家畜布氏杆菌病的血清学诊断方法

（宁夏同心县农牧和科学技术局 751300）

（宁夏同心县农牧和科学技术局 751300）

1 平板凝集反应

操作步骤：最好用平板凝聚试验箱。无此设备可用清洁玻璃板，划成4 cm2方格。横排5格，纵排可以数列，每排第一格写血清号码，用0.2 mL吸管将血清以0.08、0.04、0.02、0.01 mL分别依次加于每排4小方格内，吸管须稍顷斜并接触玻璃板，然后以抗原滴管垂直于每格血清上滴加1滴平板抗原，或用0.2 mL吸管每格加0.03 mL。用牙签或金属棒将血清抗原混合，均匀。一份血清用一根牙签，以0.01、0.02、0.04的顺序混合。

混合完毕后将玻板均匀加温约30℃左右，5～8 min按下列标准记录结果：#：出现大凝集片或小粒状物，液体完全透明，即100%凝集。+++：有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透明，即75%凝集。++：有可见凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集。+：仅仅可以看见颗粒，液体浑浊，即25%凝集。—：液体均匀浑浊，无凝集现象。

平板凝集反应血清量分别为0.08、0.04、0.02 和0.01 mL加入抗原后，其效价相当于试管凝集价的1：25、1：50、1：100和1：200。每批次平板凝集试验须以阴、阳性血清作对照。

结果判定：判定标准与试管凝集反应相同。结果通知单在血清凝集价的格内分别换成为0.08（1：25）、0.04（1：50）、0.02（1：100）和0.01（1：200）。每批次平板凝集试验须以阴、阳性作对照。

2 虎红平板凝聚试验

材料准备：目前在国内只有中国医学科学院微生物学研究所生产供应布氏杆菌虎红平板试验抗原，可按说明书使用。阴、阳性对照同于试管凝集反应的阴阳性血清。

操作步骤：被检血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各0.3 mL滴于玻璃板的方格内，每份血清各用1根火柴棒混合均匀。在室温（20℃）4～10 min内记录反应结果。同时以阳、阴性血清作对照。

结果判定：在阳性血清及阴性血清试验结果正常的对照下。被检血清出现任何程度的凝集反应均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可疑反应。

3 全乳环状反应

材料准备：抗原由兽医生物制品厂生产供应。全乳环状反应抗原有2种，一种为苏木紫染色抗原，呈蓝色。另一种是四氮唑染色抗原，呈红色。被检乳汁须为新鲜全脂乳。凡腐败、变酸和冻结的不适于本试验用（夏季采集的乳汁应于当天内检验，如保存于2℃时，7天内仍可使用）。患乳房炎及其他乳房疾病的乳汁、初乳、脱脂乳及煮沸乳汁也不能作环状反应用。

操作步骤：取新鲜全乳1 mL加入小试管中，加入抗原1滴（约0.05 mL）充分振荡混合。置37～38℃水浴中60 min。小心取出试管，避免振荡，立即进行判定。

判定标准：判定时不论哪种抗原，均按乳脂的颜色和乳柱的颜色进行判定。

强阳性反应（+++）乳柱上层的乳脂形成明显红色或蓝色的环带，乳柱呈白色，分界清楚。阳性反应（++）：乳脂层的环带虽呈红色或蓝色，但不显著，乳柱微带红色或蓝色。弱阳性反应（+）：乳脂层环带颜色较浅，但比乳柱颜色略深。疑似反应（±）：乳脂层环带不甚明显，并与乳柱分界模糊，乳柱带有红色或蓝色。阴性反应（—）：乳柱上层无任何变化，乳柱呈均匀浑浊的红色或蓝色。

4 补体结合反应

材料准备：溶血素、补体、绵羊红细胞（2.5%）来源于一般补反试验。抗原和阴、阳性血清，由兽医生物药品厂生产供应，按说明书使用。试验所用稀释液用生理盐水。

被检血清以及阴、阳性血清在试验时用生理盐水1：10稀释：羊、马血清58～59℃，驴、骡血清63～64℃，牛、猪血清56～57℃，骆驼54℃。溶血素及补体效价的滴定，与一般补反试验相同。溶血素使用2个工作量，补体使用1个工作量。布氏杆菌补反抗原滴定与鼻疽补反抗原滴定在术式上相同，而布氏杆菌补反抗原在实际应用的稀释度应比滴定的效价浓度为25%。

被检血清的正式试验：正式试验的各种成分即所准备的灭能被检血清及对照阴阳性血清、生理盐水、稍浓于1个工作量抗原，1个工作量的补体，2个工作量的溶血素及2.5%的红细胞。每种成分加入量为0.5 mL，各反应成分的总量为2.5 mL。每份被检血清设置2个管，其中1支不加抗原作为对照。每批被检血清试验的对照管共7支，阳性血清2支，其中1支不加抗原，阴性血清2支，其中1支不加抗原；抗原对照管1支不加血清；溶血素对照管1支，不加血清，抗原及补体，补体对照管1支，只加补体及红细胞。不足2.5 mL的对照管，均以生理盐水补足2.5 mL。试验中的2次加温，均为37～38℃水浴20 min。

各试验管加温完毕后，取出立即进行第一次判定。要求不加抗原的阳性血清对照管，阴性血清对照管及抗体对照管呈完全溶血反应。静置12 h后作第二次判定，第二次判定时要求溶血素对照管，补体对照管呈完全不溶血反应。此时即可对被检血清进行判定。被检血清不加抗原管应是完全溶血，而加抗原管的判定记录结果。

家畜布氏杆菌病的血清学诊断方法

马晓梅，马晓英，毛航平