奶牛妊娠的实验室诊断方法

奶牛妊娠的实验室诊断方法

那仁巴特

(新疆博乐市小营盘畜牧兽医工作站833400)

孕期的动物因胎盘和胎儿的影响，母体的新陈代谢会出现改变，其体内的血、尿、乳成分产生了较大的改变，因此可以通过对这些成分的变化检测来确定其是否妊娠，可以作为诊断的依据。早期妊娠诊断中，进行了很多的探索，可是却没有找到比较完美的实验室诊断方法，比较可靠优秀的妊娠诊断需要包含下列的要求：①在配种后一个发情周期之内显示出诊断结果。②妊娠诊断的诊断准确率应在85%以上。③对母体和胎儿安全无害。④方法简便、经济实用。实验室进行动物妊娠诊断的方式有很多，本文主要是对其中使用较多，效果较好的一些方法进行了阐述，并对其应用前景进行介绍。

1　牛乳孕酮诊断法

因为妊娠，动物的血液、乳中会有较高的孕酮浓度，在配种后18～24天时牛妊娠的早期，其体内会有内分泌改变，对妊娠早期奶牛的孕酮进行测量，可以确定是否发生了妊娠，根据临床研究显示，奶牛早期妊娠的最佳诊断时间就是在配种后23天对其孕酮情况进行分析。

孕酮-ELISA(P-ELISA)诊断法：P-ELISA诊断法利用抗原(孕酮)、酶标抗原 (酶标记孕酮)与抗体(孕酮抗体)的饱和竞争性结合反应原理，来监测乳样中孕酮浓度的高低，依据反应系统中所产生的颜色(蓝、黄和粉红)深浅程度，用肉眼定性孕酮在乳样中的浓度范围，从而达到妊娠诊断的目的。荷兰等国已生产出相应的商品性P-ELISA诊断试剂盒，但我国尚无此类型的商品试剂盒上市，此方法早期妊娠诊断的准确率为84．5%，成本较高。

孕酮乳胶凝集抑制试验：①诊断原理：孕酮乳胶凝集抑制试验(PLAIT)是一种利用孕酮单克隆抗体和由孕酮包被的胶珠进行乳汁孕酮快速定性测定的免疫学方法。其诊断原理是将孕酮包被在特化的乳胶珠上，使奶样中的游离孕酮和胶珠上的孕酮竞争与单克隆抗体上的有限位点相结合，以此来定性显示乳样中孕酮水平高低。②诊断方法：混合乳样、孕酮克隆抗体、孕酮包被乳胶珠，混合物可以在玻片上发生作用，与溶液产生乳汁薄膜。乳样的孕酮含量比较高时，游离孕酮和孕酮抗体之间会发生反应，在玻板小室形成乳膜，如果孕酮含量低，那么就会有颗粒乳膜产生，这是因为乳胶凝集的原因。该诊断方式在各检验室都能够完成，因为其没有复杂昂贵设备的要求，使用方便，成本比较低，其使用也比较广泛，是比较常用的一种检测方式。

2　早孕因子检测法

妊娠期的母体中会有早孕因子(EPF)，该因子属于免疫抑制因子，可以让胎儿避免免疫排斥，能够存活于母体内，因此该因子也是作为早孕检测的一种重要指标。早孕因子一般是在交配后6～48小时出现，可以通过玫瑰花环抑制试验来进行检测，该方法能够为早期妊娠诊断以及受精检查提供依据。现在有很多的动物都可以检测到早孕因子，像是人、猪、羊等，而且早孕因子不仅仅是作为妊娠检查指标，在不孕症诊断、胚胎移植中有着一定的作用。

哺乳动物的遗传信息一半来自父亲，一半来自母亲，来自父亲那一半属于母体外来物，可是母体在妊娠期却并没有对胎儿产生排斥的情况。有一些关于该类情况的研究表明，母体可以对这些为本体外来物进行忍受是因为在母体妊娠后，自身的免疫力合防御机能会减弱，此外，早孕因子会在受精后的几个小时内产生对母体细胞免疫的抑制物，这样就避免了胚胎受到母体防御机制的攻击，因此胚胎在母体内的存货和发育都需要依靠早孕因子。

现在，早孕因子的检测还只能采取玫瑰花环抑制试验来进行检测，该方法具有比较高的灵敏度，其对设备的要求也并不高，可是因为需要较多的时间，以及存在一定的变异性，还有就是特异性不佳，这些因素导致了其无法在生产中大范围的使用。能够寻找到快捷、特异性强的早孕因子检测方法。

3　胶体金法

该种方法是目前对牛妊娠快速诊断的一种方法，快速、低廉、准确，因此在生产中使用也是比较多的，该种诊断使用的试纸和人妊娠使用的检测试纸比较相似。

我国对于该种试纸还在研发过程，国外有相关的产品出现，可是由于奶牛每年都在怀孕和泌乳，因此其体内的绒毛膜促性腺激素(HCG)会长期存。

国外的相关检测试纸，也无法单纯使用肉眼来进行判断，还需要有仪器设备的帮助，将仪器和挤奶机连接，进行挤奶的时候，同时进行诊断。