蒙药水栀子质量标准研究*

蒙药水栀子质量标准研究*

★李养学1,2*通信作者：李养学，男，硕士。研究方向：中药新药研究与质量控制。Tel：020-83502098，E-mail：efongzg@126.com。张岳3李素梅1,2胥爱丽1,2江洁怡1,2(1.广东省中医药工程技术研究院广州 510095；2.广东省中医药研究开发重点实验室广州 510095；3.广东省食品药品职业技术学校广州 510663)

摘要：目的: 应用现代分析方法，建立蒙药水栀子质量标准。方法: 采用薄层色谱法进行鉴别；采用HPLC法测定水栀子中栀子苷的含量，Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，乙腈-水为(15∶85)流动相，柱温25℃，流速1.0 mL/min，在238nm波长下检测。结果: 薄层色谱斑点清晰，分离度好；含量测定栀子苷在0.1132～1.132μg范围内呈良好的线性关系(r=0.99996)，平均回收率为100.32%(RSD为1.09%，n=2)。结论: 所建方法简单、准确、重复性好，可用于蒙药水栀子的质量控制。

关键词：蒙药；水栀子；薄层鉴别；高效液相色谱法；质量标准

水栀子为茜草科植物长果栀子GardeniajasminoidesEllisf. Longicarpa Z.W.Xie et Okada的干燥成熟果实[1-2]，又名大栀子、马牙栀，蒙药名称“朱如拉”[1]，是中药栀子的一个变型[3]，始见于《八闽通志》[4]，主要分布于江西、广西、湖南、四川等地[5]。水栀子味酸、微苦，炖、燥、凉，具有清血热，明目，祛“巴达干协日”，生津，调元[1]。

现代研究表明，水栀子含有环烯醚萜类、单萜苷类、二萜类、三萜类、黄酮类、奎宁酸及其衍生物以及倍半萜等成分[6-8]，所含成分具有明显的镇痛、抗炎[9-10]、保肝[11]、降血糖[12]、抗血栓[13]等作用。

水栀子作为蒙药应用历史已较为久远，而对其质量标准相关的研究相对较少。本实验就水栀子的鉴别和含量测定等项目进行了较为全面和系统的研究，为建立和完善其质量标准提供参考。

1仪器与试药

1.1仪器薄层自动铺板器(BQ-Ⅱ型，重庆南岸实验电器厂)；薄层色谱点样仪(CAMAG 4型，瑞士)、薄层色谱数码成像系统(CAMAG Reprostar 3，瑞士)；十万分之一电子分析天平(Mettler-Toledo XS205DU，瑞士)；超纯水机(MilliPore Advantage A10，美国)；电热恒温水浴锅(HWS-26，上海)；高效液相色谱仪(Agilent 1200，美国)；电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9203A，上海精宏设备有限公司)；数控超声波清洗器(KQ52300DE，昆山市超声仪器有限公司)。

1.2试药栀子苷由中国食品药品检定研究院提供(含量：99.7%，批号：110749-201115)；水栀子药材由内蒙古大漠药业公司提供(批号：20131101、20131102、20131103、20140201、20140202)，内蒙古自治区药品检验所周凯主任中药师鉴定为茜草科栀子属植物长果栀子GardeniajasminoidesEillsf.longicarpaZ. W. Xie et Okada的干燥成熟果实。硅胶GF254薄层板为Merck预制板；水为自制超纯水；乙腈试剂级别为色谱纯；其它实验试剂级别为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层色谱的鉴别

2.1.1取水栀子样品适量，研细，取粉末约0.1g，加25mL甲醇，超声30min，溶液进行过滤，滤液水浴蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，制得水栀子供试品溶液。照2010年版《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取5μL上述溶液，分别于同一Merck硅胶GF254薄层板上点样，展开剂为：甲苯-甲酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.15)，进行展开，取出，晾干。继续喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，并于105℃下加热，至斑点显色清晰，置365nm下检视。供试品色谱中，在色谱相应的位置上，显七个主要的的荧光斑点。见图1。

2.1.2取栀子苷对照品(110749-201115)，制成每1mL含2mg栀子苷的甲醇溶液，作为对照品溶液。照2010年版《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μL，吸取上述对照品溶液5μL，分别点于同一Merck硅胶GF254薄层板上，展开剂为：正丁醇-乙酸乙酯-50%氨水(4∶1∶5)经放置的上层溶液，进行展开，取出，晾干。继续喷以香草醛硫酸溶液(5→100)，并于105℃下加热，至斑点显色清晰。在与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱显相同颜色的斑点。见图2。

1.水栀子(20131101)；2.水栀子(20131102)；3.水栀子(20131103)；

4.水栀子(20140201)；5.水栀子(20140201)

图1五批次水栀子薄层色谱图

1.栀子苷对照品； 2.水栀子(20131101)；3.水栀子(20131102)；

4.水栀子(20131103)；5.水栀子(20140201)；6.水栀子(20140201)

图2水栀子薄层色谱图

2.2含量测定[14-16]

2.2.1对照品溶液制备精密称取栀子苷对照品11.36mg(110749-201115)，置于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得每1mL含栀子苷0.1132mg的照品溶液，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备取本品粉末(批号：20131101，过四号筛)约0.1g，精密称定，置具塞三角瓶中(100mL)，精密加入50mL甲醇，密塞，称重，超声波清洗器(功率250W，频率45kHz)超声处理30min，取出，放冷，再用甲醇将减失的重量补足，摇匀，滤过。取续滤液，精密量取25mL，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)柱；流动相：乙腈-水(15∶85)；检测波长：238nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃。见图3-4。

图3　栀子苷对照品HPLC图谱

图4　供试品HPLC图谱

2.2.4线性关系考察精密量取“2.2.1”项下对照品溶液1,2,4,6,8,10mL，分别置于10mL量瓶中，甲醇定容，摇匀，分别制成对照品溶液，即每1mL分别含栀子苷为11.32,22.64,45.28,67.92,90.56,113.2μg。分别精密吸取10μL，按“2.2.3”项下高效液相色谱测定条件测定，以积分峰面积(Y)对栀子苷的含量(X)进行回归计算，得栀子苷标准曲线为Y=1015.03968X+2.8811092，r=0.99996。表明栀子苷在0.1132～1.132μg范围内呈现良好的线性关系。

2.2.5仪器精密度试验精密吸取“2.2.2”项下供试品溶液(批号：20131101)10μL，连续重复进样6次，按“2.2.3”项下高效液相色谱测定条件测定，测得供试品溶液中栀子苷峰面积积分值RSD为0.31%，表明高效液相色谱仪精密度良好。

2.2.6稳定性试验取“2.2.2”项下供试品溶液，于0、2、4、6、8和12h分别进样10μL，按“2.2.3”项下高效液相色谱测定条件进行测定，测得供试品溶液中栀子苷峰面积积分值的RSD为0.33%，表明供试品溶液的稳定性在12h内良好。

2.2.7重复性试验取本品粉末(批号：20131101)，按“2.2.2” 项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液6份，分别精密吸取10μL进样，按“2.2.3”项下高效液相色谱条件进行测定，测得峰面积积分值并计算含量，得栀子苷含量RSD为0.78%，表明本方法重现性较好。

2.2.8加样回收率试验分别取水栀子样品粉末(批号20131101)9份，按回收率试验方法，分别加入一定量栀子苷对照品，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法处理，按“2.2.3”项下高效液相色谱条件进行测定，计算样品中栀子苷含量，并计算回收率，结果平均回收率为100.32%，相对标准偏差RSD为1.09% (n=2)，表明本含量测定方法可靠、准确度高，结果见表1。

表1　栀子苷加样回收率测定结果(n=2)

2.2.9样品测定分别取各批次水栀子样品粉末，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法处理，按“2.2.3”项下高效液相色谱条件进行测定，计算各批次水栀子样品中栀子苷的含量，结果见表2。

表2　各批次样品含量测定结果(n=2)　mg/g

3讨论

3.1蒙药水栀子含有环烯醚萜类、单萜苷类、二萜类、三萜类等成分，和中药栀子成分较为接近。通过对水栀子药材环烯醚萜类成分进行薄层色谱鉴别研究，建立了水栀子药材中环烯醚萜类成分薄层色谱鉴别方法，同时对前文所述鉴别方法进行了方法学考察(分别对不同温度、不同湿度及不同厂家的薄层板进行了比较)，结果表明该鉴别方法对不同温度及不同湿度的适应性较好，色谱图Rf值适中，且色谱斑点较为丰富、清晰，分离度较好。

3.2水栀子中所含栀子苷为中药活性成分，故选择栀子苷作为控制其质量的指标成分。参考《中国药典》及相关文献，对水栀子进行了含量测定，对方法中流动相及流动相的比例、柱温、流速、提取溶剂、提取方式、提取时间以及含量测定方法的方法学等进行了考察。考察结果表明，该含量测定方法简便、重现性好、灵敏度高、结果准确、可靠，可用于对水栀子样品的质量控制。

3.3为了全面的了解和控制蒙药水栀子的质量，更好的为蒙医用药服务，还当进一步收集更多产地及批次的样品进行归类研究。

参考文献

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(收稿日期：2015-09-05)编辑：曾文雪

中图分类号：R282

文献标识码：A

*基金项目：广东省科技计划项目(2012A030100017)。