RP-HPLC法测定消痤丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量

张长坡 张延博

RP-HPLC法测定消痤丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量

张长坡 张延博

目的建立高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定消痤丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量。方法采用Thermo BDS HYPESILC18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-水(78∶22)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为270 nm,柱温为20 ℃。结果隐丹参酮和丹参酮ⅡA进样量分别在0.119～0.714、0.115～0.691 μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999和0.9998；平均回收率(n=6)分别为98.3%(RSD=1.5%),99.5%(RSD=0.86%)。结论本方法操作简便可行,结果准确可靠。

复方制剂；消痤丸；隐丹参酮；丹参酮ⅡA；高效液相色谱法；含量测定

DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.207

消痤丸是由丹参、紫草、重楼、牡蛎、川芎、黄精、茵陈、苍耳子和野菊花加工而成的复方制剂,具有清热祛湿、凉血解毒、活血祛瘀、软坚散结之功效,临床上用于治疗痤疮。丹参具有活血祛瘀、凉血消痈的功效[1］,是该制剂的主药,为有效控制制剂质量,确保临床疗效,本研究建立了隐丹参酮、丹参酮ⅡA的测定方法,并对供试品溶液的制备方法和色谱条件进行了筛选、优化,该方法可有效排除干扰物质,灵敏度高,操作简便,结果准确可靠。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪；Agilent DAD检测器；Agilent Chemstation工作站(美国安捷伦科技公司)。

隐丹参酮(含量测定用,批号852-993)、丹参酮ⅡA(含量测定用,批号110766-200416)的对照品购自中国食品药品检定研究院；消痤丸(50 g/瓶,济宁市中医院提供)。甲醇(天津市科密欧化学试剂开发中心)为色谱纯；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用Thermo BDS HYPESIL C18(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-水(78±22)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为270 nm,柱温20℃,进样体积20 μl[2］。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取样品20粒,精密称定重量,研细,取粉末约1.0 g,精密称定,置磨口锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,密塞,称定重量,加热回流1 h,放冷后,密塞,称定重量,用甲醇补足减损的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液[3］。

2.2.2 隐丹参酮、丹参酮ⅡA混合对照品溶液 分别精密称取经减压干燥24 h的隐丹参酮对照品12.4 mg、丹参酮ⅡA对照品12.0 mg,置50 ml棕色量瓶中,加甲醇5 ml使溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品储备液。精密吸取储备液3 ml,置25 ml棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得隐丹参酮、丹参酮ⅡA混合对照品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液 按制剂的处方工艺,去除丹参药材制成不含丹参的样品,并按“2.2.2”项下方法操作,即得。2.3 专属性考察 取隐丹参酮、丹参酮ⅡA混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液,按上述色谱条件进样,记录色谱图。结果表明其他药味对隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定无干扰。见图1,图2,图3。

图1 对照品

图2 样品

图3 色谱图

2.4 线性关系考察 精密吸取隐丹参酮、丹参酮ⅡA混合对照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0、24.0 μl,分别按上述色谱条件进样测定峰面积值。以进样量(X)为横坐标,峰面积值(Y)为纵坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,隐丹参酮、丹参酮ⅡA回归方程分别为∶

线性范围分别为0.119～0.714 μg和0.115～0.691 μg。

2.5 精密度试验 精密吸取隐丹参酮、丹参酮ⅡA混合对照品溶液10 μl,连续进样5次,测定隐丹参酮、丹参酮ⅡA的峰面积,其RSD分别为0.11%和0.06%,表明精密度符合要求。

2.6 稳定性考察 取供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h进样测定峰面积,计算含量。结果在8 h内隐丹参酮、丹参酮ⅡA含量的RSD分别为1.1%和1.3%。表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批样品5份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项色谱条件进样测定含量。结果隐丹参酮、丹参酮ⅡA的平均含量(n=5)分别为0.0413%和0.0620%,RSD分别为0.79%和0.37%。表明方法重复性良好。

2.8 准确度考察 取已知含量的样品6份,每份约0.5 g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入隐丹参酮(0.203 mg/ml)和丹参酮ⅡA(0.341 mg/ml)混合对照品溶液,按“2.2.2”项下方法制备供试溶液,按“2.1”项色谱条件进行测定,计算回收率。结果平均回收率(n=6)分别为98.3%和99.5%,RSD分别为1.5%和0.86%。

2.9 样品测定 取不同批号的样品约1.0 g,精密称定,按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液,分别进行测定,采用外标一点法计算含量。结果表明不同批号样品含量稳定。见表1。

表1 不同批号样品隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量测定结果(%)

3 小结

3.1 指标性成分的确定 丹参脂溶性成分是丹参主要有效成分之一,具有较强的生理活性。其中丹参酮ⅡA、隐丹参酮含量较高。故以隐丹参酮和丹参酮ⅡA为指标,控制消痤丸的质量。

3.2 检测波长的选择 按本文色谱条件,分别记录隐丹参酮、丹参酮ⅡA色谱图。通过3D色谱图不同波长的比较,选择270 nm为检测波长。

现行质量标准仅有丹参酮ⅡA的鉴别,不能真实有效地控制消痤丸的质量,本文采用RP-HPLC法对消痤丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量同时进行含量测定,结果表明该法简便可行,重复性好,准确性高,可用于消痤丸的质量控制。

[1]周晓丽,刘春生,黄璐琦,等.传统道地产区与非道地产区丹参有效成分含量比较.北京中医药大学学报,2001,34(3):193-194.

[2]杨树声,宋平顺,赵建邦,等.高效液相色谱法测定丹参类药材中四种脂溶性成分含量.兰州大学学报(医学版) ,2010,36(3):26.

[3]霍艳萍,张倩,吴翠.HPLC法同时测定益心舒片中丹参酮ⅡA的含量.医学信息,2015(2):122.

2015-04-24］

∶272000 济宁市中医院(张长坡)；滕州市中心人民医院药学部(张延博)