中药复方稳心颗粒对家兔心肌缺血/再灌注损伤的影响

周昌盛，孙小祥

中药复方稳心颗粒对家兔心肌缺血/再灌注损伤的影响

周昌盛1，孙小祥2*

目的研究复方中药制剂稳心颗粒对心肌缺血/再灌注损伤家兔模型的保护作用。方法36只家兔随机分为假手术组(阴性对照组)、模型组、三七颗粒组(阳性对照组)及稳心颗粒低、中、高剂量组(给药组)。阳性对照组家兔灌胃三七颗粒0.4 g/(kg·d)，给药组家兔分别灌胃稳心颗粒0.4、0.6、0.8 g/(kg·d)，其余两组灌胃等体积生理盐水；给药1周后，采用结扎冠状动脉前降支方法制备家兔心肌缺血/再灌注模型，观察各组家兔心电图，并检测血清丙二醛(MDA)含量，以及乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果与假手术组比较，模型组室性心律失常发生率、血清CK与LDH活性、MDA含量升高(P<0.05)，而SOD活性降低(P<0.05)，表明家兔心肌缺血/再灌注模型成功；与模型组比较，阳性对照组和给药组室性心律失常发生率、血清CK与LDH活性、MDA含量均显著降低(P<0.05)，SOD活性升高(P<0.05)，且给药组表现出明显的剂量效应。结论稳心颗粒对家兔心肌缺血/再灌损伤有保护作用。

稳心颗粒；三七；缺血/再灌注

0　引言

心肌缺血容易造成心肌结构和功能上的损伤[1]，临床常采用手术治疗，如经皮冠状动脉腔内成形术、溶栓治疗和冠状动脉旁路移植术等，但受损的心肌很难恢复正常的功能结构，而且手术可能导致损伤加重，如再灌注心律失常、内皮损伤和心肌顿抑等[2-3]。目前，中医药在心肌缺血的治疗中取得了较好的效果[4-7]。有报道，使用稳心颗粒治疗各种类型的心律失常效果显著[8]，且毒性低、不良反应小，但其现代药理作用机制并不明确。本研究通过建立心肌缺血/再灌注损伤的家兔模型，从现代药理作用层面探讨稳心颗粒对心肌缺血损伤的影响。

1　仪器与试剂

1.1动物大耳白兔36只，雄性，体重2.2～2.5 kg，江苏大学实验动物中心提供，适应性饲养3 d。

1.2试剂稳心颗粒(山东步长制药有限公司，批号：111053)；自制三七颗粒(每3 g相当于三七原药材1 g)；丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase，LDH)和磷酸肌酸激酶(Creatine kinase，CK)试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.3仪器日本KO-HDENE(G-651)型心电图机；美国LIFDAK9P型心电监护仪；日本岛津CL-7300全自动生化分析仪；德国SiGMA 1-13台式离心机。

2　方法

2.1分组及给药将36只家兔随机分为假手术组(阴性对照组)、模型组、三七颗粒组(阳性对照组)及稳心颗粒高、中、低剂量组(给药组)，每组6只。假手术组和模型组每天以生理盐水5 mL/kg连续灌胃7 d；阳性对照组以三七颗粒0.4 g/kg溶于生理盐水中，连续灌胃7 d；给药组分别以稳心颗粒0.4、0.6、0.8 g/kg溶于生理盐水后，连续灌胃7 d。

2.2手术造模[9]各组家兔末次给药1 h后进行手术或假手术造模。按照30 mg/kg剂量静脉注射戊巴比妥钠将家兔麻醉，记录肢体Ⅱ导联心电图。沿家兔左胸骨边缘切断3、4肋软骨，暴露心脏，剪开心包膜，于左冠状动脉前降支近起始部7 mm处用3-0丝线结扎阻闭血管。家兔心电图Ⅱ导联ST段升高，T波高耸，结扎线以下心肌组织颜色变苍白再变暗，提示心肌缺血造模成功。30 min后松开血管，恢复左前降支血流，再灌注60 min。假手术组只穿线不结扎。

2.3心律失常率各组家兔均于心肌缺血模型复制成功后进行心电监护[10]，模拟标Ⅱ导联至再灌注后60 min，记录再灌注性心律失常发生的次数，与模型组比较计算心律失常率。

2.4血清各指标测定[11]各组家兔均于再灌注60 min时取颈内动脉血2.0 mL，自然凝血后离心，取上层血清，采用全自动生化分析仪检测LDH、CK活性；采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸盐法试剂盒测定血清中的SOD活性和MDA含量。

2.5统计方法采用Graphpad 5.0软件，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

3　结果与分析

3.1各组家兔再灌注性心律失常率的比较见表1。由表1可见，各组家兔室性心律失常的发生率均高于假手术组，提示造模成功。阳性对照组和给药组室性心律失常发生率显著低于模型组(P<0.01)，表明稳心颗粒具有对抗再灌注性心律失常的作用。另外，稳心颗粒中、高剂量组心律失常率低于低剂量组(P<0.05)，提示该中药复方制剂对抗家兔再灌注性心律失常具有明显的剂量效应。

表1　各组家兔再灌注性心律失常的发生率比较(n=6)

3.2各组家兔血清CK、LDH活性比较见表2。由表2可见，与假手术组比较，其余各组血清CK与LDH活性明显升高(P<0.05)，提示心肌缺血/再灌注对心肌组织有损伤作用。与模型组比较，三七颗粒组及稳心颗粒各剂量组CK与LDH活性降低(P<0.05)，而稳心颗粒中、高剂量组降幅较大，超过了阳性对照组，提示稳心颗粒能有效抑制兔缺血再灌注时心肌酶的溢出，具有保护心肌细胞膜的作用。

表2　各组家兔再灌注60 min的CK、LDH值比较(U/L)

注：与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

3.3各组家兔血清SOD活性及MDA含量比较见表3。由表3可见，与假手术组比较，模型组的SOD降低，MDA含量升高(P<0.05)，提示心肌缺血/再灌注对家兔心肌造成了脂质过氧化损伤；与模型组比较，三七颗粒对照组和稳心颗粒各剂量组SOD升高，MDA降低，说明稳心颗粒可升高缺血再灌注心肌组织SOD水平，降低MDA含量，从而恢复心肌功能。

表3　各组家兔再灌注60 min的SOD、MDA值比较

注：与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05

4　讨论

根据氧自由基学说，心肌缺血再灌注后，会产生大量自由基，形成脂性自由基和脂过氧化物，改变了心肌细胞膜脂质环境，使膜的基本特性发生变化，如细胞膜通透性增加，细胞内的酶如LDH及CK扩散至细胞外[12]，从而引起心肌细胞的结构及功能障碍，诱发心律失常。本研究采用结扎冠状动脉前降支方法制备家兔心肌缺血/再灌注模型，测定血液中的LDH、CK等酶的活性，以评价缺氧所致组织受损的程度，同时测定血液中SOD活性和MDA含量等作为反映脂质过氧化损伤程度的指标。结果显示，各组家兔手术造模后出现心肌缺血，血液中SOD活性降低，MDA含量增加，表明血液中氧自由基大量增加；血清中LDH、CK活性增加，表明膜的基本结构、特性发生了破坏，从而导致室性心律失常发生。该模型有效模拟了心肌缺血及手术再灌注引起的心律失常。

先前研究表明，单味中药三七能有效改善心肌缺血/再灌注后心律失常发生率[9,13-14]，本研究考察复方中药稳心颗粒治疗再灌注性心律失常的药理机制。稳心颗粒由党参、黄精、三七、琥珀、甘松等中药组成，临床上应用稳心颗粒治疗各种类型的心律失常均取得了较好的疗效[7,15]。《内经》认为，心脉气血不足，治当重调脾胃，以补益为主，脾充胃旦，则气血生化有源。党参甘平入脾经，能补中益气，安精神，止惊悸，为君药。黄精甘平，补脾气而润心肺，辅助党参，益气以生血，为臣药。气虚血少，心脉不充，运行必然不畅，多由滞而成瘀，故虚中多夹瘀血。三七甘而微苦性温，行瘀止血定痛，而兼有补益之力；琥珀甘平，活血化瘀兼平肝安神之效。故用三七、琥珀为佐药。本中药组方临床应用多年，适用于早搏及快速性心律失常。本研究结果表明，该方能降低心肌缺血再灌注的心律失常发生率，显著减少心肌细胞释放心肌酶，降低脂质过氧化物，对兔心肌缺血再灌注损伤有显著的保护作用，疗效优于单味三七。

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Cardioprotective effects of wenxin granules on myocardial ischemia/reperfusion injury in rabbits

ZHOU Chang-sheng1,SUN Xiao-xiang2*

(1.Department of Pharmacy,The People′s Hospital of Rugao,Rugao 226500,China;2.Department of Pharmacy,Zhenjiang Hospital of Traditional Chinese Medicine,Zhenjiang 212003,China)

ObjectiveTo observe the protective effect of wenxin granules (WXG) on myocardial ischemia/reperfusion injury in rabbits.MethodsThirty-six rabbits were randomized into 6 groups: sham operation group (negative control group),model group,Radix notoginseng group (positive control group),WXG low,middle and high dosage group (medication groups).Rabbits in above groups were given i.g.physiological saline,Radix notoginseng granule and low,middle,high dosages of WXG (5 mL/kg) for 7 d respectively.The myocardial ischemia/reperfusion models of rabbits were induced by coronary artery occulsion.The ventricular tachycardia was recorded,the levels of CK,LDH,MDA,SOD were measured.ResultsCompared with sham operation group,the arrhythmia incidence,CK,LDH,MDA levels of model group increased,and the SOD activity decreased significantly (P<0.05).Compared with model group,the arrhythmia incidence,CK,LDH,MDA levels of positive control group and WXG groups decreased,and the SOD activity increased significantly (P<0.05).In addition,there was a dose-dependent effect in WXG low,middle and high dosage groups.ConclusionWXG is effective in protecting the myocardium against myocardial ischemia/reperfusion injury in rabbits.

Wenxin granules;Radix notoginseng;Ischemia/reperfusion

2014-12-27

1.如皋市人民医院药剂科，江苏 如皋 226500；2.镇江市中医院，江苏 镇江 212003

镇江市科技计划项目(HS2014069)

10.14053/j.cnki.ppcr.201508006

*通信作者