CDC6蛋白在乳腺癌中表达及与病理指标的关系

齐攀 金艳 曹兴玥 张冰 谢振斌

CDC6蛋白在乳腺癌中表达及与病理指标的关系

齐攀 金艳 曹兴玥 张冰 谢振斌

目的探讨乳腺癌组织中细胞分裂周期蛋白6(CDC6)表达情况, 分析CDC6蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系和意义。方法采用免疫组化方法检测73例乳腺癌石蜡标本中CDC6蛋白的表达, 分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果CDC6主要表达于细胞浆及细胞核中, 阳性表达率：乳腺癌中65.8%；CDC6蛋白表达与淋巴结转移及组织学分级呈正相关。结论CDC6蛋白表达与乳腺癌关系密切, 检测其表达对进一步了解乳腺癌的生物学行为及判断预后有一定价值。

细胞分裂周期蛋白6；乳腺癌; 病理指标

乳腺癌严重威胁女性健康, 在我国女性乳腺癌发病率10年增长37%, 且发病年龄有年轻化趋势。早期预防、早期诊断、早期治疗是防治乳腺癌的主要手段。然而为获得更高的生存率, 选择具有高危预后因素的患者进行个体化治疗已成为主要趋势[1,2]。

细胞分裂周期蛋白6(cell division cycle6, CDC6)是DNA复制和细胞增殖必须蛋白质。其正性调控DNA复制, 在DNA复制初期、后期、S期和有丝分裂期均起重要作用。CDC6缺乏, DNA无法复制, 细胞进入凋亡或无DNA复制的假分裂状态[3]。CDC6在肿瘤中的研究已广泛受到重视。CDC6在正常组织中、增生不良组织中及肿瘤组织中表达依次增高[4], 并且选择性阻止肿瘤细胞的增殖可以通过抑止CDC6的表达来实现。本次实验研究探讨CDC6与乳腺癌的关系, 评价其是否能单独或与其他指标联合应用于乳腺癌患者的预后判断及指导治疗。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料73例乳腺癌标本来自2003～2009年新乡市中心医院病理科, 均为石蜡包埋组织块。73例乳腺癌患者全部为女性(均有完整的随访资料), 年龄37～78岁, 中位年龄56岁, 其中年龄≤50岁的患者27例, 年龄＞50岁的患者46例；2例为导管内癌,6例为浸润性特殊型癌,65例为浸润性非特殊型癌；肿瘤直径≤2 cm24例, ＞2 cm49例；淋巴结转移29例, 未转移44例；临床分期Ⅰ、Ⅱ期58例, Ⅲ期15例。

1.2 实验方法 采用组织切片免疫组化 CDC6(11640-1-AP)兔抗人多克隆抗体为美国PTG.LAB公司生产。免疫组化染色按S-P试剂盒操作说明进行。染色过程中设阳性和阴性对照。

1.3 疗效判断标准 每例乳腺癌标本均已有HE染色切片(病理既往存放), 并进行组织学分级(SBR分级标准)。CDC6以胞核和胞浆出现清晰的棕黄色颗粒为阳性, 采用半定量积分法判断结果。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验；相关性采用Spearman法进行分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CDC6表达与乳腺癌临床病理特征的关系 免疫组化结果显示, CDC6蛋白阳性表达定位在乳腺癌细胞胞核和细胞浆, 表现为细胞核及胞浆出现棕黄色颗粒沉淀,73例乳腺癌标本CDC6在乳腺癌中阳性率为65.8%, 其中(-)5例、(+)20例、(++)23例、(+++)25例。结果显示, 淋巴结转移与否及组织学分级不同的乳腺癌组织中, CDC6的表达差异具有统计学意义(P＜0.05)。淋巴结有转移, CDC6表达高, 组织学分级高, CDC6表达高；年龄、有无绝经、临床分期、病理类型与CDC6表达无关。见表1。

2.2 与临床病理特征的相关性 相关分析结果显示, CDC6蛋白与淋巴结转移呈正相关(P＜0.05), 淋巴结转移越多, CDC6蛋白表达越高；与组织学分级呈正相关(P＜0.05), 组织学分级高, CDC6蛋白表达越高。见表2。

3 讨论

CDC6在肿瘤组织中, 包括宫颈癌、肺癌、口腔鳞状上皮癌、前列腺癌等组织中呈现高表达, 且其表达水平与组织的恶性进程相关[5]。有学者用免疫组化与免疫荧光方法, 检测了正常与病变宫颈切片中CDC6蛋白的表达, 发现CDC6在非正常组织切片中染色明显增强, 其特异性与敏感性超过传统的肿瘤标记物Ki67和PCNA。有学者检测了75例NSCLC病例癌组织与周边正常组织中CDC6 mRNA与蛋白水平的差异, 发现在癌组织中CDC6的mRNA水平比正常组织高出5倍, 蛋白质印迹法(Western Blot)结果证实, 其蛋白水平也相应地偏高。

表1 CDC6表达与乳腺癌临床病理特征的关系(n)

表2 Spearman等级相关分析中各临床病理参数的赋值

本次实验发现, CDC6蛋白表达与淋巴结转移及组织学分级呈正相关, CDC6蛋白表达增强预示着肿瘤分化差, 容易复发转移, 组织学分级差及淋巴结转移提示预后不佳。所以通过本次实验再次证实CDC6预示不良预后, 其可以成为监测乳腺癌病情、评价疗效的重要分子生物学指标。通过抑制CDC6的表达可以选择性抑制肿瘤细胞的增殖, CDC6有可能成为一种有前景的治疗乳腺癌的突破点。

[1]Gonzalez S, Klatt P, Delgado S, et al. Oncogenic activity of Cdc6 through repression of the INK4/ARF locus. Nature,2006,440(7084):702-706.

[2]Mallik I, Davila M, Tapia T, et al. Androgen regulates Cdc6 transcription through interactions between androgen receptorand E2F transcription factor in prostate cancer cells. Biochim Biophys Acta,2008,1783(10):1737-1744.

[3]Jin F, Fondell JD. A novel androgen receptor-binding element modulates Cdc6 transcription in prostatecancer cells during cellcycle progression. Nucleic Acids Res,2009,37(14):4826-4838.

[4]Martin CM, Astbury K, McEvoy L, et al. Gene expression profiling in cervical cancer: identification of novel markers for disease diagnosis and therapy.MethodsMol Biol,2009(511):333-359.

[5]Murphy N, Ring M, Heffron CC, et al. Quantitation of CDC6 and MCM5 mRNA in cervical intraepithelial neoplasia and invasivesquamous cell carcinoma of the cervix. Mod Pathol,2005,18(6):844-849.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.020

2015-04-20]

453002 新乡市中心医院头颈乳腺科(齐攀)；新乡医学院组胚教研室(金艳 曹兴玥)；新乡市中心医院儿科(张冰)；新乡市中心医院(谢振斌)