共轭亚油酸对蛋黄脂肪酸组成及其抗氧化特性的影响

孙晓军　李霞　刘雪兰

摘要：将40周龄海兰白蛋鸡480只平均分为4组，分别饲喂添加0、0.5%、1.0%和2.0% CLA的日粮，研究日粮不同CLA水平对蛋黄脂肪酸组成及蛋黄抗氧化功能的影响。结果表明：随着日粮CLA含量的增加，蛋黄中饱和脂肪酸含量显著增加（P<0.05），单一不饱和脂肪酸含量显著下降（P<0.05），蛋黄中的共轭亚油酸含量呈线性增加的趋势（P<0.05）；蛋黄的各抗氧化指标发生显著变化，随着CLA添加量的增加，T-SOD酶含量线性增加， MDA的含量显著低于对照组（P<0.05），谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组（P<0.05）。因此，以蛋黄中CLA含量和抗氧化性强弱为评价指标时，CLA的适宜添加量为2.0%。

关键词：共轭亚油酸；蛋黄；脂肪酸；抗氧化性

中图分类号：S816.71文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）12-0103-05

共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一组亚油酸的异构体，国内外研究证实，它具有抗癌、预防心血管疾病等广泛的生理功能，因而深受人们青睐。但是其在天然食品中含量极低，不能满足人的生理需求，因此，动物营养学界开展起将CLA富集到畜禽产品中的研究，其中，将CLA富集到鸡蛋中的研究居多，这些研究多集中在CLA在蛋黄中的富集规律及CLA对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响上[1～9]，对鸡蛋中其它成分如卵磷脂的影响还鲜有报道。另外，由于CLA是一种强抗氧化剂，富集到鸡蛋中对蛋黄的抗氧化功能研究尚未见报道。本试验通过在蛋鸡日粮中添加不同剂量的CLA，研究其对蛋黄中脂肪酸、胆固醇、卵磷脂、SOD、MDA、T-SOD活性、谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化能力的影响，旨在为CLA的脂类代谢调节功能和抗氧化功能提供试验依据，为CLA鸡蛋的开发和食用提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验材料

共轭亚油酸油，CLA含量为80.91%，顺-9，反-11 39.59%，反-10，顺-12 41.11%，购自蓬莱市海洋生物有限公司，批号为10005，物理性状为淡黄色油状液体。

1.2试验动物

采用单因素完全随机设计，按体重、周龄、健康状况及遗传特性一致原则将40周龄海兰白蛋鸡480只分为4组，每组3个重复，每个重复40只。试验期8周。

1.3试验管理及试验日程

试验在山东省农业科学院家禽研究所试验鸡舍进行。试验时间为2013年3月1日～5月9日，其中2013年3月1～14日为预试期，各组试验鸡根据需要调整，使组间产蛋率差异不显著。调整结束后进入正式试验期，正式试验期为2013年3月15日～5月9日，共56 d。以2层阶梯式金属笼饲养产蛋鸡，每笼1只。按常规方法饲喂管理，乳头式饮水器，自由采食和饮水。鸡舍温度15～28℃，室内纵向机械通风，自然光照，早晚辅以人工光照，恒定光照时间为16 h/d，光照强度14 lx。蛋鸡日饲喂2次，分别在8∶00和17∶00。每日记录鸡舍温度和气温。

1.4试验设计与饲粮

试验饲粮按照中华人民共和国农业行业标准（2004）进行配制。采用玉米-豆粕-棉粕型饲粮，设4个CLA油添加水平，分别为0（对照组）、0.5%、1.0%、2.0%。为使各组饲粮的能值相同，本试验采用重量替代法，在不同的饲粮处理中，用同样重量的豆油代替等量的CLA油，即在基础饲粮的基础上，对照组豆油含量2.0%，CLA油含量0。饲粮组成及营养水平见表1。饲粮每周配制1次，4℃贮藏。

1.5样品采集

收集试验最后一天的鸡蛋，贴好标签，4℃厌氧保存。

1.6测定指标与方法

1.6.1脂肪酸脂肪酸的测定方法采用高效液相色谱法，委托农业部饲料工业中心测定。

1.6.2T-SOD活性采用黄嘌呤氧化法，752可见光分光光度计测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.6.3谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力化学比色法，752可见光分光光度计测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.6.4丙二醛（MDA）采用硫代巴比妥酸（TBA） 法测定，752可见光分光光度计测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.7数据统计分析

试验数据用SPSS13.0软件包中的单因素试验设计方差分析过程（ANOVA）进行，多重比较采用Duncan氏法进行，以P<0.05（差异显著）作为差异显著性判断标准。

2结果与分析

2.1日粮CLA添加量对蛋黄脂肪酸组成的影响

蛋黄脂肪酸组成见表2。随着日粮CLA浓度的增加，饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的含量逐渐增加，单不饱和脂肪酸的含量逐渐降低，CLA的添加量为1.0%时这种变化既达到显著水平。除了木质素酸（C24∶0）外，几乎所有的饱和脂肪酸的含量都因日粮补充共轭亚油酸而发生了明显改变，其中当蛋鸡日粮添加2.0%的共轭亚油酸时，饱和脂肪酸中的月桂酸（C12∶0）、肉豆蔻酸（C14∶0）、棕榈酸（C16∶0）、硬脂酸（C18∶0）、十七碳酸和花生酸（C20∶0）显著增加，而山嵛酸（C22∶0）含量显著下降（P<0.05）。蛋黄中几乎所有的多不饱和脂肪酸（二十碳五烯酸除外）均发生了一定的变化，但变化趋势不同。随着日粮CLA含量的增加，十八碳二烯酸和二十碳二烯酸的含量明显增加，而亚麻酸（C18∶3）、花生四烯酸（C20∶4）、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的含量显著降低（P<0.05）。蛋黄中CLA含量显著增加（P<0.05）。

如表2所示，蛋黄中的c-9，t-11和t-10，c-12异构体分别占66%～70%和29%～34%，说明CLA异构体是选择性地沉积在蛋黄中的。Raes（2002）等[15]报道，c-9， t-11的沉积效率高于t-10， c-12异构体，与我们的研究结果一致，然而其原因尚不清楚。

2.2不同CLA添加水平对蛋黄抗氧化能力的影响

表3结果表明，随着日粮CLA含量的增加，蛋黄中SOD酶活性线性增加，影响显著（P<0.05）；MDA含量逐渐降低，当日粮添加2%的CLA时，MDA的含量显著低于对照组（P<0.05）；随着日粮CLA含量增加，蛋黄中谷胱甘肽过氧化物酶活性逐渐增加，当日粮中CLA添加量为2.0%时，其活性显著高于对照组（P<0.05）。同类的研究尚未见资料报道，其机理可能是CLA具有1个共轭双键，能淬灭单线态氧，消除氧自由基，是脂类过氧化物反应的断链抗氧化剂。

3小结

3.1从表2可以看出，随日粮共轭亚油酸含量的增加，蛋黄中饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸逐渐增加，而单不饱和脂肪酸下降。Ahn等（1999）[11]也得出了同样的结论，这表明，共轭亚油酸确实有改变饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸比例的生理效应。这是由于CLA抑制了Δ9-去饱和酶活性，Δ9-去饱和酶是饱和脂肪酸转化为相应的单不饱和脂肪酸的关键酶，从而导致饱和脂肪酸增加，不饱和脂肪酸减少[12]；蛋黄中多不饱和脂肪酸的增加则是由于CLA抑制了Δ-6共轭亚油酸脂肪酸脱氢酶的活性，Belury等[13]研究发现，CLA是Δ-6脂肪酸脱氢酶抑制剂，而Δ-6脂肪酸脱氢酶是亚麻酸转化为C20∶5系列脂肪酸的关键酶，由于CLA抑制了Δ-6去饱和酶，使C18∶3脂肪酸转换为C20∶5脂肪酸时受阻，导致多不饱和脂肪酸的含量增加。日粮CLA降低了蛋黄中的花生四烯酸，这与Cherian（2002）等[14]研究结果相一致，研究者普遍认为有两种可能机制：一是Δ-6去饱和酶（亚油酸和亚麻酸转化为花生四烯酸的限速酶）被共轭亚油酸、亚油酸和亚麻酸竞争性抑制；另一个是日粮中的亚油酸和亚麻酸的含量均较低，因为CLA油中亚油酸及亚麻酸含量比大豆油低很多，当共轭亚油酸油代替豆油，日粮的亚油酸和亚麻酸降低，而亚油酸和亚麻酸是花生四烯酸的合成前体，因此蛋黄中花生四烯酸的含量降低。

3.2关于蛋黄SOD的研究报道较少，王俊卿等（2002）[16]报道，光合细菌能使鸡蛋中SOD酶活性大大提高。郝志明等（2005）[17]在蛋黄和蛋清中也都测到了SOD。目前，关于共轭亚油酸对SOD酶的影响还未见资料报道。在本研究中，日粮添加共轭亚油酸对蛋黄中SOD活性有影响，随着添加量的增加，酶活性线性增加，其机理尚不清楚，可能是共轭油酸对SOD酶基因的表达有影响。

3.3CLA对蛋黄中MDA含量的影响尚未见报道，但CLA能降血清和肝脏中的MDA含量和具有抗氧化性的功能时有报道。张旭辉等（2007）[18]研究发现，鹅日粮中添加CLA后，其血清和肝脏中MDA含量比对照组有显著性降低；Livisay等（2000）[19]也发现CLA可以增强大鼠肝脏微粒体和骨骼肌匀浆的氧化稳定性，降低MDA的生成，以上研究与本试验结论相同。目前，CLA对机体抗氧化防御系统的作用还不确切。大量研究是在体外条件下进行的，体内试验报道还很缺乏，且体外试验常常不能反映体内的条件和生理过程，往往与体内试验差异很大。关于CLA是否通过作为抗氧化剂或氧化强化剂发挥作用，至今仍存在分歧。Kim等（2002）[20]报道CLA可以降低大鼠脂质过氧化物，增加氧化稳定性。CLA有助于增强机体清除自由基的能力，至于其是否具有直接清除自由基作用，以及其提高抗氧化酶活力的量效关系、作用机理和有效活性成分等还有待于进一步研究。

3.4日粮中添加共轭亚油酸改变了蛋黄脂肪酸的组成，使得饱和脂肪酸含量增加，单一不饱和脂肪酸含量下降；随着日粮共轭亚油酸添加量的增加，蛋黄中共轭亚油酸含量呈线性增加趋势；日粮添加共轭亚油酸还可以提高蛋黄抗氧化性。因此食用共轭亚油酸鸡蛋可以在不改变人们饮食习惯的情况下，既能补充共轭亚油酸，提高人体抗心血管疾病和肿瘤的能力，增强肌体免疫力，同时又能增强肌体的抗衰老能力，延缓身体各器官老化速度，对促进身体健康，提高国民身体素质具有深远意义。

参考文献：

[1]

Du M，Ahn D U，Sell J L.Effect of dietary conjugated linoleic acid on the composition of egg yolk lipids[J].Poultry Science，1999，78：1639-1645.

[2]Kim J H，Hwangbo J，Choi N J，et al.Effect of dietary supplementation with conjugated linoleic acid，with oleic，linoleic，or linolenic acid，on egg quality characteristics and fat accumulation in the egg yolk[J].Poultry Science，2007，86（6）：1180-1186.

[3]Aydin R，Cook M E.The effect of dietary conjugated linoleic acid on egg yolk fatty acids and hatchability in Japanese quail[J].Poultry Science，2004，83（12）：2016-2022.

[4]Shang X G，Wang F L，Li D F，et al.Effects of dietary conjugated linoleic acid on the productivity of laying hens and egg quality during refrigerated storage[J].Poultry Science，2004，83（10）：1688-1695.

[5]Suksombat W，Samitayotin S，Lounglawan P.Effects of conjugated linoleic acid supplementation in layer diet on fatty acid compositions of egg yolk and layer performances[J].Poultry Science，2006，85（9）：1603-1609.

[6]官丽辉，马旭平，程玉芳.日粮添加CLA对蛋鸡产蛋性能和蛋黄脂肪酸的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2010（15）：84-85.

[7]徐焱，万小保，凌利.富含生理活性物质CLA强化鸡蛋的试验研究[J].粮食与饲料工业，2005（12）：34-35.

[8]Raes K，Huyghebaert G，De Smet S，et al.The deposition of conjugated linoleic acids in eggs of laying hens fed diets varying in fat level and fatty acid profile[J].The Journal of Nutrition，2002，132（2）：182-189.

[9]Jones S，Ma D W，Robinson F E，et al.Isomers of conjugated linoleic acid （CLA） are incorporated into egg yolk lipids by CLA-fed laying hens[J].The Journal of Nutrition，2000，130（8）：2002-2005.

[10]朱云芬， 陈宽维，葛庆联，等.分光光度法测定鸡蛋黄卵磷脂含量[J].江苏农业学报，2010，26（4）：853-856.

[11]Ahn D U， Sell J L， Chamruspollert C J，et al. Effect of dietary linoleic acid on the quality characteristics of chicken eggs during refrigerated storage[J].Poult.Sci.， 1999， 78：922-928.

[12]尚秀国.共轭亚油酸对蛋黄脂肪酸调控机理的研究[D].北京：中国农业大学，2004.

[13]Belury M A， Kempa-Steczko A. Conjugated linoleic acid modulates hepatic lipid composition in mice[J]. Lipids， 1997， 32（2）： 199-204.

[14]Cherian G， Goeger M P， Aan D U. Dietary conjugated linoleic acid with fish oil alters yolk n-3 and trans fatty acid content and volatile compounds in raw， cooked， and irradiated eggs[J].Poult.Sci.， 2002，10：1571-1577.

[15]Raes K， Huyghebaert G， De Smet S， et al. The deposition of conjugated linoleic acids in eggs of laying hens fed diets varying in fat level and fatty acid profile[J]. The Journal of Nutrition， 2002，132（2）： 182-189.

[16]王俊卿， 张肇铭. 光合细菌对鸡蛋产量及抗氧化活性的影响[J]. 中国家禽， 2002， 24（11）： 13-14.

[17]郝志明， 谢斐， 吕玉琴. 鸡蛋、鸡胚的 SOD 和 MDA 水平[J]. 西安联合大学学报， 2005， 7（5）： 11-13.

[18]张旭辉，王宝维，王雷，等.共轭亚油酸对鹅抗氧化功能与脂质过氧化的影响[J].动物营养学报， 2007，19（3）：299-304.

[19]Livisay S A， Zhou S， Ip C， et al. Impact of dietary conjugated linoleic acid on the oxidative stability of rat liver microsomes and skeletal muscle homogenates[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2000， 48（9）： 4162-4167.

[20]Kim E J， Holthuizen P E， Park H S， et al. Trans-10， cis-12-conjugated linoleic acid inhibits Caco-2 colon cancer cell growth[J]. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology， 2002， 283（2）： G357-G367.