 可诱导Th1 细胞分泌干拢素（IFN）-γ，促使Th0 细胞向Th1 细胞分化，加剧Th1/Th2失衡，还可以增加T 细胞表面皮肤淋巴细胞抗原的表达，促进其向皮肤炎症部位的定向归巢[4]。IL-35 是IL-12 家族新成员，是由EB13 和IL-12 p35 亚基组成的异源二聚体[5]。在炎症后期迅速高表达IL-35[6]。在本研究中，主要观察急性期寻常型银屑病患者服用TGP 后外周血IL-12、IL-35 的变化，并设置健康对照组，进一步探讨TGP 治疗寻常型银屑病的作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 临床资料 急性期寻常型银屑病患者26例，男12 例，女14 例，年龄22~56 岁，平均39.5 岁；病程2 周~16 年，平均8 年；所选病例按照《皮肤性病学》进行分期[7]。所有受检患者近2 个月均未接受系统治疗，未使用生物制剂、免疫抑制剂、糖皮质激素、维A 酸类制剂，均无肝、肾等其他系统性疾病，未合并其他自身免疫性疾病，非怀孕及哺乳期妇女，无非婚性接触史。给予口服白芍总苷（3 次/d，2粒/次），连服2 个月后评估效果。根据银屑病皮损面积严重程度评分标准PASI 进行皮损面积（%）和严重程度评分，结果26 例患者，PASI 积分均下降60%~90%。健康对照组25 例，均来自我院健康体检者，其性别及年龄与病例组相匹配。本研究经医院伦理委员会批准，受检者签署知情同意书。

1.1.2 主要试剂与仪器 人IL-12、IL-35 ELISA 试剂盒购自美国Stancruz 公司。酶标仪购自美国BioTek 公司。

1.2 方法

1.2.1 制备血清 无菌条件下抽取银屑病患者服药前后及健康对照者外周静脉血2 mL，室温下充分凝血，室温1 500 转/min（离心半径15 cm）10 min，分离血清，标记姓名和编号，-80 ℃冰冻保存待测。

1.2.2 IL-12、IL-35 检测 用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中IL-12、IL-35 水平，具体操作严格按照试剂盒说明书进行。将加样板置于波长450 nm 的酶标仪读取各孔吸光度，并根据标本的吸光度所对应的浓度绘制标准曲线，根据标准曲线计算样品浓度。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17．0 软件进行统计，统计数据以均数±标准差（x±s）表示，2 组间比较采用两独立样本t 检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清IL-12 表达量 急性期寻常型银屑病患者外周血IL-12 表达水平显著高于健康对照组，差异有统计学意义（t=-5.60，P=0.00），服用TGP后，表达水平下降至（130.79±10.23）pg/mL，与服药前比较，t 值=43.48，P=0.00，差异有统计学意义（P＜0．01），与健康对照组相比，t 值=-0.12，P=0.91，差异无统计学意义（P＞0．05）。见表1。

2.2 各组血清IL-35 表达量 急性期寻常型银屑病患者血清IL-35 表达与健康对照组相比，t 值=-3.155，P=0.3，差异无统计学意义（P＞0．05），分别为（24．40±3．81）pg/mL，（28．20±4．04）pg/mL。银屑病组服TGP 后，IL-35 表达水平上升至（55.76±11.62）pg/mL，与健康对照组相比，t 值=-5.21，P=0.00，差异有统计学意义（P＜0．01）。见表1。

表1 TGP 治疗急性期寻常型银屑病患者前后血清IL-12、IL-35 的表达（±s）

表1 TGP 治疗急性期寻常型银屑病患者前后血清IL-12、IL-35 的表达（±s）

注：t1（P1）为与健康对照组比较；t2（P2）为与治疗前比较。

组别 n IL-12（pg/mL） IL-35（pg/mL）健康对照组 25 131.14±9.83 28.20±4.04 TGP 治疗前 26 288.69±12.92a 24.40±3.81 t1（P1） 5.60（0.00） 3.16（0.3）TGP 治疗后 26 130.79±10.23b 55.76±11.62c t1（P1） 0.12（0.91） 5.21（0.00）t2（P2） 48.34（0.00） 10.39（0.00）

3 讨论

银屑病是一种临床常见的以红斑鳞屑为基本表现的慢性炎症性皮肤疾病，发病机制尚未阐明，但多数研究认为其可能是一种由多基因遗传背景下的T 细胞异常的免疫性疾病，异常的T 细胞功能导致继发性表皮角质形成细胞的过度增殖，Th 细胞亚群分化失衡，活化T 细胞的Th1 型细胞因子表达增强[8]。IL-12 是一种由p35 和p40 组成的异二聚体结构的细胞因子，主要由抗原递呈细胞产生，其中单核/ 巨噬细胞和B 细胞是产生IL-12 的主要细胞，有很强的免疫调节作用，能诱导NK 和T 细胞产生IFN-γ、IL-2 等细胞因子,促进初始Th0 细胞向Thl 细胞分化、增殖和成熟，抑制Th2 细胞活性，从而使炎性细胞活化，引发炎症。作为重要的免疫调节分子，IL-12 是诱导Th1 型免疫应答最主要的细胞因子之一，其最具特色的功能是调节Th1/Th 2 平衡[9]。IL-12 具有刺激或抑制免疫细胞，诱导Th0 向Th1 分化的作用，甚至可将部分分化完成的Th2 转化为Th1[10]。Torti 等[11]研究显示银屑病病变处表达高水平的IL-12，并发现IL-12 在小鼠银屑病样皮损发病机制中具有重要作用，这些均提示IL-12 在银屑病中的作用。IL-35 属于Ⅰ型细胞因子超家族成员，IL-12 家族的新成员，由p35 和EBI3 2 个亚基所组成[12]。Collison 等[13]初步证实IL-35 主要由Treg 细胞分泌，对免疫反应具有负向抑制作用，可抑制炎症反应、防止过度的自身免疫反应的发生。目前已有的研究显示，IL-35 能有效增强Treg 细胞亚群的功能，并且有效抑制Th17 细胞的增殖分化，抑制机体过度的免疫反应，阻止炎症对机体的免疫损伤的作用。

本研究结果显示，寻常型银屑病进展期患者血清中IL-12 表达水平均显著高于健康对照组，提示IL-12 与银屑病的发生发展密切相关，这与Arican、郭志丽等[14-15]的研究相符合，银屑病患者IL-12 分泌表达量显著高于正常健康人，表达量的异常增高，引起Th1/Th2 平衡紊乱，使Th1 占优势，从而引起银屑病的发生。经过TGP 治疗后，患者血清中的IL-12 表达水平下降，与治疗前差异有统计学意义。说明TGP 能很好地控制寻常型银屑病的发展。本研究结果还显示，寻常型银屑病急性期患者血清IL-35表达与健康对照组相比较，经TGP 治疗后，IL-35上升，与治疗前及健康对照组差异有统计学意义。IL-35 在炎症后期迅速高表达，与Li 等[6]研究结果相似。推测IL-35 在寻常型银屑病的发病过程中可能起了一定的抗炎作用，是一种保护性因素。对免疫反应具有负向抑制作用，可抑制炎症反应、防止过度的自身免疫反应的发生。

TGP 作用机制广泛，有抗炎、调节免疫等功能，影响细胞增殖、止痛及保肝等作用。通过本研究，我们初步探讨了TGP 可能是通过调节外周血中IL-12、IL-35 的水平而发挥其对银屑病的治疗作用的。在今后的研究中，我们会通过检测不同时期寻常型银屑病患者血清或皮损中IL-12、IL-35 的表达，来进一步明确TGP 治疗银屑病的作用机制。

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