苦豆子灌注剂质量的检测

辛任升，刘　宇，梁剑平（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，农业部兽用药物创制重点实验室，甘肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州730050）



苦豆子灌注剂质量的检测

辛任升，刘宇，梁剑平＊
（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，农业部兽用药物创制重点实验室，甘肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州730050）

摘 要：为建立苦豆子灌注剂的质量标准，采用薄层色谱法（TLC）法对苦豆子灌注剂进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定槐定碱含量。TLC中，苦豆子灌注剂与槐定碱对照品在相应位置上显相同颜色的斑点，且专属性强、分离效果好；槐定碱进样量在0.2mg/mL～1mg/mL（r=0.999 6）范围内线性关系良好，平均加样回收率为98.84%（RSD=0.338%，n=6）。因此，所建标准测定方法简单，重现性好，可用于该制剂的质量控制。

关键词：苦豆子灌注剂；槐定碱；质量标准；高效液相；薄层色谱

苦豆子（Sophora alopecuroides）是豆科（Leguminosae）槐属（Sophora）多年生草本植物［1］，主要分布于我国北部荒漠与半荒漠地区，以宁夏、甘肃、青海、新疆及内蒙古为多，种群生长茂盛［2］。苦豆子野生资源丰富，用途广泛，不仅是优良抗盐碱和固沙植物，还是重要的药用植物资源，具有很高的开发利用价值。苦豆子味苦、性寒、有毒，具有清热解毒，抗菌消炎、止痛杀虫等作用［3-4］，含有生物碱、黄酮等多种化学成分［5］。中兽药制剂的质量直接影响着其在使用时的有效性和安全性，建立科学可行的质量控制体系对中兽药制剂的研发甚至中兽药事业的发展具有重要的意义［6］。因此，建立完善的苦豆子灌注剂的质量标准势在必行。

1　材料与方法

1.1材料

美国Agilent色谱仪包括1290LC色谱工作站、G4212A检测器、G1316C柱温箱、G42226A自动进

样器、G4220B二元泵，PHS-3C型精密pH计，KH-300DB型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），苦豆子灌注液（本实验室自制），槐定碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号110784-201306），硅胶板试剂（青岛海洋化工厂，批号20130411）甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。

1.2方法

1.2.1鉴别

1.2.1.1性状 本品为棕褐色、味微苦的液体，装于灌注器中，每管20mL。

1.2.1.2鉴别方法 精密量取本品1mL置于蒸发皿中，水浴加热并挥干水分后，用氯仿溶解过滤，并定容于100mL容量瓶中作为供试液。精密称取槐定碱对照品10mg，用氯仿溶解并定容于10mL容量瓶中作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版第二部附录V B）试验，吸取上述两种溶液各2μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨水（5∶0.6∶0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液显色，观察结果。

1.2.2槐定碱含量测定

1.2.2.1色谱条件 色谱柱为Agilent HC-C18 （4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇，3mL/L磷酸（70∶30），检测波长为205nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL，理论塔板数不低于5 000，在此条件下，槐定碱与其他组分能达到较好的分离。

1.2.2.2对照品溶液的制备 精密称取槐定碱10.0mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，配成1mg/mL的溶液。

1.2.2.3供试品溶液的制备 从5支灌注剂中各取1mL，分别置于蒸发皿中，水浴加热，挥干水分，用甲醇溶解并定容于100mL容量瓶中，作为供试品溶液；纯甲醇作为空白溶液。

1.2.2.4线性关系考察 精密吸取槐定碱对照品溶液2、1.6、1.2、0.8、0.4mL置于2mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。按色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，槐定碱对照品浓度为横坐标作图，得线性回归方程。

1.2.2.5精密度试验 按上述色谱条件，以浓度为0.4mg/mL的槐定碱标准溶液分别进样5次，每次5μL，以峰面积计算RSD。

1.2.2.6重复性试验 取同一批号20130612样品6份，按供试品溶液的制备方法处理，按上述色谱条件测定，计算峰面积与RSD。

1.2.2.7稳定性试验 取批号20130612样品，按供试液制备方法处理，分别于不同时间（1、2、3、4、5、6、7、8h）测定，测得峰面积，计算RSD。

1.2.2.8加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品（批号：20130612）1mL，共5份，按供试品溶液制备方法制取，分别精密加入槐定碱的对照品0.5mg，测定槐定碱含量，计算回收率。

1.2.2.9样品测定 取本品3批不同批号的样品各1mL，按供试品溶液的处理方法处理，测定计算样品含量。

1.2.3初步稳定性试验 取3批样品（20130610、20130612、20130614）置于37℃，相对湿度75%（饱和氯化钠溶液）环境下贮存。以当月考察为0月，以后每月考察1次，连续考察3个月。与试验开始时比较，各项指标均无明显变化，表明苦豆子灌注剂在此条件下质量稳定。

2　结果

2.1TLC结果

供试品溶液所显示斑点的位置和颜色与对照品溶液的主斑点相同，Rf值为0.67。槐定碱的TLC见图1。

图1　TLC色谱图Fig.1 TLC chromatogram

2.2槐定碱含量测定结果

2.2.1色谱图 结果见图2和图3。

2.2.2线性关系考察结果 线性回归方程为y= 10 991x-4.666 3（r=0.999 6，n=5），结果表明，对照品在0.2mg/mL～1.0mg/mL范围内线性关系良好（图4）。

2.2.3精密度试验结果 对照品溶液RSD为0.75%，表明该方法精密度良好。

图2　槐定碱标准品Fig.2 The chromatogram of Sophoridine standard

图3　样品色谱图Fig.3 The chromatogram of sample

图4　槐定碱标准曲线Fig.4 Standard curve of sophoridine

2.2.4重复性试验结果 6份样品溶液的峰面积平均值为7 162.2，RSD为1.12%。结果表明该测试方法的重复性良好。

2.2.5稳定性试验结果 20130612样品RSD为0.56%（n=8），表明样品制备后8h内稳定。

2.2.6加样回收率试验结果 加样回收率试验结果见表1，平均回收率为98.84%（n=6），RSD为0.338%，表明该法测定结果准确，可信度高。

2.2.7样品含量测定结果 批号20130610、20130612、20130614样品含量分别为131.53、130.58、133.03mg/mL。根据测定结果，暂定本品1mL含槐定碱不得低于120mg（表2）。

表1　苦豆子灌注剂加样回收率结果Table 1 Recovery rate of Sophora alopecuroides perfusate

表2　苦豆子灌注剂中槐定碱的含量Table 2 The content of sophoridine in Sophora alopecuroides perfusate

3　讨论

取适宜浓度的槐定碱对照品在190nm～400 nm波长范围内进行扫描，结果槐定碱在205nm有最大吸收。因此，选用205nm作为槐定碱检测波长。苦豆子总碱中以槐定碱居多，含量为32.63%［5］，而本制剂所用苦豆子总碱中，槐定碱含量高达65%，因此，选用槐定碱作为该制剂质量标准的考察指标。

在高效液相测定含量时，参照相关文献，先后用NH2柱，以乙腈-无水乙醇-pH2磷酸水溶液（80∶10∶10）为流动相［7］，用C18柱，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾梯度洗脱［8］，以1mL/L冰醋酸水溶液-甲醇（90∶10）为流动相［9］，以甲醇-水-三乙胺（55∶45∶0.2）为流动相［10-11］，以乙腈-含2.0mL/L三乙胺的0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液（90∶10）为流动相［12-13］，以1 mL/L冰醋酸水溶液（三乙胺调pH5.5）-甲醇（90∶10）［14］等均不能达到很好的分离效果。而选用甲醇：2mL/L磷酸水溶液（70∶30）为流动相，槐定碱色谱峰能够完全分离，分离度大于1.5，且阴性样品无干扰。

综上所述，所建标准可用于苦豆子灌注剂的质量控制方法。

参考文献：

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［13］ 刘振龙，张 丽，魏蕾初，等.HPLC同时测定苦豆子总碱中8种生物碱含量［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（8）：142-145.

［14］ 杨 晋，朱桂花，张砾岩.RP-HPLC法同时测定苦豆子中5种生物碱［J］.中药材，2010，33（6）：929-931.

Quality Detection of SophoraalopecuroidesPerfusate

XIN Ren-sheng，LIU Yu，LIANG Jian-ping
（Key Laboratory of New Animal Drug Project，Gansu province/Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutics Discovery，
Ministry of Agricultural/Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS，Lanzhou，Gansu，730050，China）

Abstract：To establish quality standard of Sophora alopecuroides perfusate，TCL and HPLC methods were used for qualitative identification and quantitative determination of sophridine.Sophoridine content was determined by RP-HPLC.TLC spots of sophoridine was same to that of Sophora alopecuroides perfusate in terms of color and site；the method was specific and TLC spots were well-separated.The linear ranges of sophridine and oxymatrine were 0.2 mg/mL-1 mg/mL（r=0.999 7），and average recovery rate was 98.84%（RSD=0.338%，n=6）.The results showed that the method is proved to be simple，reproducible and can be used for quality control of the preparation.

Key words：Sophora alopecuroides perfusate；sophoridine；quality standard；TLC；HPLC

通讯作者

作者简介：辛任升（1987-），男，山东青岛人，硕士，主要从事中草药开发与利用研究。＊

基金项目：“十二五”农村领域国家科技计划项目（2011AA10A214）

收稿日期：2014-11-04

中图分类号：S853.72

文献标识码：A

文章编号：1007-5038（2015）05-0055-04