天麻提取物灌胃给予大鼠后入血成分研究

魏雅蕾，蔡 伟，张志超，杨玉琴，李广雷，昶国平，刘博 ，张宏桂

（北京中医药大学中药学院，北京 100102）

天麻提取物灌胃给予大鼠后入血成分研究

魏雅蕾，蔡 伟，张志超，杨玉琴，李广雷，昶国平，刘博 ，张宏桂

（北京中医药大学中药学院，北京 100102）

目的确证天麻入血成分信息。方法大鼠禁食12 h，灌胃给药，给药量为 2 mL／100 g，固相萃取(SPE)法进行血浆处理，运用HPLC-LTQ-Orbitrap MS法对进入大鼠血液的天麻化学成分进行检测。结果共检测到10种入血成分。结论除了天麻苷，天麻中还有对羟基苯甲醛、3，4-二羟基苯甲醛、p-ethoxymethylphenyl-1-O- -glucopyranoside、羟基苄基-1-O- -D-吡喃葡萄糖、邻苯二甲酸二甲酯、4，4′-二羟基二苄基醚、4，4′-二羟基二苯基甲烷、天麻醚苷、2-乙氧基-4-甲基苯酚进入血液，均为酚性化合物及其苷类。

天麻；化学成分；HPLC-LTQ-Orbitrap MS；碎片离子

天麻 Gastrodia elata Bl．为兰科植物天麻的干燥块茎，又名赤箭、定风草等，主产于我国西南地区[1-3]，其性味甘平，归肝经，具有止痉、息风、平肝、祛风的作用，治疗眩晕、头痛、中风、偏瘫以及其他神经性疼痛效果显著[4-6]。近年来，液质联用技术因其不可比拟的高灵敏度和选择性，可快速获得丰富的信息量，广泛应用于药物定性和定量分析、结构鉴定和代谢转化等研究[7-9]。目前，天麻入血成分尚未见报道。本研究中采用液质联用技术，对天麻进入血液的化学成分进行分析，为后续天麻的化学物质基础研究和体内药效学、代谢研究奠定了基础[10-11]。

1 仪器与试药

Accela 600 pump型高效液相色谱仪与 LTQ-Orbitrap XL质谱，配有电喷雾离子源（ESI），Xcalibur 2．1工作站（美国 Thermo Scientific公司）；Sartorius CP225D型(万分之一)天平；DZ-2BC型烘箱(天津市麦斯特仪器有限公司)；B-220型恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)；KQ5200E型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；Waters高效液相色谱仪(Waters 1525泵，Waters 2489UV检测器)。甲醇（色谱纯，批号为148671，Fisher公司，）；天麻苷（批号为K01016CB14，上海源叶生物科技有限公司）；天麻购自安国药材市场，经北京中医药大学张贵君教授鉴定为 Gastrodia elata Bl．的干燥块茎。

2 方法与结果

2．1 动物与给药方案

SPF级 SD雄性大鼠10只，体重250～280 g，由北京市维通利华实验动物技术有限公司提供（动物许可证号为 SCXK＜京＞2012-0001），屏障环境饲养1周，给药前禁食12 h。取90 g天麻饮片，10倍量50%乙醇回流提取2 h，减压浓缩，蒸干，水复溶，作为试验用药。试验组（5只）每只给药量为每100 g体重2 mL，空白组（5只）给予等量生理盐水。

2．2 样品处理

试验组大鼠给药后0，0．5，1，2，4 h于眼眶内眦静脉丛取血，血液置加入肝素钠的EP管中，4℃，4 500 r／min离心10 min，合并上清液。血浆样品用固相萃取(SPE)小柱除血浆蛋白，合并洗脱液，于30℃水浴中通氮气流挥干，残渣加入200 μL甲醇复溶，涡旋振荡1 min，4℃，10 000 r／min离心15 min，取上清液10 μL进样。空白血浆样品处理方法相同。

2．3 检测条件

色谱条件：色谱柱为Thermo C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相A为甲醇，B为水，梯度洗脱(条件见表1)；流速为1 mL／min；柱温为30℃；进样体积为10 μL。

表1 流动相洗脱条件

质谱条件：LC／MS LTQ Orbitrap耦合ESI源，电喷雾离子源在负离子模式下运行，参数为电压3 kV，毛细管温度350℃，鞘气30 arb，辅助气 10 arb，精确相对分子质量采用外质量校准法（＜1．0×10-6）。

2．4 检测结果

空白血浆、给药后大鼠血浆样品按2．2项下方法处理后，空白血浆、天麻提取物、给药后大鼠血浆按2．3项下条件进样检测，总离子流（TIC）图见图1。通过与空白血浆、天麻提取物的比较，根据各种物质的分子质量、保留时间、离子碎片可以推测有10种成分进入血液，见表2。

图1 TIC图

表2 天麻进入大鼠血浆中的10种化学物质

3 讨论

通过与提取物中化学成分的准分子离子峰、保留时间、离子碎片比较，给药大鼠血浆样品中共检测出10个化合物。除天麻苷外，还有9种化学成分进入血液，均为天麻化学成分中的酚性化合物及其苷类。在负离子模式下，酚酸类成分及一级质谱中都产生丰度较高的准离子峰[M-H]-；而在 MS2中，酚酸类成分会产生[M-H-H2O]-、[M-H-CO]-等碎片离子，是由于其含有羟基和特征基团的原因。本研究初步确立了天麻的化学物质基础，为以后制剂质量标准研究、药效学研究奠定了基础。

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Constituents in Rat Plasma after Oral Administration of the Extract of Gastrodia Elata Bl．

Wei Yalei,Cai Wei,Zhang Zhichao,Yang Yuqin,Li Guanglei,Chang Guoping,Liu Boxuan,Zhang Honggui
（College of Chinese Medicine,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing,China 100102）

Objective To obtain the constituents ofGastrodia elata Bl．in rat plasma．M ethods The rats were fasted 12 h before administration,and the orally dose was 2 mL／100 g．The plasma samples were pre-treated with C18solid-phase extraction(SPE) method．The constituents in rat plasma were analyzed by HPLC-LTQ-Orbitrap MS．Results A total of 10 constituents were detected．Conclusion In addition to gastrodin,3,4-dihydroxybenz aldehyde,p-hydroxybenzaldehyde,dimethyl phthalate,gastrodeoside,2-ethoxy-4-methylphenol,p-ethoxymethylphenyl-1-O-β-glucopyranoside,4-hydroxybenzyl-β-D-glucopyranoside,4,4′-dihydroxydibenzyl ether and 4,4′-dihydroxydibenzyl methane are into blood as well,they are phenolic compounds and glycosides．

Gastrodia elata Bl．;constituent;HPLC-LTQ-Orbitrap MS;fragment ions

R285.5；R282.71

A

1006-4931(2015)21-0008-03

魏雅蕾，女，硕士研究生，研究方向为西药研发和药物体内吸收与代谢，（电子信箱）wei_yalei2013＠163．com。

2015-03-04)

国家自然科学基金资助项目，项目编号：31070328。