RP－HPLC法测定三七接骨丸中芍药苷的含量

王玲华，邹　芃

(1.东营市食品药品检验中心，山东东营257091;2.济南市机关医院，山东济南250021)

RP－HPLC法测定三七接骨丸中芍药苷的含量

王玲华1，邹芃2

(1.东营市食品药品检验中心，山东东营257091;2.济南市机关医院，山东济南250021)

摘要:目的建立高效液相色谱法测定三七接骨丸中芍药苷的含量。方法采用Kromasil 100－A C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)，柱温30℃，检测波长230 nm。结果芍药苷进样量在0.118 2～1.182 0 μg范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率为99.12%，RSD为0.66%。结论该方法操作简便，重现性好，结果准确，可用于三七接骨丸中芍药苷的含量测定。

三七接骨丸为东营市正骨医院的医院制剂，由三七、续断、白芍、赤芍等13味药材组成，具有活血化瘀，消肿止痛的功效［1，2］。临床用于主治瘀血凝滞证，适用于跌打损伤引起的骨折及软组织损伤［3，4］。方中赤芍具有清热凉血，散瘀止痛的功效，白芍具有养血、止痛的功效，是化瘀止痛的重要药味［5，6］。芍药苷为赤芍和白芍的主要药理活性成分［7］，所以建立了对该制剂中芍药苷进行含量测定的方法，该方法简便、准确、专属性强，从而保证临床用药的安全性和有效性。

1　仪器与试药

1.1仪器Agilent 1100高效液相色谱仪; Sartorius CP225D电子天平; KQ－300E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2试药三七接骨丸(东营市正骨医院，编号为1～3) ;芍药苷对照品(批号: 110736－201136，含量以96.0%计，中国食品药品检定研究院) ;乙腈为色谱纯，纯净水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱: Kromasil 100－A C18(4.6 mm×250 mm，5 μm) ;流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)［8］，柱温30℃，检测波长230 nm;进样量: 10 μL;理论板数:按芍药苷峰计算为12 593。

2.2对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品10.26 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取对照品溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液制备取本品研匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率: 300 W，频率: 40 kHz) 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性对照溶液制备取按三七接骨丸处方比例除去赤芍和白芍的阴性样品，按“2.3”项下的制备方法制备阴性对照溶液。

2.5专属性试验分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱保留时间相同的位置上，有相应的色谱峰，且阴性对照色谱中在与芍药苷相应保留时间处，无干扰峰出现，说明处方中其他药味对测定结果无干扰，色谱图见图1。

图1　HPLC色谱图A.对照品; B.供试品; C.阴性对照

2.6线性关系考察精密吸取芍药苷对照品溶液(0.059 10 mg·mL－1) 2、5、10、15、20 μL，注入液相色谱仪，依法测定。以芍药苷对照品进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程: Y=4 678.257 1X－4.623 3，r=0.999 9 (n=5)。结果表明，芍药苷进样量在0.118 2～1.182 0 μg之间其与峰面积呈良好的线性关系。

2.7精密度试验精密吸取“2.2”项下的对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，重复进样6次，记录色谱峰面积，计算芍药苷色谱峰面积的RSD为0.21%，表明精密度良好。

2.8稳定性试验精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12 h测定，记录色谱峰面积，计算芍药苷色谱峰面积的RSD为0.64%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.9重复性试验取样品，共6份，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备，测定，计算含量，芍药苷平均含量为3.962 8 mg·g－1，RSD为0.86%，表明重复性良好。

2.10加样回收率试验精密称取已知含量的样品(芍药苷含量为3.962 8 mg·g－1)，共6份，每份0.25 g。精密加入芍药苷对照品甲醇溶液(含芍药苷0.197 0 mg·mL－1) 5.0 mL，精密加入甲醇50 mL，按供试品溶液制备方法制备，并按上述测定条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1　回收率测定结果(n=6)

2.11样品测定取3批样品，按建立的方法测定芍药苷的含量。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪进行测定，以外标法计算含量。结果1～3号样品中芍药苷的含量分别为3.96、3.80、3.91 mg·g－1。

3　讨论

3.1含量测定提取方法考察为了保证含量测定的准确性，对供试品溶液制备方法中超声提取时间(15、30、45、60 min)进行考察，结果采用超声30 min为宜。3.2含量测定流动相考察选择流动相时，分别考察了乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－0.05 mol·L－1磷酸二氢钾溶液等流动相组成，结果表明乙腈－0.1%磷酸溶液为流动相，所得色谱峰峰形较好，而且操作便捷。

3.3含量测定耐用性考察同时对Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Shim－pack VPODS(4.6 mm×250 mm，5 μm)等色谱柱按上述色谱条件进行试验，结果色谱峰的峰形均较好，说明建立的三七接骨丸中芍药苷含量的测定方法耐用性较好。该方法操作简便，专属性强，是控制该制剂内在质量的可行方法。

参考文献:

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010: 96，147.

［2］辛爱玲，郭润琴.三七接骨丸中三七的质量控制标准研究［J］.海峡药学，2014，26(9) :55－58.

［3］张虹，李淑芳.高效液相色谱法测定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量［J］.中医药临床杂志，2012，24(5) : 461－462.

［4］韩军涛.三七接骨丸治疗colle's骨折40例［J］.中医研究，2008，21(9) :73－74.

［5］王嘉林，程芳，赵静，等.三七接骨丸中四环三萜类类皂苷的含量测定及制粒稳定性研究［J］.中国药师，2014，17(11) :1873－1875.

［6］张虹.三七接骨丸的质量标准研究［D］.长沙:湖南中医药大学，2012.

［7］李捷玮，金柔男，李翔.多种中成药中芍药苷的含量测定［J］.药物分析杂志，2009，29(9) :1440－1443.

［8］程东方，谢纪珍，贾元印.HPLC法测定血康颗粒中芍药苷的含量［J］.药学研究，2013，32(3) :150－152.

·临床药学·

关键词:反相高效液相色谱法;三七接骨丸;芍药苷

Determination of paeoniflorin in Sanqi Jiegu Pills by RP－HPLC

WANG Ling-hua1，ZOU Peng2
(1.Dongying Inspection Center for Food and Drug，Dongying 257091，China;2.Jinan Municipal Organs Hospital，Jinan 250021，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a RP－HPLC method for the determination of paeoniflorin in Sanqi Jiegu Pills.Methods The method was performed on a Kromasil 100－A C18(4.6 mm×250 mm，5 μm) column with acetonitrile －0.1%phosphoric acid (12∶88) .The column temperature was 30℃.The detection wavelength was 230 nm.Results There was a good linear relationship between the absorption area and the concentration in the range of 0.118 2～1.182 0 μg for paeoniflorin.The average recovery of standard addition were 99.12%，RSD=0.66% (n=6) .ConclusionThis method was simple，accurate and can be used for the quality control of Sanqi Jiegu Pills.

Key words:RP－HPLC; Sanqi Jiegu Pills; Paeoniflorin

作者简介:王玲华，女，主管中药师，研究方向:药品检验，E－mail: dywanglinghua@163.com

中图分类号:R927.2

文献标识码:A

文章编号:2095－5375(2015) 10－0579－003