柳氮磺吡啶肠溶片耐酸力和溶出度检测方法的建立与研究

孙宁云 常靓

柳氮磺吡啶肠溶片耐酸力和溶出度检测方法的建立与研究

孙宁云 常靓

目的建立柳氮磺吡啶肠溶片耐酸力和溶出度检测方法。方法溶出度试验采用篮法,依次以0.1 mol/L HCl和pH 7.5磷酸盐缓冲液作为溶出介质,转速100 r/min。高效液相色谱法对耐酸力和溶出度进行检测,采用Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以水-异丙醇-乙腈-冰醋酸(22∶11∶7∶0.4)为流动相,柱温40℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm。结果柳氮磺吡啶浓度在25～300 μg/ml范围内线性良好(r=0.9999)；平均回收率(n=9)为100.1%,RSD为0.4%,溶液在24 h内稳定,滤膜对主药没有吸附。结论该耐酸力和溶出度检测方法准确、重现性好、操作简单,能够有效控制产品的内在质量。

柳氮磺吡啶；耐酸力；溶出；高效液相色谱法

柳氮磺吡啶肠溶片(sulfasalazine enteric-coated tablet)临床应用广泛,可用于治疗克隆病和溃疡性结肠炎,目前也是类风湿关节炎(RA)的治疗主要用药[1］。

该品种收载于中国药典2010版二部中[2］,溶出度的测定分为两个部分∶①酸中释放∶通过目测片子有无裂纹或崩解对耐酸力进行判断；②pH=7.5磷酸盐缓冲液中释放∶采用紫外-可见分光光度法对溶出度进行测定。该方法对耐酸力的考察不能定量,且采用紫外方法进行检测,专属性不强、准确度不高。美国药典35中[3］亦对该品种有收载,采用高效液相色谱(HPLC)法对溶出度进行测定,通过测定酸中释放量来考察耐酸力,柳氮磺吡啶在酸中溶解度差,该方法不能准确检测出酸中的药物量。本研究建立了柳氮磺吡啶肠溶片的耐酸力检查方法,并采用HPLC法对溶出度进行检测,方法准确、专属性强,为本品的质量控制及临床的用药安全提供保障。现报告如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪(安捷伦医药科技有限公司),Varian VK 7025溶出度测定仪,梅特勒 XS205型电子天平,梅特勒 AL104型电子天平。

1.2 试药 柳氮磺吡啶肠溶片(上海福达制药有限公司,批号∶22130908),柳氮磺吡啶原料药(批号∶1056-13-21)。水为纯化水,盐酸、氢氧化钠、磷酸二氢钾均为分析纯,异丙醇、乙腈、冰醋酸均为色谱纯。

2 溶出度测定方法的建立

2.1 耐酸力测定方法的选择 美国药典35中通过测定酸中的释放量来考察柳氮磺吡啶肠溶片的耐酸力,规定限度≤10%。取限度水平(10%)的原料药置于溶出杯,参照USP35中的酸中释放条件(篮法,100 r/min,介质∶0.1 mol/L HCl900 ml),120 min后原料药没有溶解,取出释放介质,经检测含量为标识量的0.03%。结果表明,主药在酸中溶解度差,通过直接测定的方法无法准确检测出酸中释放的药物量。

因此,参考中国药典2010版中拉唑类肠溶制剂的标准[4,5］,通过测定供试片中的主药含量,来判断耐酸力是否合格。

2.2 色谱条件 采用Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,μm)色谱柱,以水-异丙醇-乙腈-冰醋酸(22∶11∶7∶0.4)为流动相,柱温40℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm。

筛选了不同品牌的色谱柱,在30℃柱温下,Nucleosil 100-5C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)、Zorbax SB-C18柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm)和XBridge C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)出峰时间较早,均在3～4 min,Intersil ODS-3V柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)出峰时间较晚,约在14.4 min。最终选择了Intersil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),出峰时间比较合适,在10.6 min。根据USP35中提供的方法,柳氮磺吡啶的出峰时间约为7.7 min,当柱温升高至40℃时,出峰时间提前至8.8 min,因此,最终确定柱温为40℃。

2.3 测定方法

2.3.1 耐酸力 采用中国药典2010版二部附录溶出度测定法中的篮法,以盐酸溶液(9→1000)900 ml为溶出介质,转速为100转/min,经2 h后,取出供试片,用水迅速洗去表面酸液,用滤纸吸干,置于1000 ml量瓶中,加稀释剂(pH 7.5的磷酸盐缓冲液)溶解并稀释至刻度,混匀,过滤,取续滤液作为耐酸力样品溶液。

2.3.2 释放度 采用中国药典2010版二部附录溶出度测定法中的篮法,以盐酸溶液(9→1000)900 ml为溶出介质,转速100转/min,经2 h后,立即将转篮提出液面,随即将转篮浸入磷酸盐缓冲液(pH7.5)900 ml的释放介质中,转速不变,经1 h后,取溶液,过滤,取续滤液作为释放度样品溶液。另精密称取柳氮磺吡啶对照品25 mg,置100 ml量瓶中,加0.1 mol/L的氢氧化钠溶液溶解并定容至刻度,作为对照品溶液。稀释剂、空白辅料、对照品溶液和样品溶液的色谱图见图1。

图1 各溶液的HPLC色谱图

2.4 线性关系考察 精密称取柳氮磺吡啶对照品25 mg,置于50 ml量瓶中,加稀释剂溶解并定容至刻度,摇匀,作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液适量,制成浓度分别为25、100、200、250和300 μg/ml的溶液。精密量取上述溶液10 μl,照“2.2项”下色谱条件注入液相色谱仪,记录色谱图。以柳氮磺吡啶浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,线性方程为Y=23.312X-37.543,r=0.9999。结果显示,该方法在25～300 μg/ml的浓度范围内线性关系良好。

2.5 准确度试验 精密称取柳氮磺吡啶对照品适量,按处方比例加入空白辅料,用稀释剂溶解并制成浓度水平为测定浓度80%、100%和120%的溶液,每个水平平行制备3份,将上述溶液过滤,精密量取续滤液10 μl,照“2.2项”下色谱条件进行测定,计算回收率,结果见表1。结果显示,该方法准确度符合要求。

表1 准确度试验结果

2.6 精密度试验 精密称取柳氮磺吡啶对照品25 mg,置于100 ml量瓶中,按处方比例加入空白辅料,加稀释剂溶解并定容至刻度,混匀,过滤,平行制备6份,精密量取续滤液10 μl,照“2.2项”下色谱条件进行测定,记录色谱图,计算平均含量为99.8%,RSD为0.6%。结果表明,该方法精密度良好。

2.7 溶液稳定性试验 取对照品溶液及释放度样品溶液,分别置于室温和4℃环境中,并在0、12、24 h进样,照“2.2项”下色谱条件进行测定,考察溶液的稳定性。结果显示,对照品溶液及样品溶液在室温和4℃环境下24 h内稳定。

2.8 滤膜吸附试验 取对照品溶液和释放度样品溶液,用0.45 μm聚醚砜材质针式滤器分别滤去1、3、5、7 ml后收集续滤液,进样。平行地将对照品溶液和释放度样品溶液离心后取上清液,进样。将过滤后溶液的峰面积与离心后溶液的峰面积进行比较,滤膜无吸附现象。见表2。

2.9 溶出曲线的均一性 取本品6片,按2.3项下方法进行试验,在磷酸盐缓冲液(pH=7.5)释放介质中,分别于5、10、 15、30、45、60、90 min取溶液进行测定,结果显示,各时间点累积溶出量RSD均≤10%,样品溶出曲线的均一性良好。见图2。

图2 柳氮磺吡啶肠溶片的溶出曲线(n=6)

2.10 样品溶出度的测定 取本品3批,每批取6片,分别按2.3项下方法及原方法[2］测定溶出度,结果见表3。

表2 滤膜吸附试验结果

表3 柳氮磺吡啶肠溶片溶出度的测定结果(n=6)

3 小结

3.1 对于肠溶制剂,美国药典多采用酸中释放度法来考察耐酸力,而中国药典则多数采用测定供试片含量的方法。经测定,柳氮磺吡啶在酸中溶解度差,参照美国药典35柳氮磺吡啶肠溶片的耐酸力检测方法无法得出准确结果,因此,重新建立了柳氮磺吡啶肠溶片的耐酸力检查方法,通过测量供试片的含量来进行判断,所得结果更真实、可靠。

3.2 采用修订后方法和原方法分别对3批样品进行检测,修订后方法测得的释放量普遍高于原方法测得的结果,可能是因为原方法采用紫外-可见分光光度法测定吸光度时,仅按柳氮磺吡啶的吸收系数为658来计算每片的释放量,仪器之间可能存在误差,仅将参照以固定值进行计算,所得结果欠准确。且采用HPLC法代替紫外-可见分光光度法对溶出样品进行检测,取样后续滤液可直接进样,不但避免了取样后需要再稀释的繁琐操作,而且该方法准确性更高、专属性更强。

[1]梁燕,王凌,王蕊,等.柳氮磺吡啶肠溶片人体生物等效性研究.药学实践杂志,2013,31(6):424-428.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京∶中国医药科技出版社,2010: 529-530,1039.

[3]王红梅,蒋当华,宋林.HPLC法测定人血浆中柳氮磺吡啶与磺胺吡啶浓度及其药动学研究.中国抗生素杂志,2013,38(3):223-226.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京∶中国医药科技出版社,2010:282.

[5]《中国药品标准》编辑部.国家食品药品监督管理局国家药品标准颁布件.中国药品标准,2003(5):25-28.

Establishment and research of detection methods for acid tolerance and dissolution rate in sulfasalazine enteric-coated tablet

SUN Ning-yun,CHANG Liang.Institute of Materia Medica,Shanghai Xinyi Sine Pharmaceutical Co.,Ltd,Shanghai 201206,China

ObjectiveTo establish detection methods for acid tolerance and dissolution rate in sulfasalazine enteric-coated tablet.MethodsBasket method was applied in detection of dissolution rate,with 0.1 mol/L HCl and pH 7.5 phosphate buffer solution as dissolution media,and revolving speed by 100 r/min.High performance liquid chromatography was used in detection of acid tolerance and dissolution rate.Intersil ODS-3 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) was chromatographic column,and water-isopropanol-acetonitrile-glacial acetic acid (22∶11∶7∶0.4) was mobile phase,with column temperature as 40℃,flow velocity as 1.0 ml/ min,and detection wave length as 254 nm.ResultsSulfasalazine had good linear in 25～300 μg/ml (r=0.9999),with the average recovery rate (n=9) as 100.1% and RSD was 0.4%.The solution was stable within 24 h,and basic remedy was not absorbed by filter membrane.ConclusionThis is an accurate detection method for acid tolerance and dissolution rate,with good reproducibility and simple operation.It can effectively control inherent quality of product.

Sulfasalazine; Acid tolerance; Dissolution; High performance liquid chromatography

2015-04-08］

∶201206 上海信谊药厂有限公司药物研究所

∶孙宁云

DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.204