孕妇血型IgG抗体效价与新生儿溶血病发病率关系的分析

孕妇血型IgG抗体效价与新生儿溶血病发病率关系的分析

蔡忠鹤1,2，遇红梅1,刘铁梅1*

(1.吉林大学中日联谊医院 输血科，吉林 长春130033;2.吉林省妇幼保健院)

新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)是因母胎红细胞血型不合，母体的免疫系统被胎儿红细胞致敏而产生血型IgG类抗体，这种血型IgG类抗体可以通过胎盘进入胎儿的血液循环，胎儿的红细胞被母亲的IgG血型抗体包被，并在婴儿的单核巨噬细胞系统内受到破坏而引起的免疫性溶血性疾病[1]。溶血出现后继发引起胎儿或新生儿发生贫血、肝脾肿大等症状，严重者可产生核黄疸等后遗症，甚至造成胎儿死亡。在我国，母婴血型不合引起的免疫性溶血病中，ABO血型不合者最常见，Rh血型次之。因此，对怀疑可能产生HDN的孕妇进行产前血型IgG抗体的检测是预防HDN的有效方法。本实验通过检测HDN患儿溶血三项试验与血清胆红素指标，以及患儿母亲抗体效价，来分析孕妇血型抗体的效价与HDN发生率及溶血程度的关系。

1材料与方法

1.1研究对象收集2012年9月-2013年9月期间，在吉林省妇幼保健院产前检测孕妇及新生儿样本200例。样本要求：孕妇血清IgG抗A(B)≥64；生产后新生儿为足月生产；排除其他异常的患儿，出生后48 h内采集新生儿及患儿母亲EDTA抗凝血各2 ml送检血样。

1.2主要试剂与实验设备新生儿溶血病检测卡1(ABO/RHD血型，直接抗人球蛋白试验)，微柱凝胶法新生儿溶血病检测卡2(游离抗体试验、抗体释放试验)，ABO标准红细胞，FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A血型血清学专用离心机、低速离心机、酸放散试剂均由长春博讯生物技术有限责任公司提供。

1.3检测方法

1.3.1ABO/RhD血型定型及红细胞直接抗人球蛋白试验(DAT)按照试剂说明书操作和判断，将细胞用生理盐水充分洗涤3遍，最后一遍将上清去除干净，然后加100 μl抗人球蛋白试剂，3 400 rpm离心15秒，在显微镜下观察结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性。直接抗人球蛋白试验阳性说明新生儿的红细胞已经被血型IgG抗体致敏。

1.3.2游离IgG抗体试验按照试剂说明书操作和判读，取试管3支，分别标记Ac、Bc、Oc，每管中各加100 μl血清及相应A型、B型试剂。红细胞以及3人份混合的O型筛选用试剂细胞各50 μl，置37℃水浴30 min取出，用生理盐水洗涤3次，最后一次控干上清，然后在各管中加100 μl抗人球蛋白试剂，血清学专用离心机3 400 rpm，离心15 s后，判读结果。游离IgG抗体试验阳性说明在新生儿血清中有相应的IgG抗体，表明血清中仍然存在未致敏的红细胞血型IgG抗体。

1.3.3抗体放散试验用生理盐水将细胞充分洗涤4到6次，取1体积洗涤后压积红细胞加等体积的生理盐水，置56℃水浴10 min，其间不断振摇，然后在预温的离心管中以3 000 rpm，离心1 min，立即将上层红色放散液转移到另一试管中。取上清放散液分成3份，于标有A、B、O的试管中，分别加入相应的A、B、O试剂红细胞各1滴，置37℃水浴30 min，用生理盐水洗涤3次，最后一次控干上清，然后在各管中加100 μl抗人球蛋白试剂，血清学专用离心机3 400 rpm，离心10 min，判读结果。抗体放散试验阳性表明致敏红细胞通过酸放散将抗体释放出来，即可判断新生儿溶血病成立。

1.4统计学分析采用SPSS 16.0统计软件进行分析，孕妇血型抗体效价与HDN发生率计数资料采用χ2检验，以P<0.05为具有统计学意义。

2实验结果

2.1HDN的诊断对有HDN临床指征患儿进行ABO血型定型及HDN溶血3项试验，同时参考其血清胆红素检测值，诊断HDN，标准如下：①母婴ABO或Rh血型不合；②高胆红素血症；③新生儿溶血3项试验中，直接抗人球蛋白试验或血型抗体放散试验阳性。新生儿溶血3项检验阳性者确诊为新生儿溶血病，阴性者确诊为新生儿病理性黄疸。按照此标准，判断200例新生儿标本中有131例检测为阳性，69例为阴性(见表1)。

表1　200例新生儿溶血三项试验结果

2.2高危孕妇抗体效价与HDN关系在本院生产200例夫妇ABO血型不合、IgG抗A(B)效价≥64的孕妇，其产后婴儿经血型血清学试验证实为母/婴血型不合(主要为O/A，O/B，O/AB组合)ABO-HDN 131例，发生率为65.5%。血型分布间阳性率差异无统计学意义(P>0.05)(见表2)。

2.3血型IgG抗体效价与新生儿黄疸关系产后经确证为HDN患儿进行血清间接胆红素检测，对比母亲血型IgG抗体效价发现，随母体血型抗体效价的升高，患儿血清间接胆红素水平有升高趋势，说明母体血型抗体效价水平可以影响患儿血清间接胆红素水平 (见表3)。

表2　高危孕妇IgG抗A(B)效价与HDN关系

表3　母抗体效价与患儿血清间接胆红素关系

3讨论

孕妇的血型IgG抗体经胎盘进入胎儿血液循环后，与胎儿红细胞表面抗原相结合，最后这些结合抗体的红细胞被胎儿的单核巨噬细胞系统破坏，可引起胎儿的贫血、水肿、流产、死胎、早产及新生儿溶血病。对于新生儿来说危害最大的是胆红素脑病，即核黄疸，此病可造成新生儿的早期死亡。在我国，母婴血型不合所造成的新生儿溶血病以ABO血型不合最为常见，但发病较轻，常规临床治疗即可使症状减轻或消失。所以找到有效的监测新生儿溶血病的方法，对诊断和治疗HDN有重要意义。目前，检测母体IgG血型抗体效价是预测HDN严重程度的最常用的方法，所以对怀疑可能产生HDN的孕妇进行产前血型IgG抗体的检测是预防HDN的有效方法[2]。

本实验通过检测HDN患儿溶血3项试验与血清胆红素指标，以及患儿母亲抗体效价，来分析孕妇血型抗体的效价与HDN发生率及溶血程度的关系。本研究结果显示，在本院生产200例夫妇ABO血型不合、IgG抗A(B)效价≥64的孕妇，其产后婴儿经血型血清学试验证实为母婴血型不合的ABO-HDN共 131例，发生率为65.5%，说明产前检测血型IgG抗体效价≥64可以预测HDN的发生率。血型分布间阳性率差异无统计学意义(P>0.05)，说明血型抗体的种类与HDN发病无关。

产后经溶血3项试验确证为HDN的患儿进行血清间接胆红素检测，然后将血清间接胆红素与母亲血型IgG抗体效价进行关联分析，结果显示，随母体血型抗体效价的升高，患儿血清间接胆红素水平有升高趋势，说明母体血型IgG抗体效价水平可以预示患儿血清间接胆红素水平。但孕期抗体效价正常者也可发病，且抗体效价≥256者新生儿发病时间也有可能发生滞后发病的情况[3]，这可能是因为母亲在怀孕前，就有可能接触过产生高效价的血型IgG抗体的原因，但同时还与胎儿或新生儿红细胞A/B抗原的强弱程度、胎盘屏障作用、血型物质含量的多少以及IgG亚类(IgGl和IgG3型抗体的量与溶血严重性有线性关系，IgG4则关系不大)等因素相关[4]。

导致新生儿胆红素升高病因有多种，如ABO及Rh溶血症、G6PD缺陷症(遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症)、早产因素、败血症等，由于我国人口众多，医疗资源地区间分布很不平衡，且亚洲人本身又是高胆红素血症的高危人群，近年来有研究指出[5]，我国胆红素脑病和核黄疸的发生率高于西方国家，且高胆红素血症导致胆红素脑病的新生患儿中伴发ABO及Rh溶血的发生率为35.9%，可见母婴血型不合溶血病是胆红素升高的主要病因。综上所述，对夫妇ABO血型不合进行产前母抗体效价检测，能部分判断HDN病的发生，但应与产后临床相结合，以便对该病有更好的预防和诊断。

参考文献：

[1]张樱子，赵玉河，高冀辉，等.不规则抗体筛选在新生儿溶血病中的临床诊疗[J].临床血液学杂志，2014，27(8)：656.

[2]肖倩,辛荣传, 周益强,等.孕母IgG抗体效价与新生儿溶血病发病率的相关性研究[J].中国妇幼保健,2009，24(1):72.

[3]陶华.产前检测抗体预防母儿ABO血型不合新生儿溶血病259例临床观察[J].中国妇幼保健,2011,26(20):3085.

[4]白英明，赖福才，王梁平，等.血型不合夫妇孕妇产前新生儿溶血病特异性抗体效价的评估[J].广东医学2009，30(7)：1142.

[5]Subspecialty Group of Neonatology, Society of Pediatrics, Chinese Medical Association，Chinese Multicenter Study Coordination Group for Neonatal Bilirubin Encephalopathy.Clinical characteristics of bilirubin encephalopathy in Chinese newborn infants-a national multicenter survey[J].Zhonghua Er Ke Za Zhi,2012,50(5):331

收稿日期：(2014-03-11)

文章编号：1007-4287(2015)04-0629-03

通讯作者*

基金项目：吉林省卫计委基金(3D5140523430)