FOXP1蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义＊

张亚楠，刘汉锋

（广西医科大学第一附属医院西院肿瘤内科，南宁530007）

弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是一组在形态学、遗传学及病理特征上都具有明显异质性的非霍奇金淋巴瘤，此外，其异质性还表现在对治疗的反应不同。叉头框转录蛋白1（forkhead box protein1，FOXP1）是一种翼型螺旋亚结构域转录因子，是FOXP亚家族FOXP1～4转录因子成员，广泛表达于各种正常细胞和肿瘤组织中［1-5］。近年来，众多研究显示FOXP1在DLBCL中的表达与其预后相关，但研究结果尚有一定争议［6-7］。本研究旨在探讨FOXP1在DLBCL的表达情况及其与临床病理特征和经R-CHOP方案治疗的患者预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2008年1月至2013年12月本院病理科和广西医科大学附属肿瘤医院病理科存档的40例DLBCL石蜡标本，取材时均未接受手术及放化疗，且病理诊断结果均经2名病理医师确认。其中男24 例，女16 例；年龄17～78岁，中位年龄49岁，＜60岁者31例，＞60岁者9例；TNM 分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期12例，Ⅲ期10例，Ⅳ期15例；结外侵犯者21例。确诊后所有病例均采用R-CHOP 方案（美罗华375 mg／m2静脉滴注，第1天；环磷酰胺750mg／m2静脉滴注，第1天；表柔比星50mg／m2静滴，第1天；长春新碱1.4mg／m2静滴，第1天；泼尼松100mg口服，第1～5天），21d为一个周期，化疗6～8个周期。另以40例反应性增生淋巴结组织作为对照。

1.2 随访 自确诊之日起，全部病例采用门诊复查或电话随访进行数据收集。随访截止时间为2014年4月30日，其中2例失访而不具备完整资料，随访率为95%，失访病例以失访日期作为死亡日期。随访过程中患者死于其他疾病或意外、未能随访到患者或其家属、在随访截止日期尚生存的患者为截尾数据，统计学上按删失计算。

1.3 免疫组织化学Envision法 常规石蜡切片（4μm ）、脱蜡、水化后置于EDTA（pH9.0）中，高压锅进行高温高压抗原修复3min，冷却后用PBS冲洗3min×3，再将3%过氧化氢滴于组织上以阻断内源性过氧化物酶，常温15min后PBS冲洗3min×3，滴加一抗4 ℃孵育过夜；取出后置于37 ℃恒温箱中复温45min，PBS冲洗5min×3，滴加二抗37 ℃孵育30min，PBS冲洗5min×3；DAB 显色，显微镜下控制反应时间，苏木素衬染。以0.01mmol／L PBS代替一抗作阴性对照。浓缩型兔抗人FOXP1单克隆抗体（稀释度1∶300）购自美国Epitomics公司；鼠抗人CD10、Bcl-6和MUM-1单克隆抗体（不需稀释）、二抗试剂盒及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.4 结果判定 阳性染色均为棕黄或棕褐色。FOXP1定位于细胞核，染色结果评判标准为：0 级，＜10%肿瘤细胞核染色；1级，10%～30%肿瘤细胞核染色；2级，31%～50%肿瘤细胞核染色；3级，＞50%肿瘤细胞核染色。评分0和1级判定为阴性（0～30%），2 和3 级判定为阳性（＞30%）［8］。MUM-1、BCL-6定位于细胞核，CD10定位于细胞膜，结果判定均为：阳性细胞大于30%计为阳性（＋），阳性细胞小于30%计为阴性（-）［9］。根据CD10、MUM-1和BCL-6将DLBCL分为生发中心型（germinal center B cell like，GCB）和非生发中心型（non-germinal center B cell like，non-GCB）两种类型，其中CD10（＋）或（-）、BCL-6（＋）、MUM-1（-）为GCB 型，CD10（-）、BCL-6（＋）、MUM-1（＋），CD10（-）、BCL-6（-）、MUM-1（＋）或（-）为non-GCB型［9］。完全缓解（CR）是指所有的瘤块以及肿瘤的临床表现完全消失且持续至少1个月；无病生存期（PFS）指从确诊到疾病进展或死亡的时间；总生存期（OS）指从确诊到死亡或末次随访之间的时间。

1.5 统计学处理 采用SPSS16.0软件进行统计分析。计数资料用率表示，比较用χ2检验法，生存曲线用Log-Rank检验，生存分析用Kaplan-Meier法，多因素分析采用COX风险比例模型。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 FOXP1在DLBCL 中的表达 FOXP1主要定位于细胞核，40 例DLBCL 组织中FOXP1阳性表达率为50.0%（20／40），见图1；根据CD10、MUM-1和BCL-6 3个指标的表达情况分类，14例为GCB型，26例为non-GCB型，其中GCB 型FOXP1的阳性表达率为14.3%（2／14），non-GCB 型FOXP1的阳性表达率为69.2%（18／26），差异有统 计学意义（χ2＝10.898，P＝0.01），可见FOXP1主要表达在non-GCB型DLBCL中。另40例反应性增生淋巴结组织的FOXP1阳性表达率为17.5%（7／40），与DLBCL 组绢比较差异有统计学意义（χ2＝9.488，P＝0.002），见图1。

图1 FOXP1在DLBCL中的表达（免Envision法染×400）

表1 FOXP1在DLBCL中的表达与临床病理 特征的关系［n（%）］

2.2 FOXP1在DLBCL 中的表达与临床病理特征的关系 FOXP1在DLBCL中的表达与乳酸脱氢酶（LDH）水平、B 症状、国际预后指数（IPI）评分、病理分型相关（P＜0.05），与性别、年龄、临床分期、体力状况评分（PS）、结外侵犯及Ki-67无关（P＞0.05），见表1。

2.3 FOXP1的表达与DLBCL的预后关系 40例DLBCL 患者的CR 为47.5%，2年PFS 为52.5%，2年OS 为82.5%。GCB型DLBCL的2年PFS明显优于non-GCB（χ2＝4.579，P＝0.032），而GCB与non-GCB的CR 与OS差异无统计学意义（P＞0.05）。Kaplan-Meier分析显示FOXP1阳性表达者的生存期较阴性表达者短。FOXP1阳性表达者的中位无病生存期（PFS）和总生存期（OS）分别为19个月和28个月，而阴性表达者的PFS 和OS则分别为30个月和37个月，差异均有统计学意义（χ2＝3.900，P＝0.048；χ2＝4.653，P＝0.031）。单因素相关分析显示，临床分期、IPI评分、病理分型及FOXP1 的表达对患者的PFS和OS有显著影响（P＜0.05）；进一步将临床分期、IPI评分、病理分型及FOXP1 的表达纳入COX风险比例模型，结果表明临床分期［（RR＝1.103，95%CI：0.002～2.740，P＝0.001），（RR＝0.984，95%CI：0.019～2.666，P＝0.002）］和FOXP1 的 表 达［（RR＝0.315，95%CI：0.035～0.965，P＝0.042），（RR＝0.385，95%CI：0.119～0.834，P＝0.020）］是PFS和OS独立的预测因素，见图2。

图2 FOXP1表达与PFS、OS的关系

3 讨 论

DLBCL是成人中最常见的非霍奇金淋巴瘤，在形态学、遗传学及免疫表型上都有明显的异质性，至今仍未确立明确的预后分子标记物和分子模型。近年来尽管在传统的以蒽环类为基础的CHOP方案中增加利妥昔单抗的应用使DLBCL 患者的预后得到明显的改善［10］，但仍有部分患者难以CR 或复发后治疗效果有限，这就需要找到更加准确的治疗靶点和预后标记物，从而进一步的提高DLBCL患者的疗效和改善预后。

FOXP1蛋白是一种由677个氨基酸组成，相对分子质量约为75×103的翼型螺旋转录因子，隶属于FOXP亚家族。在B细胞的不同分化阶段的均有表达，但不表达于浆细胞，与B细胞发育和成熟、胚胎正常发育、心肌细胞发育、人类和禽类言语形成及运动神经元多样性和连接性相关［11-14］。研究显示，FOXP1蛋白的表达与DLBCL 患者的预后相关，FOXP1表达失调在DLBCL的发病机制中可能起着重要作用［14］。也有研究认为FOXP1的表达与DLBCL患者的预后无关。本研究结果显示，FOXP1 在40 例DLBCL 组织中的阳性表达率为50.0%，高于国外文献结果（18%～40%），其中，non-GCB 型DLBCL阳性表达率为69.2%。FOXP1主要表达于non-GCB型DLBCL，与国内外多数研究结果相同［7，15］，但其表达的百分数却与其他研究结果一样参差不齐，造成这些差异的原因可能是准备组织的方法不同，或是样本自身差异所致，也可能是由于FOXP1表达阳性的评价标准不同。40例DLBCL患者2年PFS为52.5%，2年OS为82.5%，均优于胡成如等［15］对85例经CHOP方案治疗的DLBCL患者研究的生存期（2年PFS为46.5%，2年OS为68.8%），这可能与R-CHOP方案疗效优于CHOP方案有关。Kaplan-Meier分析显示FOXP1 阳性表达者的预后差于阴性表达者，FOXP1阳性提示预后不良。多因素回归分析显示，临床分期和FOXP1 的表达是DLBCL 的PFS和OS的独立预测因素。

本研究发现，FOXP1主要表达于non-GCB 型DLBCL，且FOXP1的表达与DLBCL的预后密切相关，可以作为其预后标记物，提示预后不良。这意味着可以针对性的以FOXP1蛋白作为靶点进行进一步研究，为治疗DLBCL 开辟新的治疗方法和思路，从而有望进一步提高患者的疗效和改善其预后。

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