32例早幼粒细胞白血病患者白血病细胞免疫表型分析

何秋阳　马顺高　钟国梁　云南省大理州人民医院检验科　671000



32例早幼粒细胞白血病患者白血病细胞免疫表型分析

何秋阳马顺高钟国梁云南省大理州人民医院检验科671000

摘要目的：探讨32例急性早幼粒细胞白血病的白血病免疫分型特点及和快速诊断方面临床意义。方法：用Pc5-CD45、单克隆抗体(CD) 和流式细胞仪对32例急性早幼粒白血病患者骨髓单个核细胞进行测定, 进行免疫表型分析。结果：32例急性早幼粒细胞白血病免疫表型分析，13种抗原检测中CD34阴性和HLA-DR阴性分别为75.0%和84.4%，阳性表达率从高到低依次为CD33> cCMPO> CD13> CD117> CD34> CD15> HLA-DR> cCD79a> cCD3, CD10, CD19> CD14, CD7。结论：早幼粒细胞的免疫表型具有独特的特征，流式细胞术对急性早幼粒细胞白血病的快速诊断、预后有着重要意义。

关键词早幼粒细胞白血病免疫表型流式细胞术

急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性髓系白血病(AML)的一个特殊类型，快速诊断APL，及时给予患者药物治疗，能够提高患者生存率和缓解率。传统方法单凭形态学、细胞化学快速诊断APL有一定困难和局限性，随着流式细胞术的发展，免疫表型已成为快速诊断APL的重要工具，它能够辅助APL快速诊断，提高APL诊断准确性。本文对32例APL免疫表型特征进行回顾性分析，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料32例均为我院2008年1月-2013年12月住院患者，均为初诊的经FAB分型确诊的APL患者。其中男21例，女11例；年龄9～68岁,平均年龄38岁。

1.2仪器与试剂美国Beckman-Coulter公司EPICS XL4型流式细胞仪，所用单克隆抗体(单抗)包括T淋系的cCD3、CD7；B淋系的CDIO、CD19、cCD79a；髓系的CD13、CD14、CD15、CD33、CD117；髓过氧化物酶(cMPO)属于非CD类抗原，用于髓系白血病及髓系分化的研究，是髓系特异性最强的标记；干、祖细胞单抗为CD34、HLA-DR：有核细胞均有表达的单抗CD45等。所有CD抗体试剂、溶血剂、清洗液、鞘液等均为美国Beckman-Coulter公司产品。

1.3方法取骨髓置于肝素抗凝管,调整细胞数至(0.5～1.0)×106/ml,采用三色流式细胞术检测胞膜抗原。每管取50μl加不同组合抗体各10μl,同时做同型对照管,混匀,避光20min,溶血后上机检测分析, 每管获取5 000个细胞, 采用CD45/SSC双参数设门,分析细胞群表面抗原表达情况。结果判断:CD45/SSC 设门中原始细胞群表面抗原阳性率≥20%为阳性。

1.4统计学处理采用SPSS19.0 统计软件包进行分析处理。

2结果

用流式细胞术检测32例APL免疫表型，13种抗原阳性表达率从高到低依次为CD33>cCMPO>CD13>CD117>CD34>CD15>HLA-DR> cCD79a>cCD3,CD10,CD19>CD14，CD7。cCMPO最高表达100%，最低表达10.8%，平均表达67.3%，阳性率93.8%，CD34最高表达74.4%，最低表达0%，平均表达19.4%,HLA-DR最高表达43.0%，最低表达0%，平均表达8.8%,T系和B系抗原也有表达，但平均表达均小于20%，而且阳性率也非常低。见表1。

表1　32例APL流式细胞术检测免疫表型(%)

3讨论

FAB形态学分型是应用范围最广泛和使用时间最长的白血病分型及诊断方法，但对仅凭细胞形态而不做细胞化学染色的实验室而言，相关疾病的误诊率是很高的[1]，然而细胞形态学观察和细胞化学方法检测对细胞的识别受检验者的经验影响和主观性强，加上白血病细胞自身的多态性和异质性，23%～36%的急性白血病难以得到准确诊断，用流式细胞术进行白血病免疫分型是根据白血病细胞表达的系列抗原，来确定白血病细胞的来源以及分化程度，提高了白血病诊断的准确性、客观性和可重复性[2]，能够客观地反映白血病细胞的来源及分化发育阶段，可以准确地鉴别急性白血病的类型，结合形态学分析，能够使诊断白血病的准确率提高到90%～99%[3]，APL细胞群因其胞浆颗粒较多,在CD45/SSC双参数设门的散点图上表现为较高的SSC和CD45中等强度表达,根据这个特点一般比较容易把早幼粒细胞群圈出来。当细胞分化至早幼粒细胞阶段, 其早期抗原CD34和HLA-DR表达下调,变为阴性,因此APL免疫表型多为HLA-DR-/CD34-，所以CD34阴性和HLA-DR阴性是诊断APL的理想指标，但表1显示分别有75.0%、84.4%的阴性率和25.0%、15.6%的阳性率，高于Wetzler等[4]认为的HLA-DR-的AML中APL和非APL数量大致相同这一结论，从32例APL流式细胞术检测免疫表型结果中还发现cCMPO虽然是髓系细胞一线标记，但仍有10.8%的阴性率, 国内也有颗粒稀少且髓系过氧化物酶染色缺乏的M3v的报道[5～7]POX染色弱阳性，免疫分型：cCMPO-/±、CD13+、CD33+；从表1还可以发现APL髓系标记CD33阳性率100%，CD13阳性率84.4%，非常符合相关文献报道。由此可见，对于诊断APL，尤其像M3V这样特殊类型的白血病，要结合细胞形态、细胞化学特殊染色、染色体及免疫分型综合分析，才能做出准确诊断，虽然免疫表型不是诊断APL的独立指标, 但可以为APL的快速鉴别与诊断提供依据,由于抗原的系列特异性不是绝对的，在白血病细胞膜上，抗原的交叉表达或缺失现象很常见，已发现越来越多共表达和表达紊乱等现象，即某一细胞系列的急性白血病共表达另一细胞系列抗原[8]。在急性白血病中多抗原的交叉表达是常见和困扰白血病分型诊断中的一个亮点，32例APL免疫表型中有1例表达CD7，有2例表达CD10、CD19，出现伴随或交叉表达现象，临床意义和诊断价值有待于我们进一步研究。

参考文献

[1]吴丽娟，刘霞，赵文利，等．129例急性白血病免疫表型特点分析〔J〕．国际检验医学杂志，2012，33(2)：132-135.

[2]Jennings CD,Foon KA.Recent advances in flow cytometry: application to the diagnosis of hematologic malignancy〔J〕.Blood,1997,90(8):2863-2892.

[3]Second MIC Cooperative Study Group．Morphologic, immunologic and cytogenetic (MIC) working classification of the acute myeloid leukaemias. Second MIC Cooperative Study Group〔J〕．Br J Haematol，1988，68(4)：487-494．

[4]Wetzler M,McElwain BK,Stewart CC,etal.HLA-DR antigen-negative acute myeloid leukemia〔J〕.Leukemia,2003，17(4):707-715.

[5]崔雯，秦爽，许议丹，等．髓系过氧化物酶和苏丹黑B染色缺乏的急性变异型早幼粒细胞性白血病2例报道〔J〕．临床血液学杂志，2002，15(5)：201-203．

[6]杜秀敏，孔立新．急性早幼粒细胞白血病变异型(M3V)1例分析〔J〕．中国误诊学杂志，2011，11(7)：1564．

[7]周建中．急性早幼粒细胞白血病骨髓原粒细胞及早幼粒细胞比例分析〔J〕．国际检验医学杂志，2011，32(11)：1246-1248．

[8]苏杭，吴晓蔓．三色流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床应用〔J〕．广东医学，2004，25(9)：1034-1036．

(编辑羽飞)

收稿日期2015-01-21

中图分类号：R733.7

文献标识码：B

文章编号：1001-7585(2015)10-1369-02