鸡新城疫的症状与实验室诊断

鸡新城疫的症状与实验室诊断

吴佳宁

(沈阳市动物疫病预防控制中心110000 )

新城疫(ND)是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。

1临床症状

患鸡体温升高到43～44℃，精神沉郁或闭眼嗜睡，病鸡腹泻呈黄白色或绿色，有时带血，常摇头、嗳气，发出“咯咯”声，口和鼻中有多量黏液，嗉囊内积液，病程稍长或呈慢性经过时，常有腿、翅麻痹或头、颈歪斜等神经症状。剖检特征病变是腺胃的乳头突起部或黏膜上有点状或斑状出血，有时形成溃疡，尤其在腺胃与食道交界部更为明显。肌胃黏膜上有点状或不正形的出血斑点。肠道、尤其是盲肠扁桃体和小肠黏膜(迥言瓣部)以及直肠黏膜上出血和不同大小界限清楚、出血性纤维素坏死伪膜，其他各部位如心、腹部脂肪及喉头、气管等处都有出血斑点。

2病毒分离

材料应采自早期病例，慢性病例不适宜于分离禽病毒，病鸡扑杀后应用无菌手术采取脾、肾、肝、肺(通常有较高的病毒滴度)，脑(病毒的存在时间较其他组织长)或骨髓(最不易被细菌污染)等组织。生前可用灭菌棉拭子获取呼吸道或泄殖腔分泌物。将棉拭子浸出液或经研磨的组织悬液制成1:5～10乳剂，每毫升加青、链霉素各1000～2000单位，以抑制可能污染的细菌，置冰箱中作用2～4小时，然后离心沉淀，取其上清液作为接种材料。

2.1　鸡胚接种

常用9～10日龄的鸡胚，每份病料至少注入5个鸡胚，接种于绒毛尿囊膜或尿囊内。照蛋，划出气室位置，在鸡胚胎面观看胚胎活动，选择无大血管处标一记号。在气室顶部和标记处用碘酊和酒精消毒，并各钻一小孔。用较干的碘酊棉球涂布小孔。用1 mL注射器吸取上述处理过的材料，插入小孔内约3mm，缓缓注入0.1～0.2mL，拔出针头。用融化石腊封口，在蛋壳上标明日期。置37℃温箱培养，每天照蛋二次，至全部或大部分鸡胚发生死亡为止(24h内死亡的胚弃之)。将死胚收藏于4℃冰箱内，气室向上，6～24h获尿囊液。

收获尿囊液时，以碘酊涂擦气室和气室附近的蛋壳，用灭菌摄子将气室处蛋壳敲破，剥去蛋壳，用另一灭菌小镊子剥去蛋壳膜，并撕破绒尿膜，暴露出清晰的尿囊液(混浊者已污染，应弃去不收)，以镊子将胚胎和胚膜压向一边，吸取尿囊液于灭菌瓶中，并加标签。

用透明而无菌者作血凝反应，可在96孔微孔板上进行，也可将尿囊液一滴与1%～2%鸡红细胞悬液一滴在一块白瓷板上相混和，如发生红细胞凝集，即用已知抗鸡新城疫血清作血球凝集抑制试验(HI)，出现抑制反应，便可得到确诊。

2.2　组织培养(细胞培养)

鸡新城疫病毒能在禽源原代细胞，一些哺乳动物的原代细胞和细胞系中生长繁殖，因此也可用细胞培养的方法来分离病毒。最常用的是在玻璃和塑料容器内长成单层的鸡胚成纤维细胞。操作时可将待检液作一系列十倍比的稀释，分别注入到鸡胚成纤维细胞的培养管中，24～48h出现细胞病变(细胞圆缩颗粒化，拉长呈蜘蛛网或干枝梅样)，取培养液作HA和HI试验，鉴定病毒。也可在细胞培养中用已知血清进行中和试验，作出鉴定结果，如将待检材料注入鸡胚成纤维细胞的平皿培养中。新城疫强毒通常出现大而透明或大而红色蚀斑(2～4mm)。根据蚀斑形成单位可测定病毒浓度。

3血清学检查

由于循环抗体产生后，病毒可从寄主的组织中迅带消失，所以慢性病例难于分离病毒，应通过特异抗体的检查来间接诊断此病。通常中和抗体较血凝抑制(HI)抗体维持时间要长些，但中和试验较费时花钱，而HI试验能在短时间内作大量测定，检出的抗体滴度一般相当于中和滴度。因此常用HI试验来检查抗体。抗体滴度于感染后5～7d开始上升，15～20d可达高峰且能维持较长时间，受强毒感染而耐过的鸡在体内产生极高的抗体水平，滴度高达11(Log2)以上。在感染群内出现高抗体的数量随鸡群原有的抗体水平而异，与鸡的年龄也有关系，平均可达30%，在只有少数出现症状，不断发生死亡的鸡群中，可对活鸡进行抗体检测。如有较多高抗体鸡的出现，说明鸡群已受过新城疫野毒感染。免疫过较长时间的鸡群持续保持高水平的抗体，可能是隐性感染或慢性感染的结果。