不同产地瓦松活性成分初步研究

肖杰，柴军红，杨春文，何婷婷，许丽颖

(牡丹江师范学院生命科学与技术学院，黑龙江牡丹江157011)

不同产地瓦松活性成分初步研究

肖杰，柴军红，杨春文，何婷婷，许丽颖

(牡丹江师范学院生命科学与技术学院，黑龙江牡丹江157011)

目的：讨论不同产地瓦松提取物活性成分差异，以期为瓦松应用开发提供理论基础。方法：采用系统化学检测法研究瓦松水提物及醇提取物成分差异；采用HPLC法，对水提物正丁醇萃取相进行了讨论，研究其差异。结果：不同产地瓦松水提物及醇提物存在一定差异。结论：相对来说辽宁、黑龙江所产瓦松活性成分较为丰富，相对含量较高。

瓦松；活性成分

瓦松 (OrostachysFisch)是景天科的瓦松属，全草入药，具有清热解毒、止血、利湿、消肿的功效、用于吐血、痔疮、湿疹、血痢、疟疾等症状[1-2]。2005版药典首次收录。主要成分是黄酮类、有机酸、萜类、氨基酸[2-4]等。现阶段相对研究较少，主要集中在相关中药制剂、抑菌、降糖等方面，但对于不同产地瓦松属植物活性成分差异研究相对较少。

本文以黑龙江、辽宁、甘肃、河北所产瓦松属植物瓦松[5](经牡丹江师范学院于爽副教授鉴定分别为狼爪瓦松、瓦松、黄花瓦松、塔花瓦松。标本现存于牡丹江师范学院-生科院标本室，后面研究以地方为代称)为对象，采用系统化学检测及HPLC研究化学成分变化，希望为瓦松属植物开发利用、活性成分提取纯化提供一些理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

正丁醇(AR)，石油醚(AR)，山柰素(贵州迪大生物技术公司)，香草醛(AR，辽宁世星药化)高氯酸(AR)氢氧化钠(AR)，硫酸铜(AR)，乙醇(AR)，硫酸(AR)，三氯化铁(AR)，硅钨酸(AR)，鞣酸(AR)，醋酐(AR)，溴酚兰(AR)，过氧化氢(AR)，乙酸乙酯 (AR)磷酸(AR),色谱级甲醇等。

1.2 主要仪器

HH-6恒温水浴锅(常州华奥)，FZ102植物粉碎机(天津泰斯特仪器公司)，UV-2010紫外可见分光光度计(日立)，BS214D电子天平(德国赛多利斯)，RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣)，索氏提取装置；高效液相色谱仪(美国Waters)；PAD紫外吸收检测器；超声波清洗器；离心机(美国贝克曼)等。

1.3 原料的预处理及预试溶液的制备

把黑龙江、辽宁、甘肃、河北各地的瓦松全草用粉碎机打成粉状，过30～40目筛，备用。

水提取液的制备：分别称取不同产地的瓦松的干粉100g，加入1000mL蒸馏水，90℃下水浴提取2h，过滤，适当浓缩用于测定氨基酸、多肽和蛋白质、糖类、皂苷、酚类等成分。

乙醇提取液的制备：分别称取不同产地瓦松的干粉30g，加入300mL 75%乙醇，水浴回流提取2h，过滤，用于测定有机酸、生物碱、酚类和鞣质、黄酮、萜等成分。

同上醇提法，乙醇浓度为95%，将其提取液浓缩至原体积1/10,依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取溶剂，浓缩、干燥备用，本文主要对正丁醇萃取相进行讨论。

1.4 液相色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(C18)；

流动相：以甲醇-0.5%磷酸溶液(43∶57)；

检测器：PDA(200～400nm全波长扫描)；

柱温：30℃；进样量：waters2696E自动进样器 5～10μL 。

2 结果与讨论

2.1 水提取液检测结果

如表1所示：以上不同产地瓦松中活性成分存在差异，对于黑龙江及甘肃瓦松其中氨基酸蛋白物质，含量相对是较低(进一步采用考马斯亮兰G-250验证显阳性)。所有瓦松中醇提物加热沉淀显示应为鞣制或其它成分(可能为相对溶解度低的糖苷类)。相对于酚类，由于均含有黄酮类所以基本显示阳性。由于瓦松大多含有草酸、没食子酸等，这与文献[5-7]结果一致。皂苷、甾类、萜类是瓦松主要活性成分之一，预实验表明，甘肃、河北产瓦松在此存在差异，部分显阴性，表明在苷元含量或种类可能存在差异，这也与杨林[8]课题组研究的部分结果相似。河北瓦松在甾类上明显存在差异，笔者通过对购买的3个批次，进一步研究发现，不同批次差异明显，其中6～7月份河北所产瓦松甾类，显示阳性反应、其它月份不明显。所以笔者认为这与采摘季节可能有关系，进一步可以开展相关研究。同时进行Keller-Kiliani(K-K)反应发现，黑龙江及辽宁瓦松显示阳性反应，初步判断可能含有强心苷成分。对于蒽醌类碱液反应阳性，醋酸镁反应均阴性，表明可能含有蒽醌类。生物碱反应表明以上只有黑龙江瓦松可能含有生物碱。碘-碘化钾氧化反应显示可能与其含有的黄酮、酚类有关系。香豆素、内酯研究表明,黑龙江、辽宁正反应明显，显示含有相关物质，河北、甘肃相对不是很明显，单一实验表明可能含有。以上存在差异，表明亚种之间成分存在差异。

表1 化学成分系统预试结果

注：“+”阳性反应；“-”阴性反应。

2.2 萃取相HPLC法研究

依据1.3提取方法，得到的萃取相，置于恒温水浴锅中，挥发正丁醇至干，色谱甲醇进行溶解，12000 r /min下离心10min，取其上清液并定容，即得。

图1 辽宁瓦松的液相色谱图

图2 河北瓦松的液相色谱图

图3 黑龙江瓦松的液相色谱图

图4 甘肃瓦松的液相色谱图

由图1～4所示，其正丁醇萃取相中黑龙江和甘

肃瓦松具有显著相似性，相对来说河北瓦松在相同条件下，相对以上主体成分Ⅰ、Ⅱ含量差异明显，辽宁瓦松成分与黑龙江及甘肃瓦松在色谱图中存在差异。为了进一步研究成分差异，采用盐酸水解反应，研究表明，以上成分主体为山奈素、异槲皮素及齐墩果酸类物质。这与药典表述基本吻合，但是成分之间含量、种类有差异，所以，下一步有必要对其成分进行细化研究，有必要对萃取相展开相关液相指纹图研究。

3 结论

综上所述，不同亚种瓦松成分存在较明显差异，初步研究表明：就成分种类而言，黑龙江、辽宁所产瓦松成分相对复杂，河北瓦松成分种类相对较少，黑龙江瓦松中发现可能含有强心苷成分。进一步可以开展相关研究。其液相实验表明:不同亚种萃取相存在明显差异，所以有必要依照相关企业应用工艺，开展其萃取相指纹图研究，进一步提高瓦松应用的科学性。

[1]左春旭,李凤琴.几种天然药物的研究开发[J].中草药,1996,27：202-205.

[2]郑艳,巩劼,陈士超，等. 瓦松的形态解剖学研究[J].植物研究，2003, 23(2)：164.

[3]郑万金,仲英.瓦松的化学成分研究[J].中草药,2009,40( 6) : 859．

[4]赵艳杰，刘晓娟.瓦松中强心成分的提取和药理作用的初步研究[J].锦州医学院学报，1992, 13(4)：13.

[5]郑艳徐，珞珊.中国瓦松属的药用资源[J].中国中医药信息杂志，2003，10(11)：41-42.

[6]任荣，柴军红，金志民，等.瓦松属植物化学成分及其生物活性研究进展[J].安徽农业科学，2011,39(22):13412-13413.

[7]王翔飞，潘旭东，刘雯霞，等.黄花瓦松中总三萜成分的含量的测定[J].中国民族民间医药，2009,10(3)：11.

[8]杨林,闫福林.晚红瓦松化学成分的研究[J].新乡医学院学报,2008,25(3)：292.

Optimization of Extraction Process for Active Components from FimbriationOrostachysHerb

Xiao Jie, Chai Junhong, Yang Chunwen , He Tingting, Xu Liying

(School of Life Science and Technology，Mudanjiang normal university, Mudanjiang 157011)

Objective： Active components from FimbriationOrostachysHerb in different areas are discussed. To provided the theoretical basis for the application development.Methods: using the method of chemical system analysis, Study on Differences of the active ingredients between alcohol extract and aqueous extract. Butanol phase of aqueous extract was discussed by HPLC.Results: there are some differences in the Active components from FimbriationOrostachysHerb in different areas. Conclusion: The active components from FimbriationOrostachysHerb of the Liaoning，Heilongjiang is more abundant, relatively high levels.

OrostachysHerb；Active components

2013-04-08

黑龙江省教育厅科学技术研究面上项目(11551514)

肖杰(1963-)，男，硕士，教授，主要研究方向为植物学，E-mail:swxxj@126.com。

R931.6

A

doi.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.01.010